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液氮容器技术权威发布_液氮容器技术指标(2024年11月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-27

液氮容器技术

你还记得中国首例冷冻人展文莲吗？后来怎么样了还在继续冷冻吗？ 2017年5月8日的凌晨，癌症患者展文莲在病房内失去了呼吸和心跳。随即几位医生将她放入了-196℃的液氮容器中，成为了中国首例“生命延续”的冷冻人。丈夫桂军民满怀悲痛的与遗体进行了告别，并和妻子默默许下约定，30年后，凭借发达的医疗技术，将她再度“复活”，两人再续前缘。可转眼间还不到5年，桂军民的身边就出现了另一个异性的身影，两人在一起如胶似漆。那么这个陌生的女人是谁？桂军民还能否遵守他和妻子的“三十之约”呢？从同学走向夫妻 1984年9月，15岁的展文莲来到商河县第三中学复读。中考失利的阴霾笼罩着她的心头，她知道，自己不得不接受现实。就在展文莲为学习苦恼时，班上有个叫桂军民的男生，主动帮她辅导起了功课。之后二人成为好朋友。有了桂军民的陪伴，学习似乎变得没那么枯燥了，生活也多了一份期待。三年的时光如白驹过隙，转眼即逝。展文莲和桂军民都以优异的成绩考入了重点高中。此时二人互生情愫，希望在一个地方上学。然而，命运似乎总喜欢开玩笑。展文莲因家庭原因必须留在山东，而桂军民则考上了上海体育学院。分别前夕，他们约定每个月都要写信沟通。成年后，二人正式交往，做起了异地恋情侣。 1990年，桂军民和展文莲修成正果，正式结婚。婚后，为了照顾妻子，桂军民主动放弃上海的高薪职业，搬到商河县定居。这个决定让展文莲感动不已，她觉得自己嫁给了世界上最好的男人。然而，幸福的生活没能持续太久，一场灾难，悄然而至。突如其来的灾难 2016年，展文莲后背长了一个疙瘩，伴有咳嗽、胸闷等症状。起初，她以为只是普通感冒，但症状持续了一个多月都没有好转。 "军民，我总觉得胸口闷闷的，呼吸也有点困难。"展文莲有天晚上对丈夫说。桂军民立即带她去医院检查。经过多家医院的诊断，最终确诊为肺癌晚期。这个噩耗如同晴天霹雳，击碎了这个幸福家庭的美好生活。为了不让妻子承受太大的心理压力，桂军民选择隐瞒了病情的真相，只告诉她是肺部感染。他日夜陪伴在妻子身边，照顾她的饮食起居，陪她做化疗。 "文莲，你一定要坚强，我们一起战胜病魔。"桂军民握着妻子的手，眼中满是坚定。展文莲经过一段时间的化疗后，病情似乎有所好转。然而，好景不长，癌细胞很快转移到了脑部。医生告诉桂军民，展文莲的生命可能只剩下几个月了。桂军民感觉整个世界都崩塌了，他只好将真相告诉了妻子，两人抱头痛哭。但桂军民太爱自己的妻子了，他发誓，不管用什么办法，一定要治好妻子的病。就在这时，主治医生给他提供了一条道路。冰封患癌爱人主治医生告诉桂军民，现在有一种人体冷冻技术，可以将刚刚临床死亡的人体进行低温保存，等到未来医学技术发展到可以治愈致命疾病时，再将其复苏。抱着最后一丝希望，桂军民联系了山东的银丰生物科技研究院。在详细了解了技术原理和风险后，他决定让妻子尝试这项技术。 "文莲，如果有一天我们真的要分开，你愿意等我吗？哪怕要等很久很久。"桂军民握着妻子的手问道。展文莲虚弱地笑了笑："傻瓜，我们不是说好了要白头偕老吗？我会一直等你的。" 于是桂军民告诉妻子，想给她使用冷冻技术，保存身体。等到未来医疗技术可以战胜癌症之后，再将其解冻，治愈疾病。这样，两人又能重新在一起了。展文莲同意了，她在丈夫的陪同下，签署了遗体冷冻协议。她成为了国内首位进行冷冻生命延续实验的志愿者。协议规定冷冻时间是30年，平均每天消耗液氮约40升，每半个月左右要补充冷冻液，维持体征。一次补充费用是5万，之后如果有需要，可以继续续费。 2017年5月8日，银丰研究院的专家团队在医院严阵以待，他们准备好了冷冻设备，严阵以待。展文莲迎来了人生的最后一刻，她微笑着握着丈夫和儿子的手，用最后一丝力气说道：“等着我”，说完就离开了人世。专家团队立即开始了冷冻保存程序。他们首先为展文莲注射了防止血液凝固的药物，然后用特殊溶液替换了她体内的血液。接着他们给展文莲连接好呼吸机，排泄管，将她快速送往研究所。在所内，医生们开始对展文莲进行灭菌处理，保证她的身体不会被微生物破坏。最后，将她的遗体缓慢冷却到零下196摄氏度，装入充满液氮的特制容器中。此时展文莲的身体内部各种细胞都停止了运作，宛如睡着了一般。桂军民全程在窗外看着，他并没有哭泣，只是期盼着技术进步的那一天早点到来。之后，银丰研究院召开新闻发布会，宣布完成了中国首例人体低温保存实验。这一消息立即引发了社会各界的广泛关注和争议。有人质疑技术的可行性，也有人担心伦理问题。不过对于桂军民来说，这些争议都不重要。他只知道，他的爱人还在那里，等待着有朝一日能够重新睁开眼睛。丈夫“违约”，迎来另一女子为了保留妻子的生活痕迹，桂军民将家里的一切都保持原样。每个月，桂军民都会去银丰研究院"探望"妻子。他会坐在装有展文莲的容器旁，播放她生前最喜欢的音乐，跟她讲述这个月发生的趣事。为了让妻子醒来后能够了解这些年世界的变化，桂军民开始记录每年发生的大事。他还保存了大量的照片，并在每张照片背后详细注释拍摄的时间、地点和事件。 "这是我们小区举办的春节联欢会，大家都很想念你。"桂军民一边写着，一边轻轻擦去眼角的泪水。时光飞逝，转眼间已经过去了五年。在朋友们的劝说下，桂军民开始尝试重新生活。同事们还给他介绍起了对象，是个很像展文莲性格的女人。看着自己日渐衰老的身体，桂军民最终同意了见面。不过，他有两条要求：一是要理解他和妻子的情感，不反对他去看望展文莲，在冷冻技术上花钱。二是要照顾好他的生活，能陪同他到老。没想到对方竟然被他们的爱情打动了，女人同意了这两个要求，暂时住到了桂军民家。桂军民和女子相处的很融洽，他答应未来有一天，自己可能会和她结婚。尽管开始了新的生活，但桂军民从未忘记展文莲。每年展文莲的生日，他都会买一束她最喜欢的百合花，放在她的照片前。展文莲最喜欢的那件红色连衣裙仍然挂在衣柜里，她用过的化妆品还摆在梳妆台上。桂军民甚至保留了展文莲的社交账号，时不时地上线，让朋友们以为她还活着。然而，现实总是残酷的。展文莲的冷冻合同期限是30年，到期后如果技术仍未突破，将面临是否续签的选择。有时，桂军民也会怀疑自己的决定是否正确。夜深人静时，他会望着窗外的星空，喃喃自语："文莲，我们的选择对吗？"但每当看到展文莲的照片，他心中的信念就会重新坚定。 "也许有人会说我傻，但爱情不就是这样吗？它让人义无反顾，让人甘之如饴。"桂军民常常这样告诉自己。 #社会百态# 参考文章：中国新闻网：中国首例人体冷冻术家属：我感觉自己老了澎湃新闻：“中国首例人体低温保存”满一年，每天消耗液氮约40升作品声明：内容存在故事情节、虚构演绎成分

中国首例冷冻人展文莲，计划30年后复活，如今丈夫已有新欢？！ 2017年5月8日的凌晨，癌症患者展文莲在病房内失去了呼吸和心跳。随即几位医生将她放入了-196℃的液氮容器中，成为了中国首例“生命延续”的冷冻人。丈夫桂军民满怀悲痛的与遗体进行了告别，并和妻子默默许下约定，30年后，凭借发达的医疗技术，将她再度“复活”，两人再续前缘。可转眼间还不到5年，桂军民的身边就出现了另一个异性的身影，两人在一起如胶似漆。那么这个陌生的女人是谁？桂军民还能否遵守他和妻子的“三十之约”呢？ 1984年9月，15岁的展文莲来到商河县第三中学复读。中考失利的阴霾笼罩着她的心头，她知道，自己不得不接受现实。就在展文莲为学习苦恼时，班上有个叫桂军民的男生，主动帮她辅导起了功课。之后二人成为好朋友。有了桂军民的陪伴，学习似乎变得没那么枯燥了，生活也多了一份期待。三年的时光如白驹过隙，转眼即逝。展文莲和桂军民都以优异的成绩考入了重点高中。此时二人互生情愫，希望在一个地方上学。然而，命运似乎总喜欢开玩笑。展文莲因家庭原因必须留在山东，而桂军民则考上了上海体育学院。分别前夕，他们约定每个月都要写信沟通。成年后，二人正式交往，做起了异地恋情侣。婚后，为了照顾妻子，桂军民主动放弃上海的高薪职业，搬到商河县定居。这个决定让展文莲感动不已，她觉得自己嫁给了世界上最好的男人。然而，幸福的生活没能持续太久，一场灾难，悄然而至。 2016年，展文莲后背长了一个疙瘩，伴有咳嗽、胸闷等症状。起初，她以为只是普通感冒，但症状持续了一个多月都没有好转。 "军民，我总觉得胸口闷闷的，呼吸也有点困难。"展文莲有天晚上对丈夫说。桂军民立即带她去医院检查。经过多家医院的诊断，最终确诊为肺癌晚期。这个噩耗如同晴天霹雳，击碎了这个幸福家庭的美好生活。为了不让妻子承受太大的心理压力，桂军民选择隐瞒了病情的真相，只告诉她是肺部感染。他日夜陪伴在妻子身边，照顾她的饮食起居，陪她做化疗。 "文莲，你一定要坚强，我们一起战胜病魔。"桂军民握着妻子的手，眼中满是坚定。展文莲经过一段时间的化疗后，病情似乎有所好转。然而，好景不长，癌细胞很快转移到了脑部。医生告诉桂军民，展文莲的生命可能只剩下几个月了。桂军民感觉整个世界都崩塌了，他只好将真相告诉了妻子，两人抱头痛哭。但桂军民太爱自己的妻子了，他发誓，不管用什么办法，一定要治好妻子的病。就在这时，主治医生给他提供了一条道路。主治医生告诉桂军民，现在有一种人体冷冻技术，可以将刚刚临床死亡的人体进行低温保存，等到未来医学技术发展到可以治愈致命疾病时，再将其复苏。抱着最后一丝希望，桂军民联系了山东的银丰生物科技研究院。在详细了解了技术原理和风险后，他决定让妻子尝试这项技术。 "文莲，如果有一天我们真的要分开，你愿意等我吗？哪怕要等很久很久。"桂军民握着妻子的手问道。展文莲虚弱地笑了笑："傻瓜，我们不是说好了要白头偕老吗？我会一直等你的。" 于是桂军民告诉妻子，想给她使用冷冻技术，保存身体。等到未来医疗技术可以战胜癌症之后，再将其解冻，治愈疾病。这样，两人又能重新在一起了。展文莲同意了，她在丈夫的陪同下，签署了遗体冷冻协议。她成为了国内首位进行冷冻生命延续实验的志愿者。协议规定冷冻时间是30年，平均每天消耗液氮约40升，每半个月左右要补充冷冻液，维持体征。一次补充费用是5万，之后如果有需要，可以继续续费。 2017年5月8日，银丰研究院的专家团队在医院严阵以待，他们准备好了冷冻设备，严阵以待。展文莲迎来了人生的最后一刻，她微笑着握着丈夫和儿子的手，用最后一丝力气说道：“等着我”，说完就离开了人世。专家团队立即开始了冷冻保存程序。他们首先为展文莲注射了防止血液凝固的药物，然后用特殊溶液替换了她体内的血液。接着他们给展文莲连接好呼吸机，排泄管，将她快速送往研究所。在所内，医生们开始对展文莲进行灭菌处理，保证她的身体不会被微生物破坏。最后，将她的遗体缓慢冷却到零下196摄氏度，装入充满液氮的特制容器中。此时展文莲的身体内部各种细胞都停止了运作，宛如睡着了一般。桂军民全程在窗外看着，他并没有哭泣，只是期盼着技术进步的那一天早点到来。之后，银丰研究院召开新闻发布会，宣布完成了中国首例人体低温保存实验。这一消息立即引发了社会各界的广泛关注和争议。有人质疑技术的可行性，也有人担心伦理问题。不过对于桂军民来说，这些争议都不重要。他只知道，他的爱人还在那里，等待着有朝一日能够重新睁开眼睛。为了保留妻子的生活痕迹，桂军民将家里的一切都保持原样。每个月，桂军民都会去银丰研究院"探望"妻子。他会坐在装有展文莲的容器旁，播放她生前最喜欢的音乐，跟她讲述这个月发生的趣事。为了让妻子醒来后能够了解这些年世界的变化，桂军民开始记录每年发生的大事。他还保存了大量的照片，并在每张照片背后详细注释拍摄的时间、地点和事件。 "这是我们小区举办的春节联欢会，大家都很想念你。"桂军民一边写着，一边轻轻擦去眼角的泪水。时光飞逝，转眼间已经过去了五年。在朋友们的劝说下，桂军民开始尝试重新生活。同事们还给他介绍起了对象，是个很像展文莲性格的女人。看着自己日渐衰老的身体，桂军民最终同意了见面。不过，他有两条要求：一是要理解他和妻子的情感，不反对他去看望展文莲，在冷冻技术上花钱。二是要照顾好他的生活，能陪同他到老。没想到对方竟然被他们的爱情打动了，女人同意了这两个要求，暂时住到了桂军民家。桂军民和女子相处的很融洽，他答应未来有一天，自己可能会和她结婚。尽管开始了新的生活，但桂军民从未忘记展文莲。每年展文莲的生日，他都会买一束她最喜欢的百合花，放在她的照片前。展文莲最喜欢的那件红色连衣裙仍然挂在衣柜里，她用过的化妆品还摆在梳妆台上。桂军民甚至保留了展文莲的社交账号，时不时地上线，让朋友们以为她还活着。然而，现实总是残酷的。展文莲的冷冻合同期限是30年，到期后如果技术仍未突破，将面临是否续签的选择。有时，桂军民也会怀疑自己的决定是否正确。夜深人静时，他会望着窗外的星空，喃喃自语："文莲，我们的选择对吗？"但每当看到展文莲的照片，他心中的信念就会重新坚定。 "也许有人会说我傻，但爱情不就是这样吗？它让人义无反顾，让人甘之如饴。"桂军民常常这样告诉自己。#大学第一课#

液氮罐推荐：三款神器别错过！姐妹们，液氮罐可是生物样本保存的必备神器啊！𐟘今天就来给大家种种草，分享几款我觉得超好用的液氮罐，都是我亲自用过的哦，绝对不吹牛！ 𐟫–MVE液氮罐：轻便又实用 𐟔𙦝质：防锈铝合金制造，轻巧方便，手感超赞！ 𐟔𙨮𞨮᯼š内外壳旋压技术形成，焊缝少，美观性强，真空漏率也超低，真的是省心又省力。 𐟔𙥮‰全：可以配可带锁的防护盖，保证容器内储存的食物样品的安全，让我感觉特别放心。 𐟔𙤾🦍𗯼š可编号的提筒设计，方便辨认和存取生物样品，再也不用担心找不到对应的样本了。使用评价：MVE液氮罐真的是一款非常实用且轻便的液氮罐，无论是从材质、设计还是安全性能方面都让我非常满意。 𐟫–班德液氮罐：保温性能杠杠的 𐟔𘦝质：304不锈钢无缝管制造，保温性能超级好，完全不用担心液氮的蒸发问题。 𐟔𘧨𓥮š性：长时间保存样本的稳定性和活性都能得到保障，让我对班德液氮罐的稳定性非常放心。使用评价：班德液氮罐的保温性能真的是太棒了！用起来超级省心，完全不用担心液氮会迅速蒸发掉。 𐟫–查特液氮罐：大容量又便捷 𐟔𙥮𙩇：大容量设计真的是太方便了！一次性可以存储好多生物样本，再也不用频繁添加液氮了。 𐟔𙦓作：操作简单方便快捷，人性化的设计让我在使用过程中感觉更加顺畅和舒适。使用评价：查特液氮罐真的是一款非常便捷且大容量的液氮罐！无论是从容量还是操作方面都让我非常满意。在寻找好用的液氮罐时，我可是费了不少心思呢𐟒ᣀ‚MVE液氮罐、班德液氮罐和查特液氮罐都是我觉得非常值得推荐的液氮罐品牌。如果让我选一款的话，我会更倾向于选择MVE液氮罐哦！因为它不仅轻便实用，而且安全性能也非常出色。当然啦，这只是我的个人看法啦~大家最好还是根据自己的需求来选择适合自己的液氮罐哦！

细胞复苏全攻略：从冻存到培养细胞复苏可是个技术活，稍有不慎就可能让你的宝贝细胞受罪。下面我就来详细讲讲细胞复苏的实验步骤和注意事项，希望能帮到你。从液氮罐里取细胞 ❄️ 首先，你得提前从液氮罐里取出需要解冻的冻存管，然后放到-80℃的冰箱里，让里面的液氮慢慢挥发。这个过程要特别小心，因为从液氮中取出细胞时，护目镜和防冻手套是必不可少的，冻伤和冻存管爆炸可不是闹着玩的。快速解冻 𐟔劦Ž夸‹来，把冻存管迅速放入37℃的恒温水浴锅中。如果储存装置和解冻装置离得太远，可以用装有干冰的隔热容器临时保存和运送细胞。关键是要用镊子夹住细胞冻存管，在水浴中不时晃动，使其受热均匀，速度越快越好。这样可以在1-2分钟内让冻存液完全融化，避免冰晶伤害细胞。记住，冻存管管口不能接触到水浴锅里的液体，避免污染。水浴锅中的无菌水也要定期更换。停止解冻的时机 ⏰ 通常建议冻存管融化至只剩约2毫米直径的冰晶时，就可以停止水浴了。继续晃动至冰晶完全融化。这个时候复苏的时间刚好，避免复苏过头（升温至室温或更高温度会增加冷冻保护剂的细胞毒性，这会极大影响细胞活力）。消毒和稀释 𐟧𜊥…訞化后，马上擦干并用75%酒精擦拭冷冻管外部进行消毒。然后在无菌环境下，用移液管吸取5ml预热的完全培养基加入15ml无菌离心管中，再吸取冻存管里的细胞悬液加入离心管中。解冻后应尽快稀释，以减少DMSO的细胞毒性。此时细胞比较脆弱，剧烈的吹打会造成细胞活率下降。因此，需要以轻柔的方式稀释细胞冻存悬液。轻柔颠倒混匀，充分稀释冻存液，有条件可以静置1分钟，使细胞恢复渗透压，再进行下一步操作。离心和重悬 𐟒‰ 根据细胞类型选择合适的离心速度，低速离心5分钟，吸掉上清液，加入2-3ml预热的完全培养基，用移液管轻轻吹打均匀，保证细胞完全重悬。离心的目的是去除DMSO和死细胞。转速不够活细胞沉底的少，转速过高活细胞受压过大，会导致死亡。推荐250g离心4分钟。培养和观察 𐟌𑊥𙦉“好后，用完全培养基适当稀释，然后将重悬的细胞全部移入新的培养皿或者培养瓶中摇晃均匀。最后放入37℃恒温细胞培养箱，依据细胞状态，在细胞贴壁后或24小时后，更换一次培养液，继续培养，观察生长情况。若细胞密度较高，及时传代。小贴士 𐟒ኦ•𔤸ꦓ作最好在4℃冰盒中进行，以减少冷冻保护剂对细胞的毒性。希望这些步骤和注意事项能帮到你，让你的细胞复苏实验顺利进行！𐟒ꀀ

2017初夏，癌症末期患者林婉清在病房内安静地停止了呼吸与心跳。紧接着，几位医师将她置于-196℃的液氮罐内，使她成为中国首例人体冷冻“生命暂停”案例。丈夫赵浩宇悲痛地与遗体告别，心中默默与妻子立誓：待30年后医疗技术飞跃，定要让她“重生”，再续前缘。然而，不足五年光景，赵浩宇的生活中出现了一个新女性，两人形影不离。这位神秘女子究竟是谁？赵浩宇能否坚守与妻子的“三十之约”？青春往事林婉清是农场后代，性格豁达，热爱运动，却因全心投入兴趣，学业平平。幸运的是，她遇见了比她小几日的赵浩宇。开学日，林婉清坐在教室角落，静静聆听。突然，一个高瘦男生转身，递来纸条：“你好，赵浩宇。看你似乎有些困扰，需要帮忙吗？” 林婉清抬头，礼貌回应。从此，赵浩宇成了她的学习伙伴，两人情谊渐深。他们一同学习、奔跑、参演校园演出，共度无数美好时光。然而，高中如梦，毕业季将他们分隔两地。离校前夜，两人坐在老树下，赵浩宇紧握林婉清的手：“婉清，记得给我写信，好吗？”林婉清含泪点头。大学期间，书信不断。每封信都是珍宝，被细心珍藏。寒假时，赵浩宇鼓起勇气告白。河畔漫步，他突然停下，深情告白：“婉清，我确定，你是我此生挚爱。愿做我女朋友吗？” 林婉清羞红了脸，轻轻点头。毕业后，两人步入婚姻殿堂，简约却温馨。新婚夜，赵浩宇说：“婉清，为了我们，我决定辞职，回县城定居。一起照顾家人，建立我们的小家。” 林婉清听后紧紧相拥，泪光闪烁。他们过着平凡而幸福的生活，共谋未来。每晚，他们在院中畅谈，林婉清常感慨：“浩宇，我是世上最幸福的女人。” 冰冻奇缘然而，命运弄人。2016夏，林婉清被确诊晚期肺癌，震惊不已。她一向健康，怎料病魔突袭？赵浩宇无法接受，带妻奔波多家医院，期盼奇迹。然而，现实残酷。确诊后，赵浩宇化身“守护神”，全心照料妻子。请假陪伴，共渡化疗难关。林婉清保持乐观，常安慰丈夫。但命运并未眷顾这对深情夫妻。 2016年末，癌细胞扩散至脑部，病情急转直下。医生宣告预后不佳：“时日无多，请做好心理准备。” 绝望之际，一线生机浮现。赵浩宇偶见人体冷冻技术报道。这项技术始于1967年，旨在冷冻刚去世的人体，待未来医学治愈疾病时复活。虽处实验阶段，对赵浩宇而言，却是唯一希望。他疯狂搜集信息，联系专家，为妻争取生机。与家人商议后，他决定让妻子成为中国冷冻第一人。山东某生物科技公司伸出援手，无偿实施冷冻。 2017年5月8日凌晨，林婉清离世。专家团队随即展开数小时冷冻程序。赵浩宇全程守候，目光未离妻子。此举引发社会热议。赵浩宇坚定表示：“若科技成真，我愿再见她一面。” 漫长等待中，他关注医学研究，定期探访妻子。每次探访，他都向冰冻容器诉说思念：“婉清，等我，我们约定好的。” 新情缘起时光流转，现实孤独开始侵蚀赵浩宇。他健康下滑，痛风缠身，独卧数日无人照料。这促使他思考未来。冷冻第四年，有人介绍新友。起初，赵浩宇因念及亡妻婉拒。但长期孤独与现实需求驱使他接受新友关怀。消息传出，指责声四起，质疑他忘却承诺，怀疑冷冻初衷。面对质疑，赵浩宇坦诚未忘林婉清，但也要面对生活。他表示曾带新女友探望冷冻的妻子，求得理解。

细胞实验的基本操作与注意事项 𐟧슧𛆨ƒž实验是生物学研究的基础，掌握一些基本操作和注意事项非常重要。下面我们来聊聊细胞复苏、冻存和传代的基本步骤以及一些需要注意的地方。细胞复苏 𐟌Š 细胞复苏其实是个技术活，步骤如下：从液氮罐中取出冻存管，迅速放入37℃水浴中解冻，时间最好控制在1分钟内。解冻后，1000rpm，4℃，离心5分钟。弃去上清液，用完全培养基重悬细胞沉淀。将细胞转移到培养瓶中，轻轻晃动使细胞分布均匀，并做好标记。在显微镜下观察细胞密度和形态，然后放入二氧化碳培养箱培养。注意事项：从液氮罐中取细胞时，记得做好个人防护，别被冻伤了。如果冻存细胞不能立即水浴解冻，可以放在干冰上保存转移。水浴解冻时间要快，做到慢冻速融。解冻后的细胞别在常温下放太久，尽快离心去除DMSO或细胞冻存液。刚复苏的细胞贴壁不牢，24小时内别频繁观察和换液。将培养瓶放入培养箱时，把瓶盖旋松一点，以便气体交换（如果用透气性瓶盖，就不用旋松瓶盖了）。细胞冻存 ❄️ 细胞冻存是为了长期保存细胞，步骤如下：等细胞达到80-90%的密度时，用胰酶消化1-2分钟。用完全培养基（胰酶体积的2倍）终止消化，1000rpm，4℃，离心5分钟。弃去上清液，加入冻存液重悬细胞。进行梯度降温，最后转移到液氮罐或-80℃冰箱保存。注意事项：选取对数生长期的细胞进行冻存，这时候细胞状态最好。冻存的细胞不宜长期放在-80℃环境中，尽快转入液氮罐中。冻存后取出一管复苏，检测细胞存活率。理论上细胞可以在液氮中长期保存，但为了稳妥起见，半年后复苏培养一次，观察生长情况再继续冻存。不同冻存液的冻存方式不一样，具体详见说明书。细胞传代 𐟧슊细胞传代是为了扩大培养规模，步骤如下：移除原液，用PBS清洗1-2次。用胰酶消化1-2分钟，完全培养基终止消化。吹散细胞，1000rpm，4℃，离心5分钟。弃去上清液，用完全培养基重悬细胞。将细胞转移到新的培养瓶中，补充完全培养基。在显微镜下观察细胞密度和形态，然后放入二氧化碳培养箱培养。注意事项： PBS润洗细胞时，从与贴壁细胞层相对的容器一侧轻轻加入PBS，避免冲刷到细胞层。不同细胞的胰酶消化时间不一样，每30秒观察一次。悬浮细胞需要用未经TC处理的细胞瓶或培养皿培养，如悬浮细胞无碎片，建议按方法一传代。细胞的居住环境 𐟏 舒适无菌的环境是细胞健康生长的重要基础。不同形状、规格的培养瓶、培养皿和培养板，最终都会被转移到37℃，5%CO2的恒温培养箱中。希望这些基本操作和注意事项能帮到你，祝你的细胞实验顺利！𐟒ꀀ

细胞冻存全攻略：从实验步骤到注意事项细胞冻存是一项非常重要的生物医学技术，它能让细胞在极低温下保存，从而实现细胞的长期保存和传承。这项技术不仅对维护细胞库的可持续性至关重要，还能保证科研实验的可重复性。今天，我们就来详细讲解一下细胞冻存的实验步骤、常见问题以及注意事项。实验步骤 𐟧ꊧ𛆨ƒž收集与计数：首先，你需要将细胞在培养液中离心，通常是在1000rpm左右离心5分钟。然后弃去上清液，根据需要重新悬浮细胞。使用细胞计数器或血细胞计数板来计算细胞密度。制备冻存液：准备冻存液，通常为含有细胞保护剂如二甲基亚砜（DMSO，通常浓度为10%）的完全培养基。DMSO可以帮助预防冰晶的形成，这对细胞的存活至关重要。细胞混合：将细胞悬浮液与冻存液混合。常见的做法是使每个冻存管中的细胞数达到100万至500万。快速但轻柔地混合细胞和冻存液，避免DMSO对细胞产生毒性。冷冻过程：将混合好的细胞分装入无菌冻存管中。封闭并标记冻存管，记录细胞类型、数量、冻存日期等信息。使用冻存箱或程序冷冻箱缓慢冷冻细胞。常用的方法是每小时降温-1Ⰳ至-80Ⰳ。这可以通过使用带有冷冻介质（如异丙醇）的特制冻存箱来实现。长期储存：将细胞放置在-80Ⰳ冷冻器中过夜后，可以转移到液氮罐中进行长期储存。液氮罐的温度通常在-196Ⰳ左右，适合长期保存活细胞。复苏细胞：将细胞从液氮罐中取出，快速在37Ⰳ水浴中解冻，尽量减少细胞暴露在DMSO中的时间。将细胞转移到含有完全培养基的离心管中，去除包含DMSO的冻存液。离心去除上清液，重新悬浮细胞并转移到新的培养容器中继续培养。常见问题 𐟤” 低存活率：细胞在解冻后的存活率可能异常低，这可能是由于冻存液的配比不当（如DMSO浓度过高或过低）、冻存过程中温度下降过快或过慢，或是冻存前细胞状态不佳（如传代次数过多、细胞密度不适宜）。冻存液的毒性问题：DMSO等冻存保护剂虽然能有效防止冰晶形成，保护细胞结构，但其也具有一定的细胞毒性。如果冻存液的DMSO浓度过高，或细胞在冻存液中暴露时间过长，都可能导致细胞死亡。冻存管的选择：使用不适合的冻存管也可能影响细胞的冻存效果。低质量的冻存管可能在极低温度下破裂或泄漏，导致细胞污染或丢失。冷冻和解冻速度：控制冷冻速度至关重要。如果冷冻过快，细胞内部可能形成大量小冰晶，破坏细胞结构；如果冷冻过慢，细胞外的大冰晶形成可能导致细胞脱水和损伤。解冻过程中，速度也需要控制得当，过慢的解冻会增加细胞在有毒冻存液中的暴露时间。细胞的传代和健康状态：冻存前细胞的健康状态极为重要。传代次数过多或细胞过度生长都可能影响细胞冻存后的复苏率。确保使用生长状态良好、未达到过度密集状态的细胞进行冻存。标记和记录错误：错误的标记或记录可以导致使用错误类型的细胞，或无法正确追踪细胞的特性和历史。适当的标记和记录是实验成功的关键。注意事项 ⚠️ 严格遵守细胞冻存实验操作规程，做好实验记录和数据归档。根据不同细胞类型选择适合的冻存液，定期更新冻存液以确保质量。细胞冻存后定期检查存活率及细胞状态，保持仪器设备的定期维护与检修。希望这篇指南能为你提供一些帮助和启发，让你的细胞冻存实验更加顺利！

液氮容器检测机构：液氮容器耐腐蚀性检测

𐟧Š细胞冻存全攻略（二） 𐟧 你知道细胞冻存的过程是怎样的吗？它可是一个梯度降温的奇妙旅程哦！ 𐟌᯸ 细胞冻存的最佳保冷介质是液氮，温度低至-196℃，理论上能永久保存细胞。但怎样才能让细胞在降温过程中不受损伤呢？ 𐟒ᠥꌥ‡Œ，大家通常用两种方法进行梯度降温： 1️⃣ 传统的人工降温法：冻存管先放4℃ 10分钟，再移到-20℃ 30分钟，然后-80℃放16-18小时，最后转移到液氮中。记得哦，4℃和-20℃的时间不要太长，从4℃到-20℃时，要颠倒混匀一下，防止细胞沉底。 2️⃣ 利用工具来帮忙：比如冻存盒或细胞渐冻仪，它们能自主进行梯度降温。把冻存管放在预冷好的冻存盒里，再放-80℃冰箱16-18小时，最后转移到液氮中。或者用渐冻仪，以1-2℃/min的速度降到-100℃，然后保存到液氮里。 𐟔’ 说到液氮罐，它可是个超低温的魔法容器哦！使用时要小心冻伤，记得戴厚手套、护目镜和实验服。操作要轻柔，避免液氮溅出，还要尽快操作，因为液氮在空气中会迅速气化。别忘了定期查看液氮余量，确保样品安全保存。 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚤𝿧”覶𒦰𖯼Œ一定要小心操作，确保安全第一！同时，也要记得及时记录和更新细胞冻存的情况哦！

MC38小鼠结肠癌细胞培养全攻略𐟧ꊱ️⃣ 细胞复苏：首先，将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃的水浴中，快速摇晃至完全解冻。然后将解冻后的细胞悬液加入含有4-6mL完全培养基的离心管中，充分混合。以1000RPM的速度离心3-5分钟，弃去上清液，加入6-8ml完全培养基至培养瓶（或皿）中，用显微镜观察细胞生长情况和密度。𐟔찟” 2️⃣ 细胞传代：当细胞密度达到70%-90%时，可以进行传代培养。MC38细胞为“轻微贴壁”和“悬浮培养”类型。传代步骤如下：收集：将培养瓶中的悬浮细胞收集到离心管中。𐟧ꊦ𖈥Œ–：向培养瓶中加入0.25%（w / v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL），放入37℃培养箱中消化1-2分钟。如果消化不完全，可适当延长时间。用显微镜观察细胞消化情况，当大部分细胞变圆并迅速脱落时，轻轻敲击培养瓶，加入3-4ml含有10%FBS的培养基终止消化。𐟔찟’犧滥🃯𜚥𐆦”𖩛†到的悬浮细胞、PBS清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpm离心5分钟，去掉上清液。补加1-2mL培养液，重悬混匀。将细胞悬液按1：2的比例分装到新的T25瓶中，加入6-8ml新的完全培养基，保持细胞生长活力。根据实际情况，以1:2~1:5的比例进行后续传代。𐟧갟” 3️⃣ 细胞冻存：在培养前3代时，建议冻存一批细胞种子，以备后续实验使用。以下以T25瓶为例说明步骤：收集细胞：将消化好的细胞收集到离心管中，用血球计数板计数，确定冻存密度。一般推荐的冻存密度为1㗱06~1㗱07个活细胞/ml。𐟒‰𐟓ˆ 离心：使用1000rpm的速度离心3-5分钟，去掉上清液。用配制好的细胞冻存液将细胞重悬，每1ml冻存液含有1㗱06~1㗱07个活细胞/ml的细胞分装到冻存管中。在冻存管上标注好名称、代数、日期等信息。冻存：将冻存管放入程序降温盒中，在-80度冰箱过夜，之后放入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置，方便之后查阅和使用。❄️𐟧ꀀ