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流式细胞检测权威发布_流式细胞检测是用来做什么的(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-12-01

流式细胞检测

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流式细胞仪入门指南：从零开始到精通嘿，大家好！今天我们来聊聊流式细胞仪的那些事儿。相信很多小伙伴在做实验的时候都遇到过流式这块的困惑吧？别担心，今天我就来给大家分享一些入门的小技巧，希望能帮到你们！流式细胞仪的基本设置 𐟓Š 首先，我们来说说流式细胞仪的基本设置。每次做流式检测时，250K FCS和SSC通道是必须的。FCS信号反映的是细胞体积，而SSC信号则反映细胞颗粒度。这两个通道的设置非常重要，因为它们直接影响数据的准确性。调电压技巧 𐟔犊在调整电压时，有几个关键点需要注意：目标细胞位于流式图的中央：样本细胞或目标细胞应该位于流式图的中央，这样才能保证数据的准确性。细胞群与细胞碎片分离：通过调整FCS和SSC电压，将目标细胞与细胞碎片分离。粘连体和团块的识别：250K-FCS-A和FSC-H主要是为了去粘连体，而200K-FSC-H和FSC-A则可以识别团块。补偿设置 𐟌ˆ 补偿设置是流式细胞仪中非常重要的一步。通过设置单染管来调补偿，可以人为校正减除掉原本不应该出现的阳性信号，将结果恢复到正常情况下展示。所有荧光都要各自做一个单染管，包括空白管、各单染管以及最后的样本管。每个荧光通道的电压值需保持一致，这样才能保证数据的准确性。实际操作小贴士 𐟒ኊ在做实验的时候，记得多尝试不同的电压设置，找到最适合你样本的条件。目标细胞体积较小的话，可以适当提高电压；体积较大的话，则可以适当降低电压。这样可以避免细胞碎片或粘连体的干扰。总结 𐟓 希望这些小技巧能帮到大家更好地理解和掌握流式细胞仪的使用。做实验的时候多思考、多尝试，相信你们一定能越来越熟练！祝大家实验顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！ --- 好了，今天的分享就到这里啦！希望对你们有帮助！如果还有什么不明白的地方，欢迎随时留言讨论哦！

流式细胞术检测细胞周期全攻略细胞周期是指从细胞分裂产生的新细胞生长开始，到下一次细胞分裂形成子细胞结束的过程。这个过程主要分为Go、G1、S、G2和M期，其中M期又分为前期、中期、后期及末期。Go期是细胞休眠期，暂时离开细胞周期，停止细胞分裂，去执行一定的生物学功能。 𐟌€ 流式检测细胞周期的基本原理流式检测细胞周期的常用方法是检测DNA的含量。通过选择能与DNA结合的荧光染料，根据细胞各个时期DNA含量不同从而荧光强度不同的方法，检测出细胞周期。常用的染料有PI、7AAD、DAPI、Hoechst33258和DRAQ7等。 𐟔砦“作步骤离心收集细胞，预冷PBS洗细胞2次。将细胞悬液滴入预冷的70%乙醇中，于4℃固定过夜，或-20℃长期固定。离心收集细胞，PBS洗细胞1次。加入500ul稀释后PI染液（含1mg/mlPI，2mg/mlRNaseA），室温避光孵育30min。流式细胞仪检测：细胞计数2-3万个。使用Flowjo分析结果。 𐟚蠦𓨦„事项进样速度需要控制在低速以下，否则结果中可能没有S期存在。 PI染料具有细胞毒性，需在1小时内上机检测。 PI染料与DNA结合松散，洗涤可能会造成染料丢失。除非染色结果异常，无需洗涤。使用预冷乙醇固定时，向内加入细胞时，如果产生大量絮状物，说明细胞状态差，胞内DNA释放缠绕细胞，造成团块，需重新制备样品。 PI可与RNA结合，因此在染色时需加入RNA酶去除胞内RNA。 𐟓Š 数据分析 Flowjo分析结果时，需要注意CV值（变异系数），一般CV值越小，峰型越好，越尖锐。G2/G1的比值一般为1.8-2.0之间，若小于1.8，则细胞染色不充分。通过以上步骤和注意事项，可以准确地进行流式检测细胞周期的实验，并得到可靠的结果。

流式细胞术全攻略：从基础到进阶流式细胞术（flow cytometry）是一种利用流式细胞仪快速定量分析细胞群物理化学特征的新技术，起源于20世纪60年代末期。它主要分为流式分析和分选两部分。今天，我们主要介绍流式分析中的基本操作与技巧。 𐟔 流式细胞术的三大要素流式细胞仪：市面上有多种型号的流式细胞仪，但基本结构相同，包括液流系统、光路系统和监测分析系统。液流系统：负责细胞的单细胞处理和液流控制。光路系统：从激光器开始，根据激光波长分类，如488nm的蓝激光器、635nm的红激光器和405nm的紫激光器。不同的激光器照射到细胞后，会产生不同的光信号，经过不同的光路系统被不同通道接收。检测分析系统：以通道为单位将细胞的光信号汇总分析，得出样品的物理化学特征。通道相当于光电倍增管，将光信号转变为电子信号并放大。分为散射光通道（FSC通道、SSC通道）和荧光通道。一个激光器下可以有多个荧光通道，一个通道对应多种荧光染料。样品细胞：流式细胞术的检测对象是呈独立状态的悬浮于液体中的细胞。如果要检测组织中的细胞，需先将组织制备成单细胞悬液。荧光偶联抗体：样品细胞需标记荧光素偶联抗体，被激光照射后才能发射荧光信号，从而得到细胞表达某抗原分子的情况。 𐟒𛠨œ𚥈†析系统：如BD的DIVA系统，负责数据的处理和分析。通过这些步骤，流式细胞术能够提供细胞群体中细胞的详细物理化学特征，帮助研究人员更好地了解细胞的性质和行为。

S期缺失？解谜与对策！在使用流式细胞仪检测细胞周期时，发现S期要么缺失，要么为负值，而同一批处理的另一管样品周期却正常。这是什么原因呢？𐟤” 𐟔 观察图示，我们发现：图1显示了一管样品的结果，其中S期缺失或为负值。图2展示了另一管样品的正常周期分布。图3和图4提供了更详细的数据分析。 𐟒ᠥ糖𝧚„解决方案：检查实验操作是否规范，确保所有步骤都按照标准操作流程进行。确认使用的试剂和仪器是否符合要求，是否有损坏或过期。尝试不同的实验条件，如温度、时间等，以找到最佳的实验条件。 𐟔젥œ訿›行细胞周期分析时，确保数据的准确性和可靠性至关重要。通过上述方法，可以尝试解决S期缺失或为负值的问题，从而获得更准确的实验结果。𐟓Š

流式细胞术：单细胞分析的利器 𐟌€ 流式细胞术（Flow Cytometry）是一种强大的技术，它利用激光和荧光检测器来快速、多参数、定量地分析单个细胞。简单来说，就是让细胞在流动状态下通过激光检测器，从而获取关于细胞的各种信息。流式细胞仪的组成和工作原理 𐟔슦𖲦𕁧𓻧𛟯𜚨🙤𘪧𓻧𛟦供动力，让单个细胞在鞘液的包裹下流动，并通过激光检测器。光学系统：细胞结合荧光染料后，经过激光激发，产生散射光信号和荧光信号。电子系统：将光学信号转换为电子信号，进行后续分析。散射光信号：主要有前向角散射光（FSC）和侧向角散射光（SSC）。FSC表示细胞的相对大小，而SSC则反映细胞的颗粒度，比如细胞器多少和细胞表面粗糙程度。荧光信号：通过荧光标记的单克隆抗体对样本进行染色，荧光信号可以反映抗原的表达量。表达量越高，结合的荧光素偶联抗体越多，荧光信号就越强。多色流式细胞术的荧光染料搭配原则及注意事项 𐟌ˆ 选择最亮的荧光染料：根据机器配置选择亮度最高的染料。平衡抗原表达量和染料荧光强度：确保抗原表达量和染料荧光强度之间的平衡。减少光谱重叠：让荧光染料的光谱重叠达到最小，减少信号干扰。保持细胞活性和状态：流式细胞仪不仅能检测细胞表面的荧光，还能探测细胞内的荧光。因此，检测细胞表面的分子时，要保证细胞的活性，并尽可能保持细胞静止。避免串联染料带来的假阳性：串联荧光染料会产生非放射性的能量转移，导致荧光淬灭和敏化。合理选择染料可以减少这种干扰。流式细胞术不仅在基础研究中广泛应用，还在临床诊断、药物研发等方面发挥重要作用。掌握这项技术的基本原理和操作技巧，将有助于更好地理解和应用这项强大的工具。

流式细胞术检测细胞凋亡结果解析𐟓Š 在流式细胞术检测细胞凋亡的实验中，结果通常被分为四个象限，每个象限代表不同类型的细胞状态。以下是这四个象限的具体解释： 1️⃣ 左上象限：这个区域的细胞被PI染色，但未被Annexin V-FITC染色。这意味着这些细胞的细胞膜已经受损，但尚未发生PS外翻，可能是机械损伤的细胞或细胞碎片。 2️⃣ 左下象限：这个区域的细胞既不被Annexin V-FITC染色，也不被PI染色。这些细胞是正常的、存活的细胞。 3️⃣ 右上象限：这个区域的细胞同时被Annexin V-FITC和PI染色。这些细胞处于晚期凋亡阶段或坏死阶段，细胞膜的完整性已经受损，PI能够进入细胞内与DNA结合，同时PS外翻仍然存在，因此Annexin V-FITC也能与之结合。 4️⃣ 右下象限：这个区域的细胞只被Annexin V-FITC染色，不被PI染色。这些细胞处于早期凋亡阶段，PS外翻但细胞膜尚未受损，因此PI无法进入细胞内。通过这些象限的分布情况，可以了解细胞凋亡的不同阶段和类型，从而进行深入的研究和分析。

揭秘细胞凋亡！Annexin V染色 𐟔 细胞凋亡的早期，细胞膜表面会出现破损，导致磷脂腺丝氨酸（PS）从细胞内膜翻转到外膜。这一过程发生在DNA片段化之前，因此检测PS的表达可以反映早期的细胞凋亡。 𐟒᠁nnexin V是一种相对分子质量为35,000的CaⲢ𚤾赖性磷脂结合蛋白，对PS有很高的亲和力。它能够与暴露在细胞外的PS结合，从而标记出早期凋亡的细胞。 𐟌ˆ 通常，Annexin V被标记上荧光染料FITC，而碘化丙啶（PI）则用于区分凋亡和坏死细胞。PI的膜通透性较差，因此只能标记坏死的细胞。 𐟓Š 在流式细胞仪的检测结果中，Annexin V-FITC（+）和PI（-）的细胞为凋亡细胞，而Annexin V-FITC（+）和PI（+）的细胞则为坏死细胞。 𐟔젩€š过这种染色方法，科学家们能够精确地监测和区分细胞的凋亡和坏死状态，为研究细胞生物学和疾病机制提供了有力工具。