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原代细胞培养权威发布_原代细胞培养和传代细胞培养的区别(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-12-03

原代细胞培养

细胞培养入门指南：从零开始到大师刚接触细胞培养的小伙伴们，理论知识可能已经堆成山了，但一到实际操作就手忙脚乱，各种“黑话”听得一头雾水，不知道从哪儿下手。别担心，今天我就来带你从零开始，系统地介绍细胞培养的各种知识，帮你快速上手，成为细胞培养的大神！细胞培养基本概念 𐟧슧𛆨ƒž培养是什么？简单来说，细胞培养就是把活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养。狭义的细胞培养主要是指分离（散）细胞培养，而广义的还包括单（个）细胞培养，也就是克隆。这个克隆是通过单个细胞的有丝分裂形成的细胞群体。原代细胞原代细胞就是初次培养的细胞。简单来说，就是把培养物接种到培养皿中，任其生长繁殖而不更换生长器皿。传代培养随着培养时间的延长，细胞不断分裂繁殖，细胞之间相互接触会发生接触性抑制，生长速度逐渐减慢甚至停止。同时，培养皿中的营养物逐渐不足，代谢产物不断累积，不利于细胞继续生长。这时候就需要将培养物分割成小的部分，重新接到新的培养器皿中进行再培养。细胞系原代细胞培养物经过首次传代培养后所繁殖的细胞群体称为细胞系。狭义的细胞系是指可连续传代的细胞，广义的则是指可传代的细胞。正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后就会丧失增殖的能力，这个过程被称为衰老。这种细胞系被称为有限细胞系。而一些细胞系通过转化过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生，也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力后就成为连续细胞系。细胞培养的环境 𐟌쯸 无菌操作是关键细胞培养实验室的主要要求是时时维持无菌状态。获得无菌条件最简单、经济的方式就是使用细胞培养超净台。超净台应足够一人使用，内外部均采用易清洁设计，具有充足的照明，使用舒适。超净台物品摆放使用过程中需保持超净台内工作空间整洁有序，将所有物品放在直视范围内，便于取用。使用前向放入超净台内的物品喷洒70%的乙醇，擦拭清洁，进行消毒。物品摆放习惯超净台中部：摆放细胞培养类耗材。超净台右前方：摆放移液耗材及器械，便于取用。超净台右后方：摆放生物试剂和培养基，便于吸取。超净台中后部：摆放试管架等，用于固定其他试剂。超净台左后方：摆放小型容器，用于盛放废液。总结 𐟓 细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。希望这篇指南能帮你从零开始，逐步掌握细胞培养的各项技能，成为细胞培养的大神！加油吧，新手小白们！

如何安全地将多肽溶解在DMSO中？二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻保护剂，在细胞库中应用广泛。它在细胞冷冻过程中能防止胞内/胞外晶体的形成，通常使用的工作浓度为10%。DMSO常与盐或血清白蛋白结合。疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中，但DMSO会增加细胞的通透性，对细胞有毒性作用。高浓度的DMSO绝不可用于细胞培养。浓度为5%的DMSO即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍0.5% DMSO，少数可以容忍1%的浓度，而不表现出严重的细胞毒性。然而，原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线，其浓度应低于0.1%。对于某些疏水性非常高的多肽，可以尝试先将其溶解在少量的DMSO（30-50ul, 100%）中，然后慢慢（一滴一滴地）将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中，直至理想浓度。如果滴加过程中，肽溶液开始变浑浊，说明已经达到了溶解极限。另外，超声波有助于多肽溶解。经验总结：几乎所有的细胞都能安全地耐受0.1% DMSO。广泛用于细胞培养的DMSO终浓度为0.5%，不会引起细胞毒性。虽然对部分细胞来说，1% DMSO也不会产生细胞毒性，但我们推荐0.5%。也有5% DMSO成功地应用于某些细胞的案例。始终保持终浓度在0.5%，但储存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。

小鼠肺组织单细胞悬液制备全攻略 𐟔젥ꌧ›„：从实验室模型小鼠的肺组织中提取单细胞悬液，用于类器官培养和药物筛选研究。 𐟔砥ꌤ𛪥™诼š单细胞悬液制备仪JX-CKSM-6WK 𐟐�ꌦ 𗥓：模型小鼠一只 𐟧𔠥ꌨ€—材：消化酶、终止液、移液枪枪头、台盼蓝染料 𐟓 实验步骤： 1️⃣ 打开仪器电源，启动管架加热和模块加热功能；将消化酶和终止液在冷水中解冻。 2️⃣ 麻醉小鼠后进行解剖，取出肺组织，并用预冷的PBS冲洗血水。 3️⃣ 用眼科剪剪取组织样本，放入装有消化液的消化管中。 4️⃣ 将消化管放入管架中预热4分钟，然后转移至运行模块中，关闭仪器盖子，选择对应程序，运行结束后取出消化管。 5️⃣ 消化后的组织块变为浑浊的细胞悬液，通过70的滤网过滤细胞，加入终止液终止消化，离心后重悬，后续可进行类器官培养。 𐟓Š 实验结果：肺组织单细胞悬液的活率为93%。 𐟒᠔ips：单细胞制备仪是一种集成了金属浴消化与温和剪切组织的新一代单细胞细胞悬液制备设备，适用于流式细胞术、单细胞测序和原代细胞培养等实验。它具有起始组织量小、时间短、细胞得率高、细胞活性高的特点。采用国际DIN方法设计，低噪音，使用方便，性能稳定，对样品的消化处理过程始终处在恒温状态。

雅酶血清：科学培养的秘密武器 𐟧좜芰ŸŒ 探索雅酶血清的奥秘，为您的科学研究提供最优质的保障。我们的血清产品，源自全球顶级供应商，确保每一滴都是精华。 𐟔 雅酶血清，100%合法进口，100%原装进口，100%胎牛血清，为您的实验提供最纯净的细胞培养环境。 𐟒ᠦˆ‘们的血清，全程无冻融，三次0.1无菌过滤，确保无菌无污染，为细胞培养提供最佳条件。 𐟔젧𛏨🇤𘥦 𜧚„支原体检测和病毒筛查，我们的血清不仅安全，而且高效，是您实验室的理想选择。 𐟓栦ˆ‘们拥有丰富的细胞资源库，能够满足各种细胞系和原代细胞培养的需求，为您的研究提供全方位的支持。 𐟓… 存储温度：-10至-20℃，保质期长达数年，确保血清的新鲜度和活性。 𐟓ž 选择雅酶血清，就是选择了专业、品质和信任。立即购买，开启您的科研之旅！

细胞培养技术：从基础到实践细胞培养是生物学和医学研究中的一项关键技术。根据实验需求，我们会选择不同类型的细胞进行实验。同一组织的细胞由于其来源、培养方式和建系方法的不同，可能有多种不同的名称，并且具有不同的应用场景。细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，并在适宜的人工环境中使其生长的过程。细胞可以通过直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，或者来源于已建立的细胞系或细胞株。正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后会丧失增殖能力，这是由遗传基因决定的，也被称为衰老。此类细胞系被称为有限细胞系。然而，一些细胞系可以通过特殊过程变为永生化细胞系，这个过程可以自发发生，也可以通过化学或病毒诱导发生。当一个有限的细胞系经历转化并获得无限分裂的能力时，它就成为了一个连续细胞系。细胞培养主要分为原代培养和细胞系培养。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，并在适宜条件下增殖。严格地说，从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段即为原代培养，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。一般持续1-4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。第一次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。来自于原代培养的细胞系寿命有限，随着细胞的传代，生长能力最强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。如果通过克隆或其他方法从培养物中阳性筛选出了细胞系的亚群，则该细胞系成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株通常会获得一些其他的遗传学改变。各种细胞的培养条件相差很大，但培养细胞的人工环境必须包括合适的容器，其中含有一定的基质或培养基，为细胞提供必需的营养物质（氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质）、生长因子、激素和气体（O2、CO2），并调节生理化学环境（pH、渗透压、温度）。大多数细胞为贴壁依赖性细胞，必须附着于固体或半固体基质上培养（贴壁培养或单层培养），而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长（悬浮培养）。一些特殊的难以贴壁的细胞可以在培养瓶/皿内添加细胞外基质(ECM)进行培养，以促进细胞粘附。

细胞培养基大揭秘：各种类型详解细胞培养基是细胞生物学研究的基础，不同的培养基适用于不同类型的细胞。以下是几种常见的细胞培养基及其特点： DMEM培养基 𐟧ꊄMEM培养基的氨基酸含量是MEM的两倍，维生素含量则是MEM的四倍，还含有硝酸铁、丙酮酸钠和一些补充氨基酸。DMEM分为低糖型和高糖型，葡萄糖含量分别为1ug/L和4.5ug/L。高糖型适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，还可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。 MEM培养基 𐟌𑊍EM培养基，又称低限量Eagle培养基，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基。 DMEM/Low glucose培养基 𐟍‡ DMEM/Low glucose培养基是由MEM培养基改良而来，低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。 Ham's F-12培养基 𐟌𜊈am's F-12培养基用于支持原代细胞的生长和分化。F-12K增加了氨基酸、丙酮酸、生物素、钙、镁、腐胺和酚红的含量。 McCoy's 5A medium培养基 𐟌🊍cCoy's 5A medium培养基是DMEM和F12的1:1混合物，能够在低血清条件下支持多种哺乳动物细胞的培养，如MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞和人内皮细胞等。 RPMI-1640 medium培养基 𐟒‰ RPMI-1640 medium培养基是在McCoy’5A的基础上进行改良研发出的，最初用于人白血病细胞的悬浮培养，后来发现也适用于HeLa、MCF-7、PC12、外周血单核细胞（B/T淋巴细胞）和星形细胞的培养。RPMI 1640与其他培养基的区别是含有还原型谷胱甘肽和高浓度维生素，还含有MEM、DMEM中不含的生物素、维生素B12和对氨基苯。这些培养基各有特色，适用于不同的细胞类型和研究需求。选择合适的培养基对于细胞培养的成功至关重要。

#胎牛血清# HAKATA血清——上海慧颖生物科技有限公司(简称“慧颖生物”)成立于2012年，是一批由美国留学归来的致力于服务中国生物领域的青年创办的一家集生产、研发和技术服务的生物公司。慧颖生物一直致力于生物细胞培养领域，坚持助力细胞培养和酶免ELISA试剂盒的研发生产。2018年成立自主品牌“HAKATA”，有胎牛血清和其它种属血清、无外泌体血清、传代细胞、耐药株、原代细胞、完全培养基及细胞培养辅助试剂，ELISA试剂盒和生化试剂。

细胞培养全攻略：从零开始到专家嘿，大家好！今天我们来聊聊细胞培养的基础知识，特别适合刚入门的小伙伴们。准备好你们的笔记本，我们开始吧！实验室介绍 𐟏š️ 首先，咱们得先了解一下实验室的基本构造。细胞培养实验室通常有三个房间：缓冲间、无菌操作室和准备室。每个房间都有特定的功能，比如缓冲间是防止空气对流，无菌操作室则是进行实验的地方。进入实验室前，记得换上专用的拖鞋和实验服，戴好口罩和帽子。主要设备 𐟔슧𛆨ƒž培养需要用到一些关键设备，比如培养箱、超净工作台、倒置显微镜等。培养箱是用来模拟体内环境，让细胞生长和繁殖的地方。超净工作台则是进行无菌操作的地方，确保实验环境干净无污染。倒置显微镜则是用来观察细胞的生长情况。细胞培养基础 𐟌𑊧𛆨ƒž培养分为原代培养和传代培养。原代培养是从机体中取出组织后进行的首次培养，而传代培养则是将原代细胞增殖到一定密度后，经过处理再转移到新的培养瓶中继续培养。传代的次数就是细胞的代数。无菌操作 𐟧𜊦— 菌操作是细胞培养的关键，所有与实验无关的物品一律不能带入实验室。进入实验室后，要穿戴好工作服、口罩和鞋套。吸管使用前、培养瓶开启之前以及合盖前都要在酒精灯附近操作，确保无菌环境。细胞传代操作 𐟧스𜠤𛣦“作需要用到胰蛋白酶和EDTA溶液来消化细胞。消化时间要把握好，一旦胞质回缩、连接变松散或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。消化后的细胞要用无菌吸管吹打分散，然后分装到新的培养瓶中继续培养。注意事项 ⚠️ 严格无菌操作：所有操作都要在超净工作台内完成，确保无菌环境。适度消化：消化时间要把握好，避免过度消化导致细胞死亡。观察细胞形态：在消化过程中要注意观察细胞的形态变化，及时终止消化。好了，今天的细胞培养基础就聊到这里。希望对大家有所帮助！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

大鼠原代巨噬细胞（BMDM）培养全攻略大家好！之前有朋友问我关于大鼠原代巨噬细胞（BMDM）的培养方法，今天终于有时间来分享一下我的经验啦！希望这些小建议能帮到那些和我一样曾经被这些小家伙们折腾得头大的同学们。首先，先说一下我的培养方法吧。我用的是M-CSF法，浓度大概在25-100ng/ml之间，这个区间都可以，浓度越高越好，当然也要看你的钱包厚度啦。血清浓度我用的是10%。选鼠和准备工作 𐟐튊我用的是4-8周的雄性SD大鼠，个人感觉4-5周的比较好用，质量上没啥太大差别，但数量上年龄大的会多一些。具体步骤如下：脱颈、摘腿、取骨：先把大鼠脱颈处死，然后摘掉腿，取出骨髓。剪两头、冲、过滤：把骨髓细胞剪成两段，用L-DMEM冲洗，200目过滤，离心重悬。培养和分离 𐟧ꊊ把骨髓细胞培养12-16小时后，取上清离心重悬，用含M-CSF的1640继续培养。这时剩下的贴壁细胞是间充质干细胞（MSC），如果不需要可以弃掉，需要的话可以用L-DMEM继续养。换液和保养 𐟌€ 第三天半换液（含M-CSF），第五天全换液（含M-CSF），第七天用PBS洗后换不含M-CSF的培养液。据说保养好的话，这些细胞最多可以活3周哦～常见问题解答 𐟤” 一只鼠能获得多少巨噬细胞？一只鼠可以获得一六孔板的量。 protocol严格吗？并不严格，除了最开始贴壁要足够，后续主要看因子浓度和细胞状态。贴得不多别着急换液，都贴了就没必要继续诱导了。有时候细胞急需用，我甚至会第四天全换液、第五天直接收。为什么我的BMDM会长角？这个问题真的困扰了我好久。后来发现长角不是状态不好，而是M2极化了。至少我后续诱导极化时获得的M2形态就是这些“长角M0”。避免这个问题有几种措施：换培养基：如果是H-DMEM，换成1640。贴壁步骤：这个步骤很重要，目的是分离出MSC，有大量研究表明MSC会促进巨噬细胞M2极化。这也是我建议用小鼠不用大鼠的原因，小鼠的MSC远没大鼠好活。先用rMSC喜欢的L-DMEM给人伺候贴舒服了，这时我们要的单核细胞全悬浮着，再取来诱导。检查M-CSF：我用的是国产某岸蛋白，分装冻-80后7个月效果就不好了。 PBS泡：试试PBS泡5-10分钟（适用于角没长很厉害的细胞）。小结 𐟓 接触这些细胞一年多，从啥都不会到用它毕业，对它们真是又爱又恨。总之希望能为科研界尽点微薄之力吧！祝大家顺利！

动物实验中心，揭秘动物实验！欢迎来到北京动物实验中心，这里是探索动物实验的奇妙世界！𐟌 动物造模服务 𐟐🯸 我们提供各种动物手术模型，包括大小动物模型，以及药物诱导模型。我们进行的行为学检测、影像检测、生化生理指标检测等，确保模型的准确性。细胞实验 𐟧슧𛆨ƒž培养、细胞爬片、细胞转染、流式细胞术、慢病毒包装、细胞划痕实验、细胞迁移、细胞侵袭、稳定株筛选、原代细胞分离等，我们都有专业的服务。病例学检测 𐟔 从硬组织切片到免疫组化，我们提供全面的病例学检测服务。包括不脱钙切片、脱钙、软化、包埋、切片、染色、特殊染色、免疫荧光、病理图像采集等。分子生物学检测 𐟔슨祅‰定量PCR、miRNA检测、DNA定量、甲基化测序、质粒提取、质粒构建、菌种鉴定、彗星实验、引物合成等，我们提供专业的分子生物学检测服务。蛋白相关检测 𐟧𜊗estern Blot、蛋白质纯化、蛋白质双向电泳、单克隆抗体制备、原核表达、免疫沉淀、免疫共沉淀、SILAC标记定量蛋白质组学等，我们都有专业的检测方法。快速检测服务 ⚡ ELISA检测、生化检测、血细胞分析、组织样本匀浆、肝功能肾功能、心肌酶谱、血常规、血脂、血糖、凝血因子、尿常规等，我们提供快速的检测服务。组学服务 𐟌 基因组学、转录组学、单细胞测序、蛋白质组学、代谢组学、10X Genomics等，我们提供全面的组学服务。欢迎各位老师前来参观，探索更多动物实验的奥秘！𐟌Ÿ

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