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HEK293权威发布_hek293t细胞简介(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-30

HEK293

重组蛋白两大细胞系起底，CHO与HEK293哪家强？「科研」「实验室」「重组蛋白」

折耳猫基因突变研究：苏格兰折耳猫的秘密最近在社交媒体上看到不少关于折耳猫的讨论，尤其是图1中提到的那篇论文引起了广泛关注。作为一个对折耳猫有一定了解的人，我决定深入阅读一下这篇文章，今天就来给大家分享一下我的解读。 𐟐𞠦Š˜耳猫的独特之处苏格兰折耳猫最显著的特征就是它们那独特的耳朵，通常在三到四周大的时候就开始折叠了。这个性状是常染色体显性遗传的。虽然折耳猫的先天性软骨病会导致手脚和尾部畸形，但最初人们认为这种病只存在于纯合折耳猫中。后来发现，杂合体中也有这种情况。 𐟧젥Ÿ𚥛 突变与疾病在这篇文章中，作者们通过生物信息学手段发现了一个与折耳和软骨病相关的基因突变。他们首先对44只折耳猫和54只非折耳猫进行了基因分型，并通过数据分析从全基因组中找到了与这种性状相关的基因。结果发现，猫染色体D3在分析中的数值非常突出，而TRPV4是其中关联度最高的基因。 𐟔 深入分析作者们进一步分析了TRPV4基因出现的所有突变，发现只有1024G>T（即基因1024位的鸟嘌呤变成了胸腺嘧啶）这个突变与折耳表型相关。之后，他们对多品种的猫进行了大规模筛查，研究了共648只猫，发现只有苏格兰折耳猫有这个位点突变，而其他猫里都没有。 𐟌 人类与猫的相似性这个基因突变导致蛋白质的变化，具体来说就是TRPV4蛋白质342位的缬氨酸变成了苯丙氨酸。作者们将猫的TRPV4蛋白质序列与数据库进行比对，发现人类TRPV4蛋白和猫的非常相似，因此可以用人类细胞系来研究它。 𐟧렧𛆨ƒž实验他们选择了一种叫HEK293的人类细胞系，并在其中引入了TRPV4蛋白质的V342F突变。将突变型与野生型进行对比，发现这种突变改变了TRPV4蛋白质的运输，使得其在细胞表面的表达很低。TRPV4蛋白质实际上是一种钙离子通道。通过细胞内钙成像，他们发现突变型的活性增加了，遇到低渗透压时的反应也变大了，对药剂的反应也发生了改变。 𐟤” 人类与猫的对比在文章的讨论部分中，作者指出TRPV4的突变也会导致一些显性遗传的人类骨骼发育不良，并且V342F变异在人类患者中也有报道，但目前尚缺相关功能研究，且该突变在人类中的影响与猫不同。然后，作者从蛋白质结构的角度分析了该突变影响功能的可能原因。总的来说，这篇文章为我们理解折耳猫的基因突变和软骨病提供了新的视角。希望这些信息能帮助到那些关心折耳猫健康的人们。

案例应用丨C.BIRD™技术：加速HEK293细胞株生长与蛋白产量

安黛雪的美丽秘诀大揭秘！嘿，大家好！今天我要和你们分享一个超级棒的秘密——安黛雪的美丽魔法！𐟒늊首先，你们知道吗？2022年，一个名为重组胶原蛋白的神奇成分横空出世，成为了护肤界的超级明星。这个重组胶原蛋白可不是普通的胶原蛋白哦，它是一种人工合成的胶原蛋白，主要用于组织工程、再生医学、美容和皮肤护理等领域。它的生物相容性和活性都非常好，特别适合敏感肌的宝宝们。而且，这种胶原蛋白还能渗透到真皮层，给皮肤补水保湿；促进细胞生长，形成保护屏障；还能为皮肤提供营养，促进神经增长和上皮细胞增生修复，帮助创面愈合，修护受损肌肤。最直接的效果就是能补充修复皮肤流失及断裂的胶原蛋白，抗皱抚纹，让你的皮肤重回婴儿肌！𐟑𖊊说到这里，不得不提一下金盛医疗的重组人源化III型胶原蛋白。这种胶原蛋白采用了100%人源氨基酸序列和人源细胞表达系统（HEK293），完全是基于人体胶原蛋白的原始基因序列设计的。而且，这种细胞培养的重组胶原蛋白具有高效的转染与表达能力、优质的蛋白结构与活性，以及更好的生物相容性。简单来说，它的排异性极低，为人体应用提供了双重安全保障。更厉害的是，这种胶原蛋白在90℃的高温下还能保持完整的三螺旋结构。要知道，人体体温只有36-37℃，而日化品的乳化温度通常在80℃以上。目前还没有其他公司能生产出在37度及以上温度下仍具有三螺旋的胶原蛋白。这一成果不仅在重组胶原蛋白行业具有里程碑的意义，还在合成生物领域引起了轰动。所以，安黛雪的美丽魔法背后，其实有着这么强大的科学支撑。每次用完安黛雪的产品，感觉自己的皮肤都变得更加紧致有弹性了，真的是太棒了！𐟒– 希望这个秘密能帮到你们，让我们一起变美吧！𐟒†‍♀️✨

YAP和TEAD1直接被AARS1乳酸化，被SIRT1去乙酰化第一步，AARS1分别乳酸化YAP和TEADK90和K108位点乳酸化蛋白质组学KEGG分析富集多种通路，重点集中在Hippo信号通路上，YAP和TEAD1分别在K90和K108位点发生了乳酸化（图1a-b）。IP-WB检测也显示YAP-TEAD发生乳酸化（图1c）。此外，构建YAP K90R和TEAD1 K108R突变体进行IP-WB检测显示没有发生乳酸化（图1d）。另外，葡萄糖剥夺降低YAP-TEAD1的乳酸化水平，而乳酸处理明显恢复其的乳酸化水平（图1e-f）。第二步，AARS1与YAP-TEAD1相互作用 Co-IP实验发现AARS1与YAP-TEAD1互作（图1g），细胞分离实验表明主要发生在细胞核内（图1h）。GST pulldown实验也显示AARS1和YAP-TEAD1直接互作（图1i-j）。体外乳酸化实验表明，AARS1能够直接使WT TEAD1乳酸化（图1k），但不能使其K108R突变体乳酸化（图1l）。在HEK293FT细胞中，过表达WT AARS1而非其5M突变体促进了YAP-TEAD1的乳酸化(图1m)，而敲低AARS1则显著降低了YAP-TEAD1的乳酸化水平(图1n)。表明AARS1与YAP-TEAD1相互作用，并使其乳酸化修饰。第三步，YAP和TEAD直接被SIRT1去乙酰化探索可能导致YAP去乙酰化的酶。Sirtuin（去乙酰化酶）抑制剂烟酰胺(NAM)处理细胞，显著增加了YAP的乳酸化（图2a）。对sirtuin去乙酰化酶家族成员(SIRT1-SIRT7)进行筛选，发现SIRT1的过表达显著降低了YAP的乳酸化水平（图2b）。同时，Co-IP实验显示SIRT1与YAP相互作用（图2c）。构建SIRT1的催化缺陷突变体(H363Y)，Co-IP实验发现SIRT1的催化缺陷突变体(H363Y)未能降低细胞中YAP的乳酸化水平（图2d）。表明SIRT1使YAP和TEAD去乙酰化，导致YAP和TEAD乳酸化水平增加。全文分享可查阅：【《JCI》解读：肿瘤乳酸化修饰与泛素化修饰对抗！丙烯酰tRNA合成酶AARS1乳酸化修饰YAP复合体促进信号传导】。 #科研#⠂ #coip实验#⠂ #wb实验#⠂ #GST pulldown

六种重组蛋白表达系统重组蛋白表达系统是指利用基因工程技术将外源基因导入到合适的宿主细胞中，并通过宿主细胞的转录和翻译机制生产出具有特定生物学活性的蛋白质的系统。目前，常见的重组蛋白表达系统主要包括以下六种：一、原核表达系统 1.主要特点：发展完善、流程简单快速、成本低、产量高。适宜于表达原核来源的以及不需要翻译后修饰的真核蛋白。 2.代表宿主：大肠杆菌（E. coli）：最常用的原核表达宿主，具有遗传背景清楚、生产时间短、易于放大生产等优点。大肠杆菌表达系统基于T7 RNA聚合酶及其强启动子之间的特异性和转录的高效性，如pET系统。二、酵母表达系统 1.主要特点：真核表达系统，能对多数蛋白进行翻译后修饰，制备的蛋白更接近于天然蛋白。经济高效，适用于大规模生产。 2.代表宿主：毕赤酵母（Pichia pastoris）：一种常用的酵母表达系统，通过甲醇诱导表达外源蛋白，表达量高且稳定。三、昆虫细胞表达系统 1.主要特点：真核表达系统，能够容纳较大的外源片段插入。表达的蛋白具有完整的生物学功能，适用于生产复杂的蛋白质。 2.代表宿主：利用昆虫杆状病毒作为载体，在昆虫细胞中表达外源蛋白。四、哺乳动物细胞表达系统 1.主要特点：能够表达天然结构完整、生物活性接近于天然蛋白质的重组蛋白。适用于需要复杂翻译后修饰和高级糖基化的蛋白质生产。 2.代表宿主： CHO细胞：中国仓鼠卵巢细胞，是生物制药领域广泛应用的哺乳动物细胞表达系统。 HEK293细胞：人胚胎肾细胞，也常用于重组蛋白的生产。五、转基因植物表达系统 1.主要特点：利用转基因技术将外源基因导入植物细胞，通过植物组织培养技术生产重组蛋白。成本低、产量大，适用于生产食品、饲料添加剂等。 2.代表宿主：玉米、烟草、水稻等植物。六、转基因动物表达系统 1.主要特点：通过转基因技术将外源基因整合到动物基因组中，实现外源蛋白在动物体内持续表达。适用于生产大分子、复杂结构的重组蛋白，如血液制品、酶制剂等。 2.代表宿主：转基因小鼠、转基因羊等。#广州华韵生物科技有限公司#

胶原蛋白包被培养皿的详细步骤𐟧늓igma-Aldrich推荐的胶原蛋白包被培养皿步骤胶原蛋白储存液的制备将0.1%（w/v）的胶原蛋白溶解在0.1M醋酸中。具体步骤如下： 0.1M醋酸溶液：V=1000mL=5.720ml醋酸+994.280ml ddH2O V=100mL=0.572ml醋酸+99.400ml ddH2O V=10ml=0.06ml醋酸+9.94ml ddH2O（60ul+9940ul）将胶原蛋白粉末（1mg/ml）溶解在醋酸中，具体操作如下： V=100ml=0.1g胶原蛋白+100ml 0.1M醋酸 V=10ml=0.01g胶原蛋白+10ml 0.1M醋酸将上层胶原蛋白溶液转移到无菌容器中（无菌操作，50ml离心管分装），4℃保存。注意：如果使用滤膜过滤除菌，会导致蛋白量损失。工作液的制备蛋白工作液（200ug/ml，5倍稀释）=1ml存储液（1mg/ml）+4ml ddH2O 包被步骤根据包被面积计算所需包被液体体积，以6-10ug/cmⲦ𕓥𚦥‘细胞培养皿中加入胶原蛋白工作液，完全覆盖表面即可。以T-25培养瓶为例（工作液加入1ml）：所需胶原蛋白总量=25cmⲪ(6-10)ug/cmⲽ(150-250)ug 所需胶原蛋白体积=(150-250)ug/ 1000ug/ml=(0.15-0.25)ml 干燥包被好的培养皿表面可以经过UV照射过夜灭菌。清洗步骤在接种细胞前，可用无菌的平衡盐溶液洗涤细胞皿表面3次，用培养基洗涤1次。适用范围 I型胶原包被的培养皿可应用于细胞的贴壁、粘附与伸展；HEK-293；HepG2细胞培养等。

293T细胞培养全攻略，你掌握了吗？ 293T细胞，全名是HEK-293T，是一种经过人腺病毒5型（Ad5）转染后永生化的人胚肾细胞系。它的特点是含有并表达Ad5基因，而且比普通的293细胞更容易转染，因此被广泛用于病毒包装和基因表达研究。细胞培养要点 𐟓š 培养基选择：293T细胞专用培养基是关键。通常使用DMEM-H培养基，加入10%的胎牛血清（FBS）和1%的青霉素-链霉素（P/S）。传代比例：一般每2-3天换液一次，传代比例为1:4-1:8，传代周期大约是24-48小时。培养条件：细胞在95%空气+5%二氧化碳（CO2）的气相条件下生长，温度保持在37℃。冻存条件：细胞冻存时，推荐使用60%的基础培养基、30%的FBS和10%的DMSO，液氮储存。细胞特性 𐟔슨𔴥て€篼š293T细胞的贴壁性较差，容易飘起来。建议在培养前进行包被，或者尝试提高血清比例。增殖速度：细胞增殖非常快，通常倍增时间不到一天，隔天即可长满。聚团现象：细胞容易聚团，换液时要小心操作，避免用力摇晃培养瓶。消化与传代 𐟌€ 消化：293T细胞容易消化，但消化下来的细胞容易成团。需要吹打吹散，否则传代后细胞会成团生长，影响实验结果。传代操作：当细胞生长至汇合率达到80~90%时，需要进行传代操作，以扩大细胞数量，维持细胞良好的生长状态。注意事项 ⚠️ 随着传代次数增加，293T细胞可能会出现生长状态下降或突变等情况。因此，建议在细胞购进时就进行大量冻存，以保证实验的稳定性和持续性。通过这些细节，你可以更好地掌握293T细胞的培养技巧，为你的实验打下坚实的基础。

传代之后每个视野里都会看到图1那样的黑点放大之后是后面的几张图想知道这种会不会是真菌污染还是别的什么原因导致的

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