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쥼物设计全攻略✨ 打开PubMed网站,点选NIH,开始你的基因探索之旅! ᠩ择“Gene”,输入你心仪的目的基因,比如mouse、rat或human哦~ 点击基因名字,进入下一步,别急! 点击NCBI,连接世界基因库,轻松获取信息。 在mRNA and protein区域,找到并点击第一个序号。 𛃄S,进入关键步骤,别错过! 复制棕色序列,一定要全部复制,这是关键数据哦! 打开生工网站,选择技术服务-常规引物合成,开始你的引物设计之旅! 寸 点击在线生成引物,选择SYBR,让引物设计更精准。 选择物种,输入基因名称,粘贴刚才复制的序列,提交你的设计! 在引物设计列表中查看已提交的序列,等待奇迹出现吧!
쒔-qPCR实验全攻略ኰ犥ꌥ备: 1️⃣ 引物合成:引物是qPCR实验的关键,可以找专业公司设计,确保特异性。 2️⃣ 溶解引物:干粉引物需4℃离心后加水溶解至10工作液。 3️⃣ 配制体系:将相同试剂配成mix,便于加样,减少误差。 4️⃣ 封板操作:注意避免cDNA挂壁,影响实验结果。 5️⃣ 上机设置:延伸阶段必须添加信号搜集,确保扩增曲线准确。 结果分析: ✅ 关注CT值同时,更要检查溶解曲线及扩增曲线。 ✅ 熔解曲线应为单峰,双峰可能提示引物二聚体或特异性差。 ✅ 扩增曲线应呈光滑S型,反映实验质量。 ᥰ贴士:选择合适引物和试剂,确保实验准确性和可重复性。
젥觉饮验服务一站式解决方案 찟犦们提供全面的动物实验服务,满足您的各种需求。无论您是在进行动物造模、大小手术模型、药物诱导模型,还是需要进行模型评价监测、行为学检测、影像检测、生化生理指标检测等,我们都能提供专业的支持。 在细胞培养方面,我们提供细胞爬片、细胞转染、流式细胞术、慢病毒包装、细胞划痕、细胞迁移、细胞侵袭、稳定株筛选等一系列服务。在病理学方面,我们提供硬组织切片、不脱钙切片、脱钙软化包埋切片、染色、特殊染色、免疫组化、免疫荧光、病理图像采集等服务。 在分子生物学领域,我们提供荧光定量PCR服务、miRNA检测、DNA定量甲基化测序、质粒提取、质粒构造、菌种鉴定、慧星实验、引物合成等。在蛋白质组学方面,我们提供蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、单克隆抗体制备、原核表达、免疫沉淀、免疫共沉淀、SILAC标记定量蛋白质组学、ELISA检测等。 此外,我们还提供生化检测服务,包括血细胞分析、组织样本匀浆、肝功能检测、肾功能检测、心肌酶谱检测、血常规检测、血脂检测、血糖检测、凝血因子检测等。在基因组学和转录组学领域,我们提供单细胞测序、蛋白质组学和代谢组学等服务。 无论您的项目需求是什么,我们都能提供专业的解决方案。欢迎联系我们,获取更多信息。
动物实验中心,揭秘动物实验! 欢迎来到北京动物实验中心,这里是探索动物实验的奇妙世界! 动物造模服务 🯸 我们提供各种动物手术模型,包括大小动物模型,以及药物诱导模型。我们进行的行为学检测、影像检测、生化生理指标检测等,确保模型的准确性。 细胞实验 슧𛆨培养、细胞爬片、细胞转染、流式细胞术、慢病毒包装、细胞划痕实验、细胞迁移、细胞侵袭、稳定株筛选、原代细胞分离等,我们都有专业的服务。 病例学检测 从硬组织切片到免疫组化,我们提供全面的病例学检测服务。包括不脱钙切片、脱钙、软化、包埋、切片、染色、特殊染色、免疫荧光、病理图像采集等。 分子生物学检测 슨祅定量PCR、miRNA检测、DNA定量、甲基化测序、质粒提取、质粒构建、菌种鉴定、彗星实验、引物合成等,我们提供专业的分子生物学检测服务。 蛋白相关检测 estern Blot、蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、单克隆抗体制备、原核表达、免疫沉淀、免疫共沉淀、SILAC标记定量蛋白质组学等,我们都有专业的检测方法。 快速检测服务 ⚡ ELISA检测、生化检测、血细胞分析、组织样本匀浆、肝功能肾功能、心肌酶谱、血常规、血脂、血糖、凝血因子、尿常规等,我们提供快速的检测服务。 组学服务 基因组学、转录组学、单细胞测序、蛋白质组学、代谢组学、10X Genomics等,我们提供全面的组学服务。 欢迎各位老师前来参观,探索更多动物实验的奥秘!
生物竞赛生必看!基因工程大题满分攻略 嘿,生物竞赛的小伙伴们!今天咱们来聊聊基因工程那些事儿,特别是如何在大题中秒杀对手。准备好了吗?Let's go! 引物的作用 슥饰𑥃是DNA聚合酶的导航仪,让它们知道在哪里开始复制。通常,引物会选择5’→3’的方向延伸,有些题目会涉及到酶切位点或融合基因序列,这时候你就需要找到对应的互补序列。 合成引物的前提 首先,你得有一段已知的目的基因的DNA序列,这样才能设计出合适的引物。 限制酶酶切位点的选择 ✂️ 限制酶的酶切位点一般放在5’端,这样可以避免影响引物的正常延伸。 基因表达载体的基本元件 一个完整的基因表达载体需要包含复制原点、启动子、目的基因、终止子和标记基因。 启动子的作用 劥壘襭就像是RNA聚合酶的钥匙,让它们知道从哪里开始转录。 标记基因的用途 记基因用来筛选那些成功导入重组质粒的细胞。 如何获取cDNA 通过提取某个生物的全mRNA,然后逆转录形成cDNA。cDNA不含启动子、终止子和内含子,这样可以避免不同生物基因无法表达的问题。 cDNA文库的优点 使用cDNA文库可以方便快捷地克隆基因,尤其是克服原核生物和真核生物基因结构不同的困难。 单酶切的潜在问题 능酶切可能会导致质粒自身环化、目的基因自身环化或者目的基因反向连接。 标记基因的复杂性 銦时候,即使只有一种标记基因的重组表达载体导入个体,也不一定说明重组成功,因为空白质粒也可能含有标记基因。所以,一般会用双抗性基因鉴定方法。 如何将目的基因导入受体细胞 𑊦䍧駻胞:农杆菌转化法(双子叶、裸子植物)、花粉管通道法(我国首创)、基因枪法(单子叶植物) 动物细胞:显微注射法(注射受精卵) 微生物细胞:Caⲫ感受态法(使微生物处于一种易于吸收外界DNA分子的状态) 农杆菌转化法的T-DNA 杆菌转化法中,T-DNA是转移DNA,负责将目的基因转移到植物细胞中。 好了,今天的分享就到这里。希望这些小技巧能帮到你们,在生物竞赛中取得好成绩!加油!ꀀ
쩫通量测序的神奇原理✨ Solexa测序:边合成边测序的魔力 Solexa测序法,一种单分子阵列测试技术,让你领略高通量测序的奥秘!首先,从细胞中提取DNA,随机打断并回收100-200bp的片段。这些片段经过接头连接,被精准地放置在测序玻璃片上。玻璃片上的序列与接头片段互补,实现原位扩增。在接下来的边合成边测序过程中,四种荧光标记的染料与聚合酶一同加入单分子阵列。通过酶的作用,荧光标记的核苷与引物结合,延伸单链DNA分子。利用生物发光蛋白,如萤火虫的荧光素酶,检测碱基加到引物后端时释放的焦磷酸盐信号。激光激发特定波长的荧光,CCD快速扫描并采集这些信号,从而确定每个碱基。 ᴵ4测序:焦磷酸测序的神奇之处 454测序技术,依靠生物发光进行DNA序列分析,展现了高通量测序的新高度!在DNA聚合酶、ATP硫酸化酶、荧光素酶和双磷酸酶的协同作用下,每一个dNTP的聚合与荧光信号释放紧密相连。通过检测荧光信号的有无和强度,实时测定DNA序列。无需荧光标记的引物或核酸探针,无需电泳,快速、准确、灵敏度高且自动化!Roche GS FLX System就是基于这一原理的高通量基因组测序系统。四种碱基依次进入PTP板,发生碱基配对时释放焦磷酸。在酶的作用下,经过合成和化学发光反应,最终氧化荧光素并释放光信号。这些光信号被高灵敏度CCD实时捕获,从而准确、快速地确定待测模板的碱基序列。
[火焰]实验检测之RT-PCR检测[火焰] RT-PCR实验检测介绍 实时荧光PCR(real-time PCR),属于定量PCR(Q-PCR)的一种,以时间内DNA的增幅量为基础进行DNA的定量分析。定量方式包括定量和相对定量。可检测mRNA,microRNA,lncRNA和DNA水平的基因拷贝数变化。 服务流程 1、引物设计与合成 2、DNA/RNA抽提 3、反转录(针对RNA) 4、上机定量分析 客户提供 1、全血、组织或细胞。 2、引物,或由丰核提供。 3、基因信息:目的基因名称、物种和序列(或GenBank Accession Number)。#伊莱博生物#
쐃R、QPCR、RT-PCR全攻略 젦⧴␃R、QPCR和RT-PCR的奇妙世界!从RNA反转录到cDNA的合成,再到DNA的扩增,每一步都充满了科学的魅力。 1️⃣ RNA抽提:采用TRlzol法,借助苯酚的强力裂解作用,轻松获取RNA。准备好试剂耗材和样品,经过一系列离心和沉淀步骤,就能得到纯净的RNA啦!ꊊ2️⃣ RNA质量检测:分光光度计和凝胶电泳法是你的得力助手,确保RNA的纯度和完整性。 3️⃣ 反转录:以RNA为模板,借助反转录酶的力量,合成与RNA互补的cDNA。选择合适的引物,让反转录更加高效。ኊ4️⃣ PCR程序:三步法让你轻松掌握DNA扩增的诀窍。高温变性、低温退火、延伸,每一步都精准控制,确保DNA的准确复制。劊 现在,你已经掌握了PCR、QPCR、RT-PCR的全教程!快来试试吧,用科学的力量探索生命的奥秘!
「医学考研超话」「考研西综必背」 [星星]糖原合成与分解 1.合成过程 (1)葡萄糖活化为UDPG;(2)糖原合成的起始需要引物(糖原蛋白);(3)糖原合成是耗能过程:每延长1个葡萄糖基,需消耗2个ATP。 2.糖原合成和分解的鉴别:如图 3.调节:糖原分解在肝内主要受胰高血糖素调节,在骨骼肌主要受肾上腺素的调节。
젒T-PCR实验全攻略:从原理到实践 目录 cDNA与反转录 RT-PCR原理与目的 RNA抽提与质量检测 反转录过程 PCR程序与引物设计 PCR酶与体系 PCR产物检测 实时荧光定量PCR(RT-qPCR) 常见问题与注意事项 젣DNA与反转录 cDNA(互补DNA):与RNA链互补的单链DNA。在适当引物的存在下,由DNA聚合酶即反转录酶合成的单链DNA就是cDNA。 反转录(Reverse Transcription):在反转录酶的作用下,以RNA为模板合成DNA的过程。合成的DNA链称为与RNA互补的DNA,即cDNA。 젒T-PCR原理与目的 原理:RT-PCR全称反转录聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction),将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增(PCR)相结合的技术。 目的:检测核酸的表达,主要是RNA的表达。DNA不需要反转录的过程,直接PCR检测即可。 젒NA抽提与质量检测 RNA抽提方法:TRIzol法。主要成分包括苯酚,用于裂解细胞和变性蛋白。 RNA质量检测:分光光度计测定、凝胶电泳法。 젥转录过程 以RNA为模板合成cDNA的过程。在这个过程中,遗传信息的流动方向与转录时相反,因此称为“反转录”。需要反转录酶,合成的DNA称为与RNA互补的DNA(cDNA)。根据不同情况选择不同的反转录引物。 점CR程序与引物设计 PCR程序:三步法,包括变性、退火和延伸三个基本反应。 引物设计:找到目的基因的CDS序列,用软件设计和评价引物,并使用BLAST进行引物特异性检测。引物长度为15-30bp,最常用的为23bp;引物Tm值介于62-73℃之间,上下游引物Tm最好相近以保证其能高效工作;3'-端的Tm值要低于5'端;引物GC含量约为40-60%;避免扩增模板的二级结构域;避免引物的二级结构;避免与靶DNA错配。 점CR酶与体系 PCR酶:可选择普通的Taq酶、可扩增长片段的Taq酶或高保真酶。 PCR体系:按所选的PCR酶说明书来配制。 점CR产物检测 一般采用琼脂糖凝胶电泳,必要时也可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳。 젥𖨍祅定量PCR(RT-qPCR) 基本原理:在PCR体系中加入能够指示DNA片段扩增过程的荧光染料或荧光标记的特异性探针,通过对PCR过程中产生的荧光信号累积或荧光标记的特异性探针释放的荧光信号进行监测和记录,实时监测整个PCR进程,再结合软件对获得的荧光信号数据进行分析,计算待测样品中特定DNA片段的初始量。 扩增过程:包括荧光背景信号阶段、荧光信号指数增加阶段和荧光信号平台期阶段。 常见问题与注意事项:在进行RT-PCR实验时,需要注意实验条件的选择、引物的设计、RNA的质量控制以及实验操作的规范性等问题,以确保实验结果的准确性和可靠性。
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固相亚磷酰胺三酯法合成引物的图示和具体步骤如下
探针引物合成
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引物设计与合成
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修饰标记引物合成
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引物合成服务
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pcr引物二聚体和逆转录体系中某些组分的抑制会影响pcr
混样方式:先预混合每个基因(包括实验组和对照组)的mix,引物和h2o,将
72℃左右tm值primer外文名人工合成的两段寡核苷酸序列属性rna引物
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合成生物学
引物合成技术服务:掌握分子生物学实验的核心技巧
引物合成服务
data-lemmaid="7643424">rna引物</a>/引子
通用引物 27f/1492r/its1/its2/its3/its4 pcr试剂 支持引物合成
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