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cck8实验权威发布_cck8实验步骤(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-12-02

cck8实验

CCK8实验详解𐟔 CCK8是一种广泛用于细胞生物学研究的试剂，主要用于细胞增殖和毒性的测定。以下是使用CCK8进行实验的详细步骤和注意事项： 𐟌🠥ꌦ�꤯𜚊种板：根据文献或实验经验确定细胞浓度，将细胞悬液稀释至适当浓度。对于细胞增殖实验，每孔加入约1000-2000个细胞；对于细胞毒性实验，每孔加入约5000～10000个细胞。每组设置4-6个复孔，同时设置对照组及空白组。边缘孔加入PBS以减少蒸发影响。将细胞置于37℃ 5%CO2细胞培养箱中培养12-24小时。加药及孵育：观察细胞贴壁良好后，吸出各孔培养基，实验组加入不同浓度的药物培养基，空白组加入不含药物的培养基。然后将96孔板在37℃ 5% CO2空气的细胞培养箱中孵育适当时间（6h，18h，24h，48h）。加入CCK-8：配制含10%CCK-8溶液的培养基，每孔加入10ul CCK8和100ul完全培养基。注意加入过程中避免产生气泡。孵育：将加完CCK-8的培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中孵育1-4小时（时间自行摸索），随着时间的增加，OD值会增大。分别在0.5h、1.0h、2.0h测量OD值，将OD值控制在1.0左右。测OD值：将96孔板取出，使用酶标仪检测各孔在450nm波长处的OD值，分析处理数据，绘制增殖曲线。结果分析：细胞存活率：细胞存活率% = (实验孔OD - 空白孔OD) / (对照细胞OD - 空白孔OD) 㗠100%。细胞抑制率：细胞抑制率% = (对照细胞OD - 实验孔OD) / (对照细胞OD - 空白孔OD) 㗠100%。 𐟔 注意事项：待测物质有氧化性或还原性时，可在加CCK8之前更换新鲜培养基，以去掉药物影响。培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔容易干燥挥发，增加误差。一般情况下，最外一圈的孔加培养基或PBS，不作为测定孔用。通过以上步骤和注意事项，您可以更准确地使用CCK8进行细胞增殖和毒性测定实验。

cck8实验步骤 CCK-8实验是细胞毒性检测的一种有效方法，通过测量细胞增殖来评估细胞活性。以下是实验步骤的详细说明： 𐟌𑠥ꌥŽŸ理： CCK-8试剂盒含有WST-8（粉色），在电子载体1-MethoxyPMS的作用下，被细胞内线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲膜类染料（Formazan）。这种染料能溶解在培养基中，生成的甲膜染料数量与活细胞数量成正比。通过测定细胞内脱氢酶氧化还原后生成的水溶性橙黄色甲膜染料的光吸收值，可以间接反映活细胞数量。 𐟓… 实验步骤：将细胞接种到96孔板中，培养至所需时间（如24小时、48小时）。取10ul CCK-8溶液加入96孔细胞培养板，继续在37℃培养箱中孵育1小时。使用酶联免疫检测仪在450nm波长处测定吸光度。建议使用双波长检测，检测波长450nm，参比波长600nm。 𐟧…쥼：细胞存活率 = [(As - Ab) / (Ac - Ab)] x 100% 抑制率 = (AC - AS) / (Ac - Ab) x 100% 其中： As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液） AC：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物） Ab：空白孔吸光度600nm（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物）通过以上步骤，可以精确测定细胞的增殖和毒性，为细胞研究提供有力支持。

𐟒ჃK8实验小技巧大揭秘！ 𐟔CCK-8实验看似简单，实则暗藏玄机。今天就来揭秘一些你可能不知道的小技巧，让你轻松掌握CCK8实验！ 𐟓Œ选择合适的孔板是关键，但别忘了水凝胶的稳定性也很重要哦。不同平行实验孔板间的水凝胶条件一定要一致，这样才能确保数据的准确性。 𐟒稀ƒ虑到孔板中水分的蒸发，不建议直接向现有培养基中加入CCK-8。而是应该用新鲜培养基和CCK-8母液混合后，定量加入到孔板中。 ❌孔板最外面一圈水分蒸发严重，所以不建议使用哦。 𐟓Š测吸光度时，别直接拿含有水凝胶的孔板去测。水凝胶的不透光性会影响吸光度，建议将孵育好的液体吸出后测。 𐟔„测吸光度前，记得混匀孔板中的溶液，避免颜色深浅不一。 𐟑颀𐟔쥤š做平行实验是避免异常值的关键。培养基的选择也很重要，与细胞传代时的培养基保持一致是最佳选择。 ⏰孵育时间也很关键，能孵4小时最好，但时间紧的话2小时也可以。但最好不要少于2小时，否则显色不完全会影响结果。 𐟒ᦓ作过程中一定要避光，并把孔板放到孵箱的最里面以确保温度达到37度。 𐟎‰掌握这些小技巧，CCK8实验不再愁！祝你实验顺利！

𐟔젃CK8细胞增殖曲线绘制指南 CCK8实验是细胞增殖研究中非常重要的一部分，其原理如下： 𐟔 原理： WST-8（四唑盐）是CCK-8的主要成分，呈粉色。在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下，被线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲臜类染料（Formazan），并释放到细胞外溶解在培养基中。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。通过酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可以间接反映活细胞数量。 ⚠️ 注意事项： 1⃣️ 细胞消化要充分，铺板时要均匀，不能过密，一般每孔3000个细胞，不同细胞类型可能需要调整。 2⃣️ CCK8孵育时间为1-4小时，具体时间可以通过预实验确定最佳反应时间。 3⃣️ CCK8最好稀释成10%（用完全培养基稀释）后加入细胞中。 4⃣️ 建议使用双波长检测，检测波长为450nm，参比波长为600nm。参比波长可以过滤掉因液体浑浊或孔板底部不干净带来的测量误差（OD450-OD600即可）。 5⃣️ 每天定点测量，孵育CCK8的时间要保持一致。 6⃣️ 96孔板不易污染，可以直接用于测定。测完后尽快盖上盖子放回原处。如果酶标仪距离培养室较远，可以将上清液吸到新的96孔板中进行测定。通过以上步骤，可以绘制出准确的细胞增殖曲线，为细胞研究提供有力支持。

CCK8实验攻略，轻松掌握！ CCK8实验其实并不复杂，只需掌握一些关键步骤。以下是详细的操作指南： 𐟓ˆ 制作标准曲线计数细胞，按比例用培养基等比稀释成不同细胞浓度梯度，一般需要5-7个梯度，每组4-6个复孔。接种细胞后培养2-4小时，使细胞贴壁。然后每100培养基中加入10 CCK-8试剂（注意不要产生气泡），继续培养1-4小时。用酶标仪测定450nm处的吸光度。 𐟧‰€需培养液可以先转染再种板。在10cm盘中转染，6小时后消化并重悬细胞，调整细胞密度至20000个/ml，种在96孔板中，每孔1000。种板时，用枪头吹吸细胞，彻底重悬并均匀分散。也可以同时进行转染和种板，转染6小时后换液，每孔100新鲜DMEM。 𐟒Š 细胞增殖-毒性检测在96孔板中接种细胞悬液（100/孔，每孔细胞数至少1000），预培养24小时。向培养板加入不同浓度的待测药物。将培养板在培养箱中孵育一段时间后，加入培养基（完全培养基或基础培养基均可），孵育6小时（具体时间根据实验决定），空白孔加入培养基。向每孔加入10的CCK-8溶液（注意不要产生气泡），不用更换培养基。将培养板置于培养箱内孵育1-4小时，用酶标仪测定450nm处的吸光度。 𐟓Š 计算公式细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液） Ac：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物） Ab：空白孔吸光度（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物）以上就是CCK8实验的详细操作过程，希望对你有所帮助！

细胞CCK8实验：增殖与毒性分析全攻略 𐟔젧𛆨ƒž增殖分析制备细胞悬液：首先进行细胞计数，确保细胞数量准确。接种到96孔板：根据实验需求，每孔加入约100ul的细胞悬液，细胞数量大约在1-2㗱0^4之间，每个样本可重复4-6次。培养细胞：将96孔板放入37℃的培养箱中，细胞接种后大约需要4小时贴壁。如果不需要贴壁，可以跳过这一步。加入CCK8：每孔加入10ul的CCK8试剂。由于量较少，建议使用二档吸一档打的方式，避免使用排枪。培养时间：根据细胞类型不同，Formazan的形成量也会有所不同。如果显色不够，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞，需要较长的显色时间（5-6小时）。测定吸光度：采用双波长测定法，检测波长在450-490nm之间，参比波长在600-650nm之间。 𐟒‰ 细胞毒性分析制备细胞悬液：同样需要进行细胞计数。接种到96孔板：根据实验需求，每孔加入约100ul的细胞悬液，细胞数量大约在5㗱0^4以上，每个样本可重复4-6次。培养细胞：将96孔板放入37℃的培养箱中，细胞接种后大约需要4小时贴壁。如果不需要贴壁，可以跳过这一步。加入毒性物质：根据实验需求，加入不同浓度的毒性物质。继续培养：根据毒性物质的性质和细胞的敏感性，一般需要培养至少一代以上的时间（例如6、12、24、48、60、72小时）。加入CCK8：每孔加入10ul的CCK8试剂。由于量较少，建议使用二档吸一档打的方式，避免使用排枪。培养时间：根据细胞类型不同，Formazan的形成量也会有所不同。如果显色不够，可以继续培养，以确认最佳条件。特别是血液细胞，需要较长的显色时间（5-6小时）。测定吸光度：采用双波长测定法，检测波长在450-490nm之间，参比波长在600-650nm之间。

细胞增殖与毒性分析：CCK8实验全攻略 𐟔젥ꌤ𘀯𜚧𛆨ƒž增殖分析 1️⃣ 制备细胞悬液：首先进行细胞计数，确保细胞数量准确。 2️⃣ 接种到96孔板：根据实验需求，每孔加入约100ul的细胞悬液，细胞数量大约在1-2㗱04之间，每个样本可重复4-6次。 3️⃣ 培养细胞：将细胞放入37℃的培养箱中，如果细胞需要贴壁，大约培养4小时。 4️⃣ 加入CCK8：每孔加入10ul的CCK8试剂，为了减少误差，建议将枪头浸入培养液中加入，并在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。 5️⃣ 培养与显色：将细胞继续培养0.5-4小时，不同细胞种类形成的Formazan量不同，如果显色不够，可以继续培养。 6️⃣ 测定吸光度：采用双波长测定法，检测波长在450-490nm之间，参比波长在600-650nm之间。 𐟔젥ꌤ𚌯𜚧𛆨ƒž毒性分析 1️⃣ 制备细胞悬液：同样需要进行细胞计数。 2️⃣ 接种到96孔板：根据实验需求，每孔加入约100ul的细胞悬液，细胞数量大约在5㗱04以上，每个样本可重复4-6次。 3️⃣ 培养细胞：将细胞放入37℃的培养箱中，如果细胞需要贴壁，大约培养4小时。 4️⃣ 加入毒性物质：根据实验设计，加入不同浓度的毒性物质。 5️⃣ 继续培养：根据毒性物质的性质和细胞的敏感性，继续培养至少一代以上的时间（例如6、12、24、48、60、72小时）。 6️⃣ 加入CCK8：每孔加入10ul的CCK8试剂，操作同实验一。 7️⃣ 培养与显色：将细胞继续培养0.5-4小时，如果显色不够，可以继续培养。 8️⃣ 测定吸光度：采用双波长测定法，检测波长在450-490nm之间，参比波长在600-650nm之间。

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斑马鱼中药研究：酒精性肝病的新思路？最近看到一篇关于斑马鱼和中药的文章，真是让人摸不着头脑。文章的标题是《Elucidating hydroxysafflor yellow A's multi-target mechanisms against alcoholic liver disease through integrative pharmacology》，发表在Phytomedicine上，影响因子有6.7呢。不过，这篇文章真是让人有点无语。斑马鱼模型：酒精性肝病的新方向？ 𐟐Ÿ 首先，文章用斑马鱼来研究酒精性肝病。斑马鱼在肝脏发育上有一定的研究价值，但直接用来研究酒精性肝病，真是让人摸不着头脑。作者通过斑马鱼酒精造模，然后给不同剂量的中药处理组，最后用活体成像检测肝脏大小，HE染色检测病理变化。这部分还有点逻辑性，至少能看出药物对肝脏的影响。网络药理学分析：交集与富集 𐟌 接下来是网络药理学分析部分。作者把酒精性肝病相关的基因和药物（羟色胺黄A：HSYA）相关基因取交集，然后做了一下String的分析，把这些基因做了一下KEGG、GO富集分析。再用autodock做分子对接，找到了几个结合能低的蛋白，就认为HSYA能够靶向这些蛋白。这部分真是让人摸不着头脑，既没有验证，也没有解释为什么这些蛋白重要。 HSYA抑制肝脏脂质堆积：油红染色 𐟌𘊊然后是HSYA抑制肝脏脂质堆积的部分。作者对斑马鱼整个鱼染了油红，检测了与肝脏脂质合成相关的mRNA水平变化。结果自然是有改善的。这部分还有点逻辑性，至少能看出药物对肝脏脂质堆积的影响。细胞验证：小鼠源细胞HepG2 𐟧슊最后是细胞验证部分。作者在HepG2细胞上验证了酒精毒性、药物毒性以及药物改善酒精毒性（CCK8实验），然后给HepG2细胞染了个油红。qPCR检测氧化应激相关的mRNA和肝脏脂质合成相关mRNA。这部分和斑马鱼完全无关了，但至少能看出药物在细胞水平上的效果。总结总的来说，这篇文章逻辑性不是很强，尤其是网络药理学分析部分，真是让人摸不着头脑。不过，文章确实很能水图，一张小图就能解决的问题，非得整成一张大figure，所以导致这篇文章有11张图。

𐟧샃K8实验步骤全解析𐟔 𐟌᯸CCK8实验，你了解多少？这是一种利用WST-8试剂盒进行的细胞增殖和细胞毒性检测方法哦！𐟒ኊ𐟔쥜襮ž验中，WST-8与1-Methoxy PMS共同作用，被细胞内的还原剂还原，生成橙黄色的水溶性甲攒（Formazan）。𐟒Š 𐟓ˆ细胞增殖越多越快，颜色就越深；细胞毒性越大，颜色则越浅。而且，颜色的深浅与细胞数目是线性关系哦！𐟓Š 𐟒ᩀš过观察颜色的变化，我们可以轻松判断出细胞的增殖和毒性情况。是不是很方便呢？✨ 𐟔快来试试CCK8实验，探索细胞的奥秘吧！𐟚€