当前位置：网站首页 » 教程 » 内容详情

pcr体系前沿信息_pcr体系配置(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-01

pcr体系

𐟔찟窠物理实验的常用仪器与软件一览在基础物理实验室中，有许多常用的实验仪器和软件，帮助科学家们进行各种实验。以下是一些常见的实验方法和仪器：基因鉴定：包括DNA提取、PCR体系、电泳技术等，用于研究基因敲除鼠、基因敲入鼠和点突变鼠等。石蜡切片/冰冻切片：通过HE染色、免疫荧光和免疫组化等技术，观察细胞和组织结构。 qPCR：包括引物设计、RNA提取、逆转录和qPCR体系配置，用于定量分析基因表达。 Western blot (WB)：从组织样本中提取蛋白质，通过制胶、电泳、转膜、孵抗体和曝光等步骤，检测蛋白质表达。 Elisa：用于微量蛋白或物质的定量分析。细胞实验：包括细胞复苏、培养、传代、冻存、计数、转染以及细胞增殖/毒性实验、迁移实验、成管实验、免疫荧光染色、流式细胞术、细胞能量代谢实验、细胞周期检测实验和细胞凋亡实验等。常用仪器：如离心机、涡旋混匀仪、普通显微镜、荧光显微镜、共聚焦显微镜、酶标仪、PCR仪、荧光定量PCR仪、流式细胞仪和海马仪等。常用软件：包括统计软件如ImageJ、GraphPad Prism和SPSS，文献管理软件如EndNote和Zotero，绘图软件如Draw.io和PS，以及引物设计软件如Primer Premier 5和SnapGene。通过这些仪器和软件，科学家们可以进行各种物理实验，探索自然界的奥秘。

定点突变：科研中的小技巧与心得 𐟔在科研中，探究蛋白质功能的一个关键方法是定点突变。通过改变蛋白质中的一两个氨基酸残基，可以研究这种变化对蛋白质结构和功能的影响。 𐟔基因定点突变（site-directed mutagenesis）是一种定向改变蛋白质序列的方法。首先确定要改变的氨基酸残基位置，然后通过PCR技术定向修改基因序列，从而探讨蛋白质功能的变化。 ✍️以下是一些在进行定点突变时发现的问题和心得体会： 1️⃣ 试剂选择：很多研究者为了方便直接购买昂贵的试剂盒，其实可以选择同一品牌的散装试剂，如高保DNA聚合酶和游离碱基等。参考试剂盒的说明书，可以自行配制类似效果的体系。 2️⃣ 引物设计：设计引物时，尽量保持GC含量较低，但退火温度要适当高一些，建议在65℃左右。如果突变位点附近GC含量高，可以考虑使用GC rich buffer，可以有效提高突变成功率。 3️⃣ PCR体系优化：定点突变的关键在于引物设计和PCR体系的设置。延伸和后延伸的温度和时间非常重要。延伸时间根据使用的聚合酶质量来定，后延伸一般设置为10-15分钟。延伸温度选择68℃或72℃，退火温度尽量低于延伸温度1-2℃。 4️⃣ 琼脂糖电泳回收：是否需要将突变质粒进行琼脂糖电泳回收去杂，这并不是必要的步骤。残留的聚合酶和游离碱基等对转化BL21受体菌的影响不大，反而可能降低转化率。 5️⃣ DpnI酶消化：如果条件允许，可以使用DpnI酶消化模板质粒。经过多轮PCR反应后，模板质粒已经很少了，因此带来的假阳性可以忽略不计。后续可以通过双酶切和测序验证是否为阳性突变子。通过这些小技巧和心得体会，可以有效提高定点突变的成功率，为科研工作提供有力支持。

肌侣面膜太惊艳了！𐟥› 刚敷上就给我一个大大的“惊喜”！𐟘𒠧럧„𖦊Š牛奶𐟥›直接倒在我脸上了？！仔细一看，它的膜布真的超级细腻，是那种奶皮的双层膜布！面膜有足足34ml，这相当于一瓶精华的量了！ ◼️ 它的核心成分是复弹肽和提拉肽，这可是贵妇级成分，超级厉害！它能促进胶原蛋白生成，让皮肤变得超级有弹性！ ◼️ 搭配紧致活性因子，辅助黄金肽，能把干纹全都填平，哪里有皱纹就填哪里！ ◼️ 最后再来个角鲨烷和透明质酸，既能补水又能锁住水分，让皮肤水润一整天！细腻皮肤的成分也很给力，有PCR体系的龙胆草精粹和黑麦籽精粹，一边改善肌肤的粗糙，让皮肤更平滑，一边还能收紧肌肤，整个人看起来更年轻！眼周、抬头纹、法令纹这些地方，一滴精华液都不舍得浪费！

𐟔쒔-qPCR实验室操作全攻略𐟓– 𐟧ꠥ‡†备开始你的RT-qPCR实验了吗？这里有一份超详细的操作指南等你来拿！ 𐟕𐯸 **确定收样时间**：在进行RT-qPCR之前，首先要明确你的干预时间和收样时间。例如，如果你正在研究炎症指标，那么6小时、12小时和24小时的样本可能会有明显的变化。 𐟧꠪*操作步骤**： 1️⃣ 配置你的PCR体系，以20的SYBR Green体系为例。 2️⃣ 混匀并离心后，将体系置于冰上预冷。 3️⃣ 加样时，注意吸一打二的原则，加mix时同引物组可不换枪头，但加cDNA时每个孔需换一次枪头。 4️⃣ 加样完成后，用专用的膜封好，再用保鲜膜包裹。 5️⃣ 以8000rpm的速度离心3分钟，去除气泡。 6️⃣ 根据自己的需求设置程序，然后上机运行。 7️⃣ 结束后，导出数据并进行分析。 𐟓Š **数据分析**：在获得数据后，你需要进行一系列的分析工作： - 检查MeltCurve是否为单峰且光滑。 - 确保ct值在1c9值范围内，且组内差距在0.3-0.5之间。 - 内参ct值应在18-20之间，目的基因ct值应在25-35之间（大于35的ct值可视为不可用）。 - 检查扩增曲线是否到达平台期且是否光滑。 - 如上述条件均满足，即可使用Excel进行进一步分析。 𐟔젧Ž𐥜诼Œ你已经掌握了RT-qPCR实验室操作的全流程！赶快动手试试吧！

PCR实验全攻略：从引物设计到结果分析大家好！今天我们来聊聊分子克隆中的PCR实验。上一期我们已经介绍了引物设计的基础知识，这一期我们就来聊聊PCR的具体操作步骤。 PCR反应体系：你需要准备什么？𐟧ꊊ首先，PCR反应体系需要哪些东西呢？每个实验室用的酶可能都不一样，所以最好还是看看你实验室用的酶的说明书。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的加样体系：先加水：提前计算好每个样品的加水量，然后从大体积开始加，这样更准确。加酶：根据说明书上的推荐量加入。加引物：根据引物的浓度来决定。加模板：如果是基因组或菌体，变性时间3分钟；如果是质粒或片段，变性时间30秒。 PCR反应程序设置：如何设置？𐟓Š PCR反应程序的设置也是关键。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的反应程序：变性（Denaturation）在95Ⰳ下变性30秒，让DNA双链解链成单链。这个步骤不需要修改，但变性时间可以根据模板的不同进行调整。退火（Annealing）在55Ⰳ下退火30秒，让引物通过碱基互补配对与单链DNA结合。退火温度可以根据引物的设计进行调整。延伸（Extension）在72Ⰳ下延伸1分钟，聚合酶开始合成新的DNA链。这个步骤一般不需要修改。循环数设置根据需要回收的片段大小，一般30个循环左右就够了。如果不需要回收，可以设置35个循环。其他步骤除了基本的PCR步骤，PCR仪还可以进行一些固定温度的孵育，比如37Ⰳ恒温酶切等操作。小贴士𐟓 枪头只沾到一点点液体也没关系，一般都能成功PCR。但还是要确认枪头有没有吸到相应的小体积液体。不同的酶延伸速度和温度可能不一样，需要根据具体情况调整。希望这些信息对你有所帮助！如果你有任何问题或需要进一步的指导，欢迎随时留言讨论哦！

电动移液器试用报告：哪款更适合PCR？最近我们实验室在寻找一款适合PCR实验的电动移液器，经过一番折腾和试用，终于有了一些心得。下面就来跟大家分享一下我们的试用过程和结果吧。需求清单 𐟓‹ 首先，我们明确了自己的需求：需要200ul的吸液量，2ul的连续自动分液功能；精度要高，系统误差要小；适配通用型200ul黄枪头；提供demo样枪试用；能开符合报账要求的发票。试用过程 𐟔슦ˆ‘们试用了两个品牌的三款自动移液器，分别进行了2ul连续分液跑PCR的实验，并对三个复孔CT值的标准差进行了比较。其他反应体系成分均使用相同的eppendorf单通道移液器加样，吸头使用Axygen。试用心得 𐟌Ÿ 其中一款125ul量程的单通道自动移液器无法进行2ul连续分液，主要是因为单次2ul无法形成有效液滴。就结果来说，自动移液器的误差比手动的小很多，对于精度要求高的实验来说帮助很大。试用的两款自动移液器在精度上没有明显差别。然而，考虑到量程差10倍，使用的吸头也不同，在需要多次分液时，C品牌的移液器需要多次吸液，因此分液速度上P品牌完胜。而且P品牌使用黄吸头也能做到白吸头的精度，确实有一手。使用手感上差不太多，由于电动组件的原因，两款都显得偏重，甚至重心偏高有点头重脚轻。C品牌质地触感更好更高级。售价方面，P品牌的售价大概不到C品牌的2/3。总结 𐟓 对于384孔板10ulPCR体系的需求来说，我们需要快且准。经过组里多人试用后都觉得P品牌完胜，所以最终我们选择了P品牌的自动分液器。希望我们的试用报告能对大家有所帮助！如果你也在寻找一款适合PCR的电动移液器，不妨参考一下我们的经验。

降落PCR：解决PCR扩增问题的新方法降落PCR，也被称为TouchDown PCR，是一种常见的PCR优化方法，操作简单且效果显著。MedPeer网站上有详细的解释和视频教程，供大家参考。 𐟌𘠐CR扩增原理在PCR扩增过程中，DNA双链解螺旋成单链后，引物在退火温度下特异性结合到DNA单链上，并在Taq酶的作用下进行延伸。退火温度越高，引物结合的特异性越好；退火温度越低，非特异性片段产生的可能性越高。 𐟌𘠩™落PCR的优势降落PCR通过设定一个较高的初始退火温度，并在每个循环中逐渐降低温度，使得在前期的高温下扩增出特异性片段，而在后期的低温下提高PCR的特异性和效率。 𐟌𘠐CR体系配置（以20ul体系为例） 2x Taq Mix：10ul 引物F/R：0.5ul（可在0.5上下调整）模板：2ul（如果PCR条带不够亮，可以增加一点模板）加水至：20ul 𐟌𘠐CR程序设置预变性：94℃ 3min 循环1：94℃ 30s 循环2：65℃ 30s 循环3：72℃ 30s（10个循环，每个循环退火温度降低1℃至55℃）循环4：94℃ 30s 循环5：55℃ 30s 循环6：72℃ 30s（20-25个循环）延伸：72℃ 10min 保存：4℃至取出跑胶 𐟌𘠥ꌦŠ€术和方案以前做实验前需要查找文献和毕业论文来确定实验方案，做的时候对原理和步骤依旧模糊不清。好在MedPeer网站上提供了各种实验的详细介绍和视频教程，如果早知道这些资源，就不用巴巴地求着师兄师姐和同学教了。

𐟧챐CR实验全攻略𐟔슰Ÿ” 提取RNA是qPCR的第一步！ 1️⃣ Trizol裂解法让细胞或组织充分裂解，冰上静置后进行下一步。 2️⃣ 氯仿萃取，分离RNA和其他成分，离心后轻拿轻放，避免混匀。 3️⃣ 异丙醇沉淀RNA，冰上静置后再次离心。 4️⃣ 用75%乙醇洗涤沉淀，去除杂质，然后干燥溶解RNA。 5️⃣ 使用Nano核酸分析仪检测RNA浓度和纯度。 𐟒ᠦŽ夸‹来，将RNA逆转录为cDNA！ 1️⃣ 用DEPC水清洗紫外分光光度计平台。 2️⃣ 检测各样品浓度，确保RNA吸光度（260/280）为2。 3️⃣ 去除基因组DNA，加入逆转录酶进行逆转录。 𐟔堦œ€后，进行q-PCR实验！ 1️⃣ 准备q-PCR体系，包括SYBR qPCR Master Mix、引物和稀释后的Template cDNA。 2️⃣ 进行q-PCR反应，检测基因表达情况。 𐟎‰ 完成整个qPCR实验流程，轻松掌握基因表达情况！记得做好实验记录和数据分析哦！𐟌Ÿ

PCR扩增常见问题及解决方法详解 𐟔 PCR扩增过程中可能会遇到各种问题，本文将为您详细解析常见问题及其解决方法，助您顺利完成实验。 𐟓Š 问题1：PCR产物出现片状涂抹带可能原因：酶量过多或酶质量差、dNTP浓度过高、Mg2+离子浓度过高、退火温度过低、循环次数过多。解决方法：减少酶量或更换酶来源、降低dNTP浓度、适当降低Mg2+离子浓度、增加模板量、减少循环次数。 𐟔젩—˜2：PCR产物出现非特异性条带可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。 𐟓ˆ 问题3：PCR产物量不足可能原因：酶量不足、dNTP浓度过低、Mg2+离子浓度过低、退火温度过高。解决方法：增加酶量、提高dNTP浓度、增加Mg2+离子浓度、降低退火温度。 𐟔젩—˜4：出现片状涂抹带可能原因：酶量过多或酶质量差、dNTP浓度过高、Mg2+离子浓度过高、退火温度过低、循环次数过多。解决方法：减少酶量或更换酶来源、降低dNTP浓度、适当降低Mg2+离子浓度、增加模板量、减少循环次数。 𐟔젩—˜5：PCR产物出现拖尾现象可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。 𐟔젩—˜6：PCR产物出现单峰或多峰可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。 𐟔젩—˜7：PCR产物出现大小不一的条带可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。 𐟔젩—˜8：PCR产物出现弥散现象可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。 𐟔젩—˜9：PCR产物出现阴性结果可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。 𐟔젩—˜10：PCR产物出现其他异常现象可能原因：引物设计不合理、模板中含有杂质、PCR体系污染。解决方法：优化引物设计、纯化模板、清洁PCR体系。希望这些解决方法能帮助您更好地进行PCR扩增实验，取得满意的实验结果！

30-双酶切的关键步骤，你掌握了吗？ 𐟕’ 双酶切的时间和体系：双酶切一般需要3个小时，但也可以使用大体系，例如100微升。 𐟒砧𚯥Œ–方法：推荐使用柱式纯化方法，割胶可能会有些麻烦。 𐟌🠩…𖩇问题：以TAKARA的酶为例，1单位酶的定义是：在50 反应液中，30℃温度下反应1小时，将1 的NA完全分解的酶量定义为1个活性单位(U)。该酶浓度约为15单位/微升，可以分解15的DNA。而一般从1-4ml菌液提取的DNA约为3，PCR纯化后的产物（50体系）也约为3。因此，即使全部加进去，只要纯化质量好，酶切完全没问题。 𐟔— 连接反应：连接酶说明写的是过夜，但对连接酶单位的定义为：在20 的连接反应体系中，6 的NA-Hind III的分解物在16℃下反应30分钟时，有90%以上的DNA段被连接所需要的酶量定义为1个活性单位（U）。而它的浓度为350 U/，所以完全够用。连接酶易失活，最好在冰上操作。3个小时足够。 𐟓 重要的几点：做转化连接反应时，注意保持低温状态，一般连接3小时，16度。对含有AMP的质粒铺板时，注意加AMP时的温度，温度过高会使克隆株无法筛选出来。验证双酶切是否成功的方法：酶切反应时加各单酶分别切，两管，用同一种BUFFER，跑胶，看单切的两管是否成线性。如两管均成线性可初步判断双酶切成功。做转化时，也要进行对照。设4个对照：拿双酶切的质粒产物也进行连接反应，这个对照可进一步看双酶切是否成功。如果长出克隆，说明很有可能只进行了单酶切；如没长出克隆，则证明双酶切成功（当然要保证感受态、培基、连接酶都正常）。酶切过的未进行连接反应的双酶切产物，进行转化。这一步可以证明是否有残留的未被任何酶切的原始质粒。设原始质粒为对照，意为检测整个操作过程中是否有误。 AMP阴性板上用同一批感受态细胞铺板20微升足够，检测感受态状况。 𐟧Š 试剂保存：所有的试剂切记低温保存。一步一个脚印，不要偷懒，图省事最后却更费事。注意设立对照。 𐟔젩‰𔥮š：经PCR鉴定，克隆90%-100%的阳性率，所以在后面的挑克隆中，挑选3-4个就足够了。然后进行双酶切鉴定和测序。

专栏内容推荐

720 x 407 · png
PCR反应体系与反应条件分享 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
578 x 458 · jpeg
一种在PCR反应体系中提高链霉亲和素磁珠活性的方法与流程
素材来自:xjishu.com

1480 x 1156 · jpeg
易错pcr的pcr体系以及具体的组成？ - 知乎
素材来自:zhihu.com
595 x 382 · png
做二百重的PCR，酶您选好了吗？
素材来自:ebiotrade.com

1000 x 1000 · jpeg
PCR体系构建工作站_报价/价格/性能参数/图, 普睿博仪器_生物器材网
素材来自:bio-equip.com
655 x 540 · png
Tth DNA聚合酶(with dNTP) 250U×5HKE098-01B-广东环凯生物科技有限公司
素材来自:hk-lab.net

607 x 433 · png
KỸ THUẬT XÉT NGHIỆM PCR VÀ ỨNG DỤNG TRONG CHẨN ĐOÁN SINH HỌC PHÂN TỬ - ABT - Networks Business ...
素材来自:vh2.com.vn
1080 x 810 · jpeg
PCR技术_word文档在线阅读与下载_免费文档
素材来自:mianfeiwendang.com

250 x 219 · png
智能PCR体系构建系统_报价/价格/性能参数/图, 上海/汇像_生物器材网
素材来自:bio-equip.com
650 x 580 · jpeg
面对不同样品时如何选择合适的PCR的功能_生物器材网
素材来自:bio-equip.com

1080 x 810 · png
pcr体系模板加多少
素材来自:gaoxiao88.net
650 x 919 · jpeg
PCR体系构建工作站_报价/价格/性能参数/图, 普睿博仪器_生物器材网
素材来自:bio-equip.com

5696 x 2444 · jpeg
实时PCR（qPCR） | 西安百萤生物科技有限公司
素材来自:xabiolite.cn

927 x 646 · jpeg
pcr体系模板加多少
素材来自:gaoxiao88.net
370 x 221 · png
PCR体系构建 | 欧罗拉
素材来自:aurorabiomed.com.cn

1080 x 601 · png
干货！常用PCR技术及原理|PCR|DNA|聚合酶|荧光|核酸|基因|-健康界
素材来自:cn-healthcare.com

1080 x 306 · jpeg
PCR 常见问题及解决方案汇总-丁香实验
素材来自:biomart.cn

1080 x 810 · jpeg
PCR原理及反应体系(13生物)_word文档在线阅读与下载_免费文档
素材来自:mianfeiwendang.com
650 x 437 · jpeg
PCR原理、PCR扩增影响因素及预防详解_生物器材网
素材来自:bio-equip.com

592 x 289 · jpeg
如何快速优化PCR体系 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

1388 x 591 · jpeg
【分子】荧光定量PCR（一） - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

431 x 362 · png
一文读懂PCR技术如何检测Covid-19新冠病毒 | 电子创新元件网
素材来自:murata.eetrend.com
720 x 367 · png
分子诊断研发不用愁，看看一步法多重PCR试剂盒-（基于探针）！ - 每日生物评论
素材来自:bio-review.com

474 x 355 · jpeg
pcr体系模板加多少
素材来自:gaoxiao88.net
6355 x 3800 · jpeg
载体实验的成功基础：如何保证PCR模版的正确？ | 云舟生物
素材来自:vectorbuilder.cn

1404 x 2048 · png
What Are The Three Basic Steps of Conventional PCR? - PraxiLabs
素材来自:blog.praxilabs.com
650 x 399 · jpeg
PCR原理、PCR扩增影响因素及预防详解_生物器材网
素材来自:bio-equip.com

1080 x 511 · png
使用RT-PCR法检测鼻咽样品中的新冠病毒_生物器材网
素材来自:bio-equip.com

600 x 600 · jpeg
PCR- 公卫百科公共卫生专业图书馆 - Powered by HDWiki!
素材来自:wiki.epiman.cn
600 x 568 · jpeg
PCR原理 | PCR分类 | 引物设计方法 - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com

3714 x 2273 · jpeg
処方する母アーク rt qpcr - kusatsu-kujira.jp
素材来自:kusatsu-kujira.jp
500 x 375 · png
pcr原理是什么-百度经验
素材来自:jingyan.baidu.com

465 x 381 · png
PCR原理、分类、应用及PCR实验中常见问题解决方法_生物器材网
素材来自:bio-equip.com
1024 x 439 · png
最后保持：最后一步将反应室无限期冷却至 4–15 °C (39–59 °F)，并可用于 PCR 产物的短期储存。
素材来自:kunkundashen.cn

720 x 555 · jpeg
詳解 PCR 原理、步驟與循環參數—成功的六個關鍵考慮因素 | Thermo Fisher Scientific - TW
素材来自:thermofisher.com

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)