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细胞毒性实验权威发布_细胞毒素是什么意思(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-12-01

细胞毒性实验

CCK-8实验全解，一文搞定！在进行细胞增殖和毒性实验时，合理的实验分组至关重要。以下是详细的实验分组和操作步骤： 𐟓Š 实验分组实验组：经过药物处理或基因过表达的细胞，加入CCK-8试剂。对照组：未经过任何处理的对照细胞，加入CCK-8试剂。空白组：不含细胞的空白培养基，加入CCK-8试剂。 PBS孔：灰色区域，用于防止液体过度蒸发。 𐟔젥ꌦ–𙦡ˆ 细胞增殖实验：每孔加入约1000-2000个细胞，100培养基。分别在0、24、48、72小时检测细胞的OD值。细胞毒性实验：每孔加入约5000～10000个细胞，100培养基（具体细胞数根据细胞大小和增殖速度决定）。孔板周围加100 PBS防止过度蒸发。 𐟓 检测方法在对应的检测时间点，从培养箱取出细胞。每孔加入10的CCK-8试剂，避光反应1-4小时（具体孵育时间根据细胞数决定，一般OD值在0.8-1.5时线性最佳）。在酶标仪上450nm下检测OD值，检测前需震荡混匀。 𐟒ᠦ𓨦„事项换液或不换液均可。若检测完以后第二天还需要再次检测，则全部吸出黄色反应液，再加入新鲜培养基培养细胞。通过这些步骤，你可以更好地理解实验组和对照组的区别，并顺利进行CCK-8实验。

𐟧젃CK-8细胞实验全流程详解 𐟔슃CK-8细胞实验是一种高灵敏度、无放射性的比色检测法，用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞的数量。以下是该实验的原理和步骤： 𐟔젥ꌥŽŸ理 CCK-8细胞活力检测试剂盒含有WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），在电子载体存在的情况下，WST-8（粉色）在电子载体（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞内线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲膦类染料（Formazan），并释放到细胞外溶解在培养基中，生成的甲膦物的数量与活细胞的数量成正比。 𐟧ꠥꌦ料及试剂细胞 96孔细胞培养板 CO2培养箱酒精灯移液器酶标仪 CCK-8试剂盒 𐟓 实验步骤制备细胞悬液：取生长状态良好的细胞，制备成一定浓度的细胞悬液，每孔加入100到96孔细胞培养板中。通常细胞增殖实验每孔加入2㗱0ⳤ𘪯100细胞，细胞毒性实验每孔加入5㗱0ⳤ𘪧𛆨ƒž/100（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定）。加入待测样本：根据实验需求，在培养孔中加入0-10待测样本，继续培养适当时间。如果是做细胞毒性试验，加入毒性物质后的培养时间需要摸索。例如，可以在每孔铺40水凝胶，成胶后，再种细胞，看24h、48h等常规增殖时间。细胞铺板：根据实验目的不同需要种板块数不同，如测24h、48h、72h三个时间点数，我们则需要准备3块板。96孔板的外圈需要加上PBS，防止液体在烘箱干掉。不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数。加入CCK-8：取10CCK-8溶液加入96孔细胞培养板，在37℃培养箱中继续孵育0.5-4小时。测定吸光度。最好用双波长检测，检测波长450nm，参比波长600nm。参比波长可以过滤掉因为液体浑浊、孔板底部不干净带来的测量误差（OD450-OD600即可）。计算方法细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]㗱00% 细胞抑制率=(AC-AS)/(Ac-Ab)]㗱00% As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液） AC：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物） Ab：空白孔吸光度（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物）每天定点测量，孵育CCK8的时间也都保持一致。通过以上步骤，您可以准确地测定细胞增殖或毒性实验中活细胞的数量，为科学研究提供有力支持。

CCK-8实验详解，必看！ CCK-8，全称为Cell Counting Kit-8，是一种广泛用于细胞增殖和毒性检测的试剂。它具有高灵敏度、无毒性、操作简便和性能稳定等优点。以下是使用CCK-8进行细胞实验的详细步骤： 𐟔젧𛆨ƒž消化与离心将处于对数期的贴壁细胞用胰酶消化，待细胞大部分脱落时，加入两倍胰酶体积的含血清培养基终止消化。将消化后的细胞转移至离心管，用PBS缓冲液冲洗细胞培养瓶，将残留细胞冲洗下来并转移至离心管。以1000r/min的速度离心3-5分钟，弃去上清液，用1ml含血清培养基重悬细胞。 𐟧𛆨ƒž计数与稀释使用细胞计数仪或牛鲍计数板对细胞悬液进行计数，根据计数结果对细胞进行稀释，推荐浓度为5～10*10^5细胞/ml。 𐟧ꠦŽ姧细胞选择96孔板，设置一个空白对照和7个实验组，每组设置3-5个复孔。每孔加入100ul稀释好的细胞悬液。在边缘孔加入2滴PBS缓冲液或100-200ul培养基，以减少蒸发带来的影响。 𐟕’ 细胞培养与药物处理将接种好的96孔板放入孵箱，培养12-24小时，待细胞贴壁良好后，吸出各孔培养基。空白组加入不含药物的培养基，实验组加入含不同浓度药物的培养基。根据药物作用时间，放入孵箱培养4小时、12小时或24小时。 𐟌ˆ CCK-8孵育与检测药物处理相应时间后，再次吸出各孔培养基，加入含CCK-8的培养基，CCK-8占细胞培养基体积的1/10。放入孵箱培养0.5-4小时，待颜色变为橙色即可检测。注意随时观察颜色变化，不宜时间过长。 𐟓Š 数据处理将96孔板取出，放入酶标仪检测，波长设为450nm。处理分析数据，得出实验结果。通过以上步骤，您可以使用CCK-8进行细胞增殖和毒性检测，希望这些信息对您有所帮助！

CCK-8实验怎么做？时间点控制很重要！最近在做细胞毒性实验，用CoCl2作为造模药物。实验步骤是这样的：每孔种1万个细胞，培养24小时后给药，再经过24小时后加入CCK-8，然后等待2小时测量吸光度。我的问题是，吸光度值怎么这么高？是不是细胞数量给多了？朋友建议我调整药物浓度，但我看了一些文章，发现时间点控制很重要。时间太短了会不会影响实验结果？之前试过给5千个细胞，结果太少。到底该怎么调整药物浓度和时间点呢？真的很迷茫，求指导！

𐟧젃CK-8实验注意事项全解析！ 𐟔젧𛆨ƒž接种量：在96孔板中，贴壁细胞的最小接种量为1000个/孔（100培养基）。对于白细胞，接种量应不低于2500个/孔（100培养基）。若使用24孔板或6孔板，需提前计算每孔的接种量，并按培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 𐟒Š 药物吸收考虑：在细胞毒性实验中，药物的吸收是一个关键因素。可以在加入药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度作为空白对照。 𐟌᯸ 培养条件：在培养箱中孵育时，培养板最外一圈的孔容易干燥挥发，造成体积不准确，增加误差。建议最外一圈的孔只加PBS，不作为测定孔用。 ⏱️ 培养时间：加入待测物后，培养的具体时间取决于待测物质的性质和细胞的敏感性，如6、12、24、48h。实验时可以选择不同作用时间进行细胞毒性检测。 𐟌€ 培养基更换：如果待检测物质有氧化性或还原性，在加入CCK-8之前应更换新鲜培养基，以去掉待测物质的影响。如果影响较小或没有影响，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收。 𐟕’ 显色时间：正常显色时间为1-4h，可以每半小时测定一次OD值，使其OD值保持在1-2之间后固定显色时间重复实验。 𐟔„ 延长显色时间：如果显色不够，可以延长培养时间，特别是血液细胞需要较长的显色时间（5-6h）。 𐟓 测定波长：对于高浑浊度的细胞悬液，建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm，推荐使用650nm。 𐟧Š 保存方法：若暂时不测定OD值，可以在各孔中加入10 0.1 M的HCL溶液或1% w/v SDS溶液，室温避光保存，24h内测定OD值不会发生变化。 𐟓… CCK-8保存：新鲜的CCK-8试剂为粉红色，储存时间过长则颜色加深、效率变低，最好不使用。通常情况下CCK-8试剂在0-5℃避光条件下可保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。

电子烟 vs 卷烟：谁更健康？大家好！今天我们来聊聊一个备受关注的话题——电子烟和传统卷烟，到底哪个对身体的伤害更小呢？作为一名控烟报道多年的记者，我有幸参观了RELX悦刻生命科学实验室，今天就带大家一起深入了解一下。𐟔 细胞实验结果𐟑€ 中山大学药学院的研究团队在全球毒理学权威期刊《毒理学快报》上发表了论文，指出在相同尼古丁剂量下，电子烟对多种细胞的毒性显著低于卷烟。研究还发现，电子烟导致的细胞ROS远低于卷烟，且没有启动基因层面的炎症信号通路。这证明了电子烟的细胞毒性显著低于卷烟。动物实验结果𐟐튥œ襏椸€项研究中，研究人员选用了RELX悦刻西瓜味电子烟及某款市售卷烟作为样品，将32只小鼠随机分为4组，分别暴露于洁净空气、低剂量电子烟气溶胶、高剂量电子烟气溶胶、卷烟烟雾中10周。结果显示，接触卷烟的小鼠肺系数显著升高，气管形态发生变化，而接触电子烟的小鼠肺系数无显著变化，气管形态正常。此外，卷烟暴露导致小鼠多项肺功能指标异常，但电子烟组仅有一个指标下降。病理学结果显示，卷烟和电子烟均可能导致小鼠肺部异常，但卷烟导致的损害更为明显。人体临床研究𐟧슦‚楈𛥏‘起了国内首个聚焦“电子烟安全性”的临床研究，由中山大学-雾芯科技雾化产品评价实验室承接。该研究拟招募36名有吸烟习惯的健康受试者，随机分组，观察不同产品对受试者呼吸功能、心血管功能的短期影响。虽然目前具体结果尚未发布，但这一举措无疑为电子烟的安全性提供了更多科学依据。总结𐟌Ÿ 综合以上研究结果，我们可以得出结论：在相同尼古丁剂量下，电子烟对身体的伤害显著小于传统卷烟。然而，这并不意味着电子烟完全无害，它仍然含有尼古丁等成瘾物质。因此，对于想要戒烟的朋友来说，最好的选择是完全远离任何形式的烟草制品。𐟒ꊥ𘌦œ›今天的分享能给大家带来一些有用的信息。如果你有任何疑问或想法，欢迎留言讨论哦！𐟒쀀

药理学细胞实验必学10大技术！细胞实验是许多实验室新手接触的第一类实验。掌握细胞培养后，接下来就是进行各种细胞实验了。以下是10个药理学细胞实验技术，助你轻松上手！基础篇 𐟔슧𛆨ƒž划痕实验细胞划痕实验（wound healing）是一种简单的方法，用于测定细胞的迁移和修复能力。它类似于体外伤口愈合模型。细胞毒性分析细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。常用的检测方法有CCK-8法、MMT法和LDH法。细胞增殖分析 Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂可以方便准确地用于细胞增殖和毒性分析。细胞RNA提取实验 Trizol是一种单相溶液，由苯酚和异硫氰酸胍等组成。通过加入Trizol，能破坏细胞并溶解细胞成分，利用氯仿的萃取得到上层水相（含RNA）、界面层和下层的红色有机相（含DNA和蛋白）。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质，能分离大小不一的各种RNA。用途包括RT-PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA体外转录与翻译等。细胞蛋白质提取实验细胞蛋白的提取是生物学实验中一种常见的实验方法，是很多其他生物学实验的前提。通过加入裂解缓冲溶液以及相应的蛋白酶抑制剂，能较好的保持细胞内生物大分子的天然状态。在透膜剂以及超声破碎仪的辅助下，细胞将发生破裂，内容物释放出来。用途包括蛋白免疫印迹、蛋白免疫沉淀、核浆分离等制备型和分析型实验。进阶篇 𐟚€ 细胞ROS实验活性氧（Reactive oxygen species, ROS）是超氧自由基、过氧化氢及其下游产物过氧化物和羟化物等的总称。参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程，与多种神经退行性疾病相关，如阿兹海默症、帕金森症等。通过检测ROS水平，可以评估疾病模型是否建立成功，亦可作为药效评价指标。细胞免疫化学 & 细胞免疫荧光免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似，但各有优缺点。细胞免疫蛋白共沉淀免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础，广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。细胞转染和分析（稳转；瞬转）细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。这些实验技术是药理学研究中不可或缺的一部分，掌握它们将为你未来的实验室工作打下坚实的基础！

𐟧샃K8实验步骤全解析𐟔 𐟌᯸CCK8实验，你了解多少？这是一种利用WST-8试剂盒进行的细胞增殖和细胞毒性检测方法哦！𐟒ኊ𐟔쥜襮ž验中，WST-8与1-Methoxy PMS共同作用，被细胞内的还原剂还原，生成橙黄色的水溶性甲攒（Formazan）。𐟒Š 𐟓ˆ细胞增殖越多越快，颜色就越深；细胞毒性越大，颜色则越浅。而且，颜色的深浅与细胞数目是线性关系哦！𐟓Š 𐟒ᩀš过观察颜色的变化，我们可以轻松判断出细胞的增殖和毒性情况。是不是很方便呢？✨ 𐟔快来试试CCK8实验，探索细胞的奥秘吧！𐟚€

细胞增殖与毒性分析：CCK8实验全攻略 𐟔젥ꌤ𘀯𜚧𛆨ƒž增殖分析 1️⃣ 制备细胞悬液：首先进行细胞计数，确保细胞数量准确。 2️⃣ 接种到96孔板：根据实验需求，每孔加入约100ul的细胞悬液，细胞数量大约在1-2㗱04之间，每个样本可重复4-6次。 3️⃣ 培养细胞：将细胞放入37℃的培养箱中，如果细胞需要贴壁，大约培养4小时。 4️⃣ 加入CCK8：每孔加入10ul的CCK8试剂，为了减少误差，建议将枪头浸入培养液中加入，并在加完试剂后轻轻敲击培养板以帮助混匀。 5️⃣ 培养与显色：将细胞继续培养0.5-4小时，不同细胞种类形成的Formazan量不同，如果显色不够，可以继续培养。 6️⃣ 测定吸光度：采用双波长测定法，检测波长在450-490nm之间，参比波长在600-650nm之间。 𐟔젥ꌤ𚌯𜚧𛆨ƒž毒性分析 1️⃣ 制备细胞悬液：同样需要进行细胞计数。 2️⃣ 接种到96孔板：根据实验需求，每孔加入约100ul的细胞悬液，细胞数量大约在5㗱04以上，每个样本可重复4-6次。 3️⃣ 培养细胞：将细胞放入37℃的培养箱中，如果细胞需要贴壁，大约培养4小时。 4️⃣ 加入毒性物质：根据实验设计，加入不同浓度的毒性物质。 5️⃣ 继续培养：根据毒性物质的性质和细胞的敏感性，继续培养至少一代以上的时间（例如6、12、24、48、60、72小时）。 6️⃣ 加入CCK8：每孔加入10ul的CCK8试剂，操作同实验一。 7️⃣ 培养与显色：将细胞继续培养0.5-4小时，如果显色不够，可以继续培养。 8️⃣ 测定吸光度：采用双波长测定法，检测波长在450-490nm之间，参比波长在600-650nm之间。

5年经验总结：10个必会细胞实验技巧细胞划痕实验 𐟌 细胞划痕实验是一种简单的方法，用于测定细胞的迁移和修复能力。它模拟了体外伤口愈合的过程。细胞毒性分析 𐟧ꊧ𛆨ƒž毒性是指由细胞或化学物质引起的细胞死亡事件，不依赖于凋亡或坏死。常用的检测方法有 CCK-8、MTT 和 LDH。 CCK-8 与 MTT 相比： CCK-8 更方便，无需洗涤细胞；检测速度快，线性范围广，灵敏度高；重复性好，生成的 formazan 是水溶性的，省去溶解步骤；对细胞毒性小，能保持细胞原状态。 CCK-8 与 LDH 相比： CCK-8 加入细胞中，而 LDH 检测的是细胞上清，细胞还可用于其他实验； LDH 法适合高通量检测。细胞增殖分析 𐟓ˆ Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。细胞 RNA 提取实验 𐟧슔rizol 是一种单相溶液，由苯酚和异硫氰酸胍等组成。通过加入 Trizol，能破坏细胞并溶解细胞成分，利用氯仿的萃取得到上层水相（含 RNA）、界面层和下层的红色有机相（含 DNA 和蛋白）。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质，能分离大小不一的各种 RNA。用途包括 RT-PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA体外转录与翻译等。细胞蛋白质提取实验 𐟧𜊧𛆨ƒž蛋白的提取是生物学实验中一种常见的实验方法，是很多其他生物学实验的前提。通过加入裂解缓冲溶液以及相应的蛋白酶抑制剂，能较好的保持细胞内生物大分子的天然状态。在透膜剂以及超声破碎仪的辅助下，细胞将发生破裂，内容物释放出来。用途包括蛋白免疫印迹、蛋白免疫沉淀、核浆分离等制备型和分析型实验。

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