当前位置：网站首页 » 热点 » 内容详情

wb原理最新视觉报道_wb原理及步骤(2024年12月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-12-03

wb原理

WB操作指南：轻松掌握核心原理几页笔记带你搞懂WB的核心原理和操作必要性，跟着我一起战胜西方印迹吧！（字有点丑，大家凑合着看吧）#wb

WB原理详解，科研新手必看！ Western blot技术，也被大家称为蛋白质免疫印迹试验，是一种非常重要的实验技术。它能帮助我们鉴定并半定量分析细胞或组织中的特定蛋白质。这项技术主要包括七个关键步骤，分别是：从样本中提取蛋白质、对提取的蛋白质进行定量、利用SDS-PAGE电泳技术分离蛋白质、通过电转印将蛋白质转移到膜上、对膜进行封闭处理、让抗原与抗体发生免疫反应，以及最后进行蛋白质的检测。大多数科研新手都会接触到WB实验，今天就为大家详细解释这些步骤的原理，帮助大家更好地理解Western blot技术的运作原理。提取蛋白质 𐟧슩斥…ˆ，我们需要从样本中提取蛋白质。这个过程通常涉及到使用一些化学试剂，如蛋白酶抑制剂和去污剂，以确保蛋白质的完整性和纯度。蛋白质定量 𐟓 接下来，我们对提取的蛋白质进行定量。这一步非常重要，因为我们需要确保每个样品中的蛋白质含量一致，以便进行准确的比较。 SDS-PAGE电泳 𐟚€ 然后，我们利用SDS-PAGE电泳技术分离蛋白质。在这个过程中，蛋白质会根据其大小和电荷在凝胶中移动，从而分离出不同的蛋白质条带。电转印 𐟔„ 接下来，通过电转印将蛋白质转移到膜上。这个过程类似于复印机的工作原理，将蛋白质从凝胶转移到膜上，以便进行后续的免疫反应。封闭处理 𐟚犥œ訆œ上进行封闭处理。这一步是为了减少非特异性结合，提高实验的准确性。封闭剂通常是一些高浓度的蛋白或非特异性抗体。免疫反应 𐟦 然后，让抗原与抗体发生免疫反应。这个过程涉及到将膜与含有特定抗体的溶液孵育，从而形成抗原-抗体复合物。检测蛋白质 𐟔 最后，进行蛋白质的检测。我们通常使用一些显色剂或荧光染料来标记抗原-抗体复合物，从而在膜上形成可见的条带。通过这些步骤，我们就能准确地鉴定并半定量分析细胞或组织中的特定蛋白质了。希望这篇详细的Western blot原理解析能帮助大家更好地理解这项重要的实验技术！

WB实验详细步骤：从零开始到结果解析蛋白免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）是一种常用的蛋白质检测技术，广泛应用于分子生物学和生物化学实验中。以下是详细的实验步骤，帮助你从零开始完成WB实验。 𐟧ꠥꌥŽŸ理蛋白免疫印迹技术主要由三部分组成：凝胶电泳、样品印迹和免疫学检测。 1️⃣ 凝胶电泳：首先进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成条带。 2️⃣ 样品印迹：将凝胶中的蛋白质转移到固相支持物上，常用的材料有硝酸纤维素膜（NC膜）和PVDF膜。转移方法多为电泳转移，分为半干法和湿法，现在多采用湿法。 3️⃣ 免疫学检测：用特异性的抗体检测已经印迹在膜上的相应抗原。免疫检测方法可以是直接的和间接的，现在多用间接免疫酶标法。具体步骤如下：用特异性的第一抗体杂交结合。再用酶标的第二抗体（如碱性磷酸酶(AP)或辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗第一抗体的抗体）杂交结合。加酶的底物显色，或者通过膜上的颜色或X光底片上曝光的条带来显示抗原的存在。 𐟓 实验步骤准备样品：将待测蛋白质样品进行处理，使其适合进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。进行凝胶电泳：将处理好的样品加入到凝胶中，进行电泳分离。样品印迹：将分离好的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。免疫学检测：用特异性的第一抗体和酶标的第二抗体进行杂交，最后加酶的底物显色。结果解析：观察膜上的颜色或X光底片上的曝光条带，分析实验结果。通过以上步骤，你就可以完成一次WB实验，并得到相应的蛋白质表达水平检测结果。

𐟧엂、ELISA、IHC全解析𐟔 𐟒‰免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC）和酶联免疫吸附试验（ELISA），这三大免疫学实验技术，你了解多少？今天就来一探究竟！ 𐟔엂（免疫蛋白印迹法Western Blot），是检测蛋白质特性、表达与分布的利器。通过SDS-PAGE分离蛋白质，再利用电转仪转移到固相载体上，通过抗原-抗体-标记物显色来检测样品，定性和半定量都靠它啦！ 𐟧쉈C（免疫组化Immunohistochemistry），融合了免疫学原理和组织学技术，让抗原在组织或细胞内无处遁形。通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，定位、定性及定量都轻松搞定！ 𐟒ᅌISA（酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay），则是用到了免疫学原理和化学反应显色。与IHC不同，它主要检测血清、血浆等样品，操作简便，定量准确，是分泌性蛋白检测的首选哦！ 𐟔这三大实验技术各有千秋，WB与IHC技术相比，定量可能更加准确；而ELISA与免疫组化技术相比，定量最准确。选择哪种技术，就看你的实验需求啦！

WB入门！必看视频 Western Blot，简称WB，是一种利用抗原抗体特异性反应来检测蛋白质的方法，常被称为“免疫印刷”或“印刷蛋白”。通过这种方法，研究人员可以分析细胞或组织中的特定蛋白质。在小破站上，许多UP主分享了关于Western Blot的详细介绍。虽然我自己也不太熟悉，但在学习过程中发现张小乖乖乖老师整理的PPT非常有用。这里推荐大家去小破站搜索他的视频，深入学习Western Blot的基础知识。通过观看他的视频，你可以更好地理解Western Blot的原理、操作步骤和注意事项。希望这些资源能帮助你更好地掌握这项技术！

2023年WB实验全攻略：从原理到操作 𐟔젥ꌥŽŸ理这个实验用到了聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，主要是把细胞或组织里的蛋白质分离出来，然后转移到PVDF或者NC膜上。接着，用特定的抗体去和目标蛋白结合，再用辣根过氧化物酶（HRP）标记的第二抗体进行反应。最后，通过底物显色来分析曝光条带的位置和灰度，从而知道目标蛋白在样本中的表达情况。 𐟓 实验流程样本制备：包括蛋白质提取、定量和变性。 SDS-PAGE凝胶电泳：把蛋白质分离。转膜：通过电转把蛋白质转移到PVDF、硝酸纤维素膜或者尼龙膜上。封闭：用脱脂牛奶或者BSA封闭膜上的非特异性位点。一抗、二抗孵育：让抗体和蛋白质结合。 ECL化学发光检测：显影。胶片灰度分析及数据处理：用内参进行半定量分析。 𐟧ꠦ 𗦜쥈𖥤‡（贴壁细胞总蛋白提取）用TBS（Tris缓冲液）冲洗细胞三次，最后一次吸干残留液。加入适当体积的细胞总蛋白提取试剂（使用前加入蛋白酶抑制剂PMSF或cocktail），在培养板内3-5分钟。反复晃动培养板，使试剂与细胞充分接触。用细胞刮刀将细胞及试剂刮下，收集到1.5ml离心管中。冰浴30分钟，期间用移液器反复吹打，确保细胞完全裂解。 12000g离心5分钟，收集上清，即为总蛋白溶液。样品分装冻存于-20℃备用。 𐟓Œ 注意事项及原理为什么用TBS而不是PBS？PBS是磷酸盐缓冲液，虽然用途广泛，但容易与钙离子镁离子络合形成沉淀，还会抑制某些生物化学过程。而Tris缓冲液对生物化学过程影响很小，且不与钙离子镁离子发生作用。希望这篇攻略能帮到你，祝你实验顺利！𐟒ꀀ

病理实验常见问题解答 Q1：组织切片为什么会出现叠片或无法展开的情况？ Q2：在做IHC或IF时，为什么片子边缘会出现颜色过深或过亮的情况？ Q3：为什么选择能做IF的抗体，但在石蜡切片上却做不出免疫荧光？ Q4：肝脏、肾脏、脑等组织的自发荧光为什么较强？如何避免这种情况？ Q5：常见的非特异性表达有哪些？ Q6：同一来源的一抗能否用于荧光二标或多标？其原理是什么？ Q7：为什么多标荧光会出现串色现象？ Q8：石蜡切片和冰冻切片哪种更适合做免疫荧光？ Q9：为什么有时石蜡切片的IHC和IF无法做出阳性结果？ Q10：为什么同样的抗体在WB实验中能做出阳性，而在IHC（或IF）实验中却无法做出阳性？

WB实验详解，一文搞定！ Western blot（WB）是一种常用的蛋白质检测技术，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（跑胶）将不同大小的蛋白质分离，然后转移到固相载体（膜）上，再通过特异性抗体与目标蛋白质反应，最后通过标记的二抗进行酶促反应或反射自显影检测特定的蛋白质条带。以下是WB实验的详细流程和基本原理。 ✅实验流程样品制备：使用SDS和𗯥Ÿ𚤹™醇处理样品，使蛋白质变性和解聚成单链状态。电泳分离：在PAGE中，蛋白质根据其大小和电荷被分离成不同的条带。转膜：在电流作用下，凝胶中的蛋白质被转移到固相载体（PVDF膜或NC膜）上。封闭：使用牛奶或牛血清蛋白等高蛋白封闭剂孵育，减少抗体的非特异性结合，降低背景。一抗：一抗与蛋白质形成抗原抗体复合物。二抗：二抗与一抗结合。显影：通过底物显色或放射自显影检测信号，从而看出目的蛋白质的相对表达量。 ✅基本原理将不同大小的蛋白质通过聚丙烯酰胺凝胶电泳（跑胶）分离后，转移到固相载体（膜）上。在通过特异性抗体与目标蛋白质反应（一抗），最后通过标记的二抗进行酶促反应或反射自显影检测特定的蛋白质条带（二抗+显影）。 ✅学会看图首先看内参（如tubulin、actin、gapdh等），一般需要控制内参是一致的，即灰度值相近。再看目的蛋白质的表达量，图的最上面一般会标明每个泳道的蛋白质样是如何处理的，通过不同泳道的灰度值能看出与control相比的目的蛋白质的相对表达量。通过这些步骤，你可以更好地理解和掌握Western blot实验的原理和流程，从而更好地进行实验设计和数据分析。

一周搞定WB操作：拒绝摆烂，从这里开始！大家好，今天我想和大家聊聊WB实验的那些事儿。作为一个过来人，我深知摆烂的痛苦，所以特地整理了一份详细的WB操作指南，希望能帮到你们。一、WB实验的目的 𐟎斥…ˆ，咱们得搞清楚为什么要做WB实验。简单来说，就是用RIPA或Laemmli Sample Buffer液提取蛋白，通过Western blot检测特定分子的表达情况。二、WB实验的原理 𐟧슨🙤𘪩ƒ襈†有点技术含量。简单来说，WB实验通过SDS-PAGE电泳分离不同分子量的蛋白，然后把这些蛋白从凝胶转移到固相支持体上，再用针对特定分子的抗体进行免疫反应，最后通过化学发光和成像来检测目的分子。三、实验材料 𐟧ꊥš实验当然少不了材料。你需要准备一些试剂、耗材和仪器。具体清单就不细说了，大家可以根据自己的实验室条件来准备。四、实验方法 𐟓 接下来是具体的操作步骤： SDS-PAGE电泳：这一步很关键，配胶的时候要注意加水的顺序。转膜：把电泳分离的蛋白从凝胶转移到固相支持体上。免疫反应与化学发光和成像：最后一步就是免疫反应和成像了。五、实验注意事项 ⚠️ 这里有几个小贴士：配胶时，建议先加水，再加其他成分。转膜的时候要小心，别弄坏了膜。曝光时多使用ECL发光试剂盒，注意操作时间。希望这些小贴士能帮到你们，拒绝摆烂，我们一起加油！𐟒ꀀ

学姐的实验效率秘籍，快来看看吧！𐟒እ䧥彯𜌦ˆ‘是药化专业的一名学生，最近刚在JMC上发了一篇文章。一年内，我做了WB、Co-IP、免疫荧光、动物实验等各种实验，虽然有点实验天赋，但今天我想和大家分享一些提高实验效率的小技巧。了解实验原理 𐟓š 在开始一个新的实验之前，我会先查清楚它的实验原理。这不仅仅是百度一下或者看看视频就完了，我会反复理解，直到自己能讲出实验的基本原理。这个过程非常重要，因为只有真正理解原理，才能更好地进行实验。进行“云实验” ☁️ 在了解了实验原理之后，接下来就是明白实验步骤。我建议大家去看硕博毕业论文，里面的步骤都很详细完整。然后，再去看一些视频操作，仅从文字想象会漏掉一些细节，通过看视频可以学到一些关键技术。做完这些后，我会在实验记录本上写下需要的实验设备、试剂等，并记录每一步开始实验的大致时间。晚上睡觉前，我会在脑中模拟一遍明天的实验步骤，这样就不会因为试剂没准备好或者步骤错乱导致实验失败。保持冷静 𐟧˜‍♀️ 生物实验很多时候需要非常仔细的操作，这时候就不能分心，不要和别人聊天啥的。其实在做实验时，我很不喜欢大家在实验室聊天，有时会感到烦躁。当实验出现差错时，先别直接放弃，看看有没有可以补救的措施。总结经验 𐟓 不管是成功还是失败，在头一两次实验时，都应该写上自我总结。包括为什么这次做慢了，漏了什么试剂、哪些步骤没做好等等。失败的话更要去向别人或网站求助，不要不好意思，做实验就是得脸皮厚些！希望这些小技巧能帮到大家，祝大家实验顺利，早日发文章！𐟒ꀀ

专栏内容推荐

780 x 296 · png
WB实验原理及流程图，流程实验图
素材来自:uptbio.com

1080 x 713 · jpeg
MCE | 打破 Western Blot 玄学操作 - 技术前沿 - 生物在线 Lab-on-Web
素材来自:bioon.com.cn
671 x 444 · jpeg
ECL化学发光试剂盒
素材来自:yeasen.com

658 x 444 · png
WB过程中需要注意的细节_化工仪器网
素材来自:chem17.com
820 x 499 · jpeg
Western Blot蛋白免疫印迹(WB)快速实验攻略
素材来自:yeasen.com

562 x 542 · png
蛋白质印记（western blot）/免疫印迹（immunoblotting）-核小体（北京）生物技术有限公司
素材来自:nucleotech.cn
1080 x 810 · jpeg
WB原理及操作注意事项_word文档在线阅读与下载_无忧文档
素材来自:51wendang.com

1575 x 985 · jpeg
WB实验原理，WB实验步骤以及结果分析，本视频为直播回放视频，每周六实验讲座，周 - 哔哩哔哩
素材来自:bilibili.com
920 x 1302 · png
WB原理步骤及总结.docx - 冰点文库
素材来自:bingdoc.com

600 x 364 · jpeg
免疫学实验不可或缺的工具：HRP标记山羊抗人IgG - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
600 x 405 · jpeg
告别“黑白”，迎接“彩色”，荧光WB，你值得拥有-艾美捷科技有限公司
素材来自:amyjet.com

3104 x 1417 · jpeg
荔枝在线观看高清
素材来自:immuexp.com

636 x 468 · jpeg
WB实验技术介绍【新手入门】
素材来自:uptbio.com
960 x 753 · jpeg
western blot 的原理是什么？ - 知乎
素材来自:zhihu.com

780 x 1102 · jpeg
wb实验原理及步骤Word模板下载_编号qdoyzadv_熊猫办公
素材来自:tukuppt.com
素材来自:v.qq.com

99 x 140 · jpeg
WB原理、步骤及总结 - 豆丁网
素材来自:docin.com
1024 x 804 · png
干货分享 | WB实验原理和步骤（一） - ACE生物
素材来自:ebio-ace.com

800 x 275 · png
Western Blotting的原理和操作步骤-上海路阳生物技术有限公司
素材来自:luyoruv.com

606 x 287 · jpeg
Western blot经验大盘点，有这一篇就够了纽普生物
素材来自:novopro.cn

474 x 647 · jpeg
免疫沉淀,免共淀,免共淀_大山谷图库
素材来自:dashangu.com
136 x 140 · jpeg
wb操作原理以及流程细节 - 豆丁网
素材来自:docin.com
979 x 716 · png
WB的原理 - 微生物学和寄生虫学讨论版 -丁香园论坛
素材来自:dxy.cn

270 x 249 · jpeg
免疫印迹-Western Blot 实验原理-实验流程-WB常见问题详解-南京铭研生物
素材来自:merrybio.com.cn
671 x 358 · png
Western blot检测（WB）价格,详情介绍-960化工网 – 960化工网
素材来自:chem960.com

465 x 267 · gif
WB发光检测中常见的问题及解决方法 - 英格恩生物技术博客
素材来自:engreen.cn
1040 x 650 · jpeg
WB原理及常见问题_哔哩哔哩_bilibili
素材来自:bilibili.com

421 x 217 · png
Western Blot进阶技巧第一弹——从了解目的蛋白开始
素材来自:chemicalbook.com
332 x 142 · jpeg
WB常见问题分析 - 每日生物评论
素材来自:bio-review.com

600 x 356 · jpeg
【细胞生物学原创系列五】Western Blot（上） - 知乎
素材来自:zhuanlan.zhihu.com
945 x 1337 ·
(完整word版)WB原理、步骤及总结,推荐文档 - 文档之家
素材来自:doczj.com

500 x 355 · jpeg
免疫印迹-Western Blot 实验原理-实验流程-WB常见问题详解-南京铭研生物
素材来自:merrybio.com.cn
915 x 542 · png
WB专栏——好的样本制备是实验成功的一半-爱必信(absin)官网
素材来自:absin.cn

412 x 417 · jpeg
Western Blot常见问题分析 | Affinity Biosciences LTD|亲科生物官网
素材来自:affbiotech.cn
640 x 346 · png
干货：Western blot全流程教你如何从0到1 - 哔哩哔哩
素材来自:bilibili.com

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)