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单核/巨噬细胞流式分析:新手必读指南 大家好,今天我们来聊聊单核/巨噬细胞流式分析的基础知识,适合新手小白哦! 单核细胞的基本知识 单核细胞在人体内可是个勤奋的小家伙,它们在脉管系统、骨髓和脾脏中不停地循环。在正常情况下,它们不会增殖,但一旦迁移到外周组织,就会分化成树突状细胞或巨噬细胞。单核细胞的特性是它们具有可塑性和异质性,能够快速调整功能表型来适应环境的变化。 单核细胞的培养 늊想要研究单核细胞,首先得把它们从血液或其他组织中分离出来。你可以用阴选试剂盒从 PBMC 中分离出有活性的单核细胞,也可以用 CD14、CD64 和 CD192 作为标志物进行流式分选。原代人单核细胞可以在体外培养,但在 5 天内会在血清或 M-CSF 存在下开始分化为巨噬细胞。单核细胞以粘附和非粘附细胞混合形式生长,比例取决于培养基和刺激因子。 除了原代单核细胞,THP-1 细胞系也常用于研究。它们特别依赖细胞浓度,ATCC 建议的浓度是 10E5~10E6/mL。状态不好的 THP-1 培养 3 天后数量不多,继续培养 1~2 天,培养基会严重泛黄。THP-1 适合在 pH 偏酸性环境生长,对培养基很敏感,不宜频繁换液,尽量用相同酸碱度的 1640 培养基。复苏 THP-1 细胞有难度,建议冻存时密度大些,复苏时用小培养瓶。 流式分析巨噬细胞的注意事项 在分析巨噬细胞时,首先要处理组织,比如解剖、研磨、剪碎等,然后酶消化制备单细胞悬液。在上机检测前建议将样本过滤,保证准确性,还能避免堵管。单核细胞可以用特殊分化培养基分化为巨噬细胞,用 GM-CSF 和 M-CSF 能让单核细胞分化。在 1640 培养基中刺激单核细胞,添加相应物质能导致 M1 或 M2 极化。还可以用不同细胞因子先后刺激单核细胞来获得 M1 和 M2 极化。用 PMA 刺激 6 小时能诱导 THP-1 来源的巨噬细胞,然后继续培养能让其向 M1 或 M2 极化。 希望这些基础知识能帮到你们,赶紧动手试试吧!ꀀ
小鼠急性肺损伤模型制备及评估指南 駧:Mus musculus(小鼠) 基础信息 来源:脂多糖(LPS)介导的急性肺损伤 模式动物品系:Balb/c小鼠,SPF级,周龄4~6周,体重20g~22g 实验分组:随机分组,包括对照组、模型组、阳性药物组和受试药物组(三个剂量梯度组),每组15只小鼠 实验周期:24小时 建模方法 麻醉小鼠,待呼吸较慢时开始操作 小鼠行气管插管,稍按压胸部后注入0.5ml空气阔胸 采用气管滴注方法,经气管滴注LPS溶液(溶于生理盐水,给药剂量10mg/kg),药物需靠小鼠自主呼吸而吸入 将小鼠直立,垂直旋转小鼠,使药物在肺内均匀分布,然后将老鼠放在加热垫上 待老鼠清醒后正常饲养 正常对照组的小鼠做同样的操作,但向气管内注射等体积的生理盐水 注意事项 麻醉状态要恰到好处,小鼠呼吸较慢,离开麻醉机后2分钟内不会挣扎 药物最好由小鼠自主吸入,若未吸入可用0.5ml空气送入药物 模型评价 肺损伤后的大体观察:肺损伤后有肉眼可见肺部大面积出血渗出,可以直观的反映肺损伤程度 肺的湿/干重比:肺的湿/干重比是反应肺水肿的直接指标,也是反应肺损伤严重程度的敏感指标。建模后,大量液体渗出至肺泡和肺间质,导致肺的重量增大,而肺的干重则不受影响。处死大鼠、剪断气管后取全肺,称湿重,然后将肺置于65℃恒温箱中干燥,24小时后取出称干重,计算肺湿/干重比值 组织病理学:取左肺4%多聚甲醛固定,然后将肺组织常规脱水,石蜡包埋,切片(厚度为5),HE染色。HE染色肺组织学评价可以直观的反应肺损伤的程度,ALI组织病理学主要表现为肺泡中性粒细胞及红细胞的渗出,肺泡壁透明膜的形成。HE染色后可在低倍镜下观察到整个左肺组织的炎症细胞浸润、水肿以及损伤,评估肺部损伤分布情况;而高倍镜下则可以对肺泡结构进行辨认,对肺损伤程度进行评估和评分 评分方法:取6个视野进行出血及水肿评分 0分:没有损伤 1分:<25%的损伤面积 2分:25%~50%的损伤面积 3分:50%~75%的损伤面积 4分:>75%的损伤面积 左肺叶气管解剖,行支气管插管,预冷的(4度)无菌生理盐水1ml进行支气管肺泡灌洗3次,共3ml,回收支气管肺泡灌洗液(BALF)至无菌离心管中,1500r/min离心10分钟,收集上清液,-80℃保存,使用ELISA试剂盒检测肺泡灌洗液中TNF-IL-6和IL-1퉧𛆨因子的含量。
细胞因子检测技术介绍、比较、应用及资料全解析
威奥生物ELISA试剂盒再发高水平论文 威奥生物的ELISA试剂盒再次成为研究热点!最近,威奥生物的ELISA试剂盒在ONCOIMMUNOLOGY期刊上发表了一篇题为"eerad blast facilitates immunosuppression through promoting IL-6-induced M2-like phenotype of macrophage"的优秀论文。论文引用了一种IL6(人白介素6)的ELISA KIT产品,影响因子高达6.5。 젨详细研究了IL-6诱导的M2样巨噬细胞现象,探讨了其在免疫抑制中的作用。实验结果显示,IL-6通过促进M2样巨噬细胞的产生,从而在免疫系统中发挥重要作用。 论文中还提到了使用ELISACalc回归拟合计算程序进行数据分析,通过四参数Logistic曲线拟合,得出了详细的回归方程和拟合参数。这些数据为研究IL-6的作用机制提供了有力的支持。 ᠥ聥奧物的ELISA试剂盒不仅在科研领域表现出色,还在实际应用中提供了可靠的检测手段。如果你对IL-6等相关研究感兴趣,不妨关注一下威奥生物的产品和服务。
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