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酶标仪原理前沿信息_多功能酶标仪原理(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-03

酶标仪原理

BCA蛋白定量法的科学原理详解 𐟌𑊨›‹白质是生物体内不可或缺的重要成分，其定量分析在生物研究和医学诊断中至关重要。BCA蛋白定量法是一种常用的蛋白质定量方法，其原理如下： 1️⃣ 铜离子还原：在碱性环境中，蛋白质分子中的肽链结构能够与二价铜离子（CuⲢ𚯼‰结合，形成配合物，同时将CuⲢ𚨿˜原为一价铜离子（Cu⁺）。 2️⃣ BCA与铜离子结合：BCA试剂（二辛可宁酸）能够特异性地与Cu⁺结合，两分子的BCA螯合一个铜离子，形成稳定的紫蓝色复合物。 3️⃣ 吸光性与蛋白浓度：这种水溶性的紫蓝色复合物在562nm处具有强烈的吸光性，且颜色的深浅（即吸光度）与蛋白质浓度成正比。通过酶标仪等设备检测该复合物在562nm处的吸光度，再依据已知蛋白浓度的标准品绘制的标准曲线，将未知蛋白的吸光度代入标准曲线，即可得到未知蛋白的浓度。 BCA蛋白定量法以其灵敏度高、操作简便而广泛应用于蛋白质浓度的测定。

很多人常常分不清萤光素酶与荧光蛋白的”ying”字是不同的，常把萤光素酶写作荧光素酶，事实上，萤光素酶是源自萤火虫，故而应该写作萤光素酶。而萤光素酶与荧光蛋白都是基于重组蛋白的报告基因，可以用于定位或成像研究。他们的区别主要在于其来源、发光原理、检测方法和用途。首先，萤光素酶是一种酶，来源于萤火虫，或海肾，其主要作用是将荧光素转化为荧光素酸并发出光。而荧光蛋白是一类蛋白，存在于多种生物中，如海洋荧光生物，水母，珊瑚，海葵，它们能自然发光。在发光原理上，萤光素酶通过生物发光反应产生光，这个过程涉及到荧光素的氧化，需要催化底物发生化学反应，需要氧气参与。而荧光蛋白通过其内部的荧光团自身发光，不需要氧气参与。其发光原理属于物理现象，通过吸收相应波长的激发光后，发出特定的荧光。检测方法上，萤光素酶的活性可以通过多功能酶标仪测定。荧光蛋白的发光强度一般通过荧光计测定，荧光显微镜，激光共聚焦显微镜或流式细胞仪。 #汉恒生物##科研##萤光素酶##荧光蛋白#

𐟧샃K8实验全攻略✨ 𐟔想要掌握CCK8实验的原理和方法吗？来，一起探索这个科研小秘籍！𐟓š 𐟒ჃK8，全称Cell Counting Kit-8，是一种超酷的细胞增殖和毒性检测试剂哦！𐟘Ž通过检测细胞内的线粒体活性，它就能轻松反映出细胞的活力和数量，真是太神奇了！𐟒늊𐟓那么，怎么进行CCK8实验呢？别担心，跟着以下步骤，你也能成为实验小达人！𐟒ꊊ1️⃣ 首先，我们要准备好处于对数生长期的细胞，并调整到合适的细胞密度。𐟧슊2️⃣ 接着，给细胞来个“药物浴”，在不同浓度和时间内处理它们。𐟒Š 3️⃣ 然后，在给药后的特定时间，加入CCK8试剂，再让它们继续快乐地生长一段时间。𐟌𑊊4️⃣ 最后，用酶标仪测测每个孔的吸光度，再根据标准曲线算算细胞的存活率或增殖率。𐟓ˆ 𐟓Œ实验时，记得要确保CCK8试剂的使用量与细胞数量和培养板类型相匹配哦！还有，给药时间和浓度也要根据实验需求来调整，别让细胞太“受伤”了。𐟒” 𐟎‰现在，你是不是对CCK8实验有了更深入的了解呢？赶快试试吧，科研之路等你来挑战！𐟚€

MTT细胞增殖实验全流程详解 𐟓š 方法步骤：标记96孔板：取5块96孔板，分别标记d1~d5。将每块板划分为四个区域，分别标记四种病毒名称。每个区域分为三组细胞：CON、NC、KD，每组细胞有5个副孔。准备好血球计数板。细胞准备：将对数期细胞消化后，以4.5 1500 rpm离心3分钟，去掉上清液，用培养基重悬制成细胞悬液。细胞计数：吸取10细胞悬液，沿盖玻片一边缓慢加入，进行细胞计数。铺板：根据细胞生长速度决定铺板密度（多数为2000cell/well），铺板时注意混匀细胞。调整细胞密度：统一铺好后，待细胞完全沉淀下来，在显微镜下观察各实验组的细胞密度。如果密度不均匀，则固定一组，微调其他组细胞的量（如：发现CON组细胞较多，则可再次铺入时，90~60%的量铺板）。再次铺入96孔板中。加入PBS：在孔板周围一圈加入适量PBS，防止培养板中细胞液被烘干。放入细胞培养箱中培养。 MTT实验：细胞贴壁后，取出标记d1的96孔板，每孔加入20 5mg/ml的MTT，轻轻震荡混匀。终止反应：反应4小时后，每孔加入100酸化异丙醇终止反应，震荡混匀。检测OD值：放入培养箱孵育反应至少4小时，用酶标仪595nm检测OD值。 𐟔젥ꌥŽŸ理： MTT实验是一种常用的细胞增殖和细胞毒性的检测方法。通过测定活细胞数量来评估细胞的生长情况。 𐟓Œ 注意事项：所有操作均在无菌条件下进行，确保实验结果的准确性。实验过程中注意细胞密度的均匀性，避免影响实验结果。 𐟓‹ 实验材料： 96孔板血球计数板离心机培养基 MTT溶液酸化异丙醇酶标仪 𐟔젩€š过以上步骤，您可以进行MTT细胞增殖实验，了解不同条件下细胞的生长情况。

碧云天GSH检测试剂盒标准曲线制作指南最近在使用碧云天GSH检测试剂盒时，发现制作标准曲线的过程有些繁琐。之前在网上查找了一些教程，但效果并不理想，最终还是靠自己摸索。标准曲线制作标准曲线看起来还不错，但浓度设置有些高（10、15uM），这可能会影响结果的准确性。未来我打算将样品稀释到2uM左右再进行测量，这样可能会更准确。反应原理这个试剂盒的原理其实并不复杂。显色反应中，DTNB与谷胱甘肽（GSH）反应生成有色产物。具体来说，2GSH+DTNB→GSSG+2TNB。此外，还有一个氧化还原反应，谷胱甘肽还原酶（GR）催化GSSG还原为GSH，同时生成NADPH。操作步骤将DTNB、H+和NADPH加入每个孔中。加入相同量的底物和酶。观察反应速度，上样一定要快。注意事项温度对反应速率影响很大，因此需要保持酶标仪温度一致。每个孔加入的底物和酶的量必须相同，以保证结果的准确性。总的来说，这个试剂盒虽然有些麻烦，但只要掌握了正确的操作方法，还是能够得到可靠的结果。希望我的经验能对大家有所帮助！

S100B试剂盒：了解和使用指南 S100B试剂盒是一种用于检测样本中S100B蛋白含量的工具。以下是关于S100B试剂盒的一些常见信息：检测原理 𐟔슥𘸨灧š„S100B试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在微孔中预先包被人S100B蛋白的捕获抗体，然后加入标准品、质控品和样品进行孵育结合。经过洗涤后，再加入生物素标记的S100B检测抗体，通过链霉亲和素-HRP系统结合放大信号。HRP与底物反应产生有色产物，颜色深浅与样品中S100B含量呈正相关。通过酶标仪在特定波长（如450nm）下测定吸光度（OD值），进而计算样品浓度。试剂盒组成 𐟓报𞮥픩…𖦠‡板：包被有人S100B蛋白捕获抗体。标准品：已知不同浓度的S100B蛋白溶液，用于制作标准曲线。样本稀释液：用于稀释样本（若需要）。检测抗体-HRP：辣根过氧化物酶标记的S100B检测抗体。洗涤缓冲液：用于洗涤微孔板，以去除未结合的物质。底物A和B：参与显色反应。终止液：终止显色反应。封板膜：用于密封微孔板。说明书：提供详细的操作指南和注意事项。适用样本 𐟩𘊤𘀨ˆ쩀‚用于血清、血浆、细胞上清液、组织匀浆等样本类型。性能指标 𐟓Š 准确性：标准品线性回归与预期浓度相关系数r值通常大于等于0.9900。灵敏度：最低检测浓度可达一定水平（如小于0.1ng/ml）。检测范围：如0.25ng/ml - 8ng/ml。特异性：不与其他可溶性结构类似物交叉反应。重复性：板内变异系数小于10%、板间变异系数小于15%。注意事项 ⚠️ 试剂盒保存在2-8℃，使用前需室温平衡。从冰箱取出的浓缩洗涤液如有结晶，水浴加热溶解后再用。实验中不用的板条应立即放回自封袋中密封保存。预处理后的样本无需稀释（具体需根据说明书），直接取适量加样。严格按照说明书中标明的时间、加液量及顺序进行温育等操作。所有液体组分使用前充分摇匀。

BCA定量那些事儿，只有师兄才知道！最近有同学跟我抱怨说BCA定量就是个骗局，定量完内参还是不准。其实吧，BCA的原理是没问题的，关键在于实验中的一些细节。只要你注意这些细节，BCA还是一种很可靠的方法。今天我就来跟大家聊聊那些只有师兄才会告诉你的BCA注意事项！细胞样品没洗净首先，细胞样品一定要用PBS充分洗涤。血清里含有蛋白质，如果你收样前没好好用PBS洗过，血清里的蛋白会被BCA定量一并计算在内，导致WB时内参不齐。所以，这一步千万不能省略！移液器不准移液器不准的话，后续实验全白搭。每次用之前都要校准，确保枪头没有残留，这样取的样品浓度才准确。裂解不充分加了裂解液后，可以用涡旋或者超声的方法促进细胞充分裂解。取上清时要注意不要吸到沉淀，只有蛋白液浓度均匀，取的2ul进行BCA检测才能代表真实的样品浓度。加96孔板操作不精准从标准曲线的R2，以及同一个样品不同复孔之间的差距，可以看出操作者用移液器的水平。用准的枪，多练小体积移液，这样才能保证实验结果的准确性。放入酶标仪时有气泡加96孔板时如果有气泡，会直接影响测量结果。加的时候小心，一般孵育后就没有气泡了。实在是有气泡，可以用蘸了乙醇的注射器针头戳小泡泡。加loading buffer时不准 Loading buffer很粘稠，容易粘在枪头外壁，越是小体积的样品越是容易有误差。注意吸的时候尽量减少枪头浸入液面的深度，打的时候枪头侧面不要蹭到样品的管壁。煮蛋白后直接收进冰箱煮蛋白后有些水会作为冷凝水凝结在盖子和管壁上，最好煮完蛋白冷却离心后再收进冰箱。拿出来跑WB前也要涡旋离心混匀样品再上样。记住，只有样品均匀，取出来检测的部分才能具有代表性。样品冻融次数过多就算是煮过的蛋白，长期保存在-20℃也会慢慢降解。最好使用1个月内的蛋白样品，以及不要反复冻融太多次。曝光时曝光液没有淋均匀把曝光液充分地淋在条带上，马上发光。曝光液淋得不充分或者有点干的地方，条带会看起来淡一些，结果就不可信。希望这些小贴士能帮到大家，做实验不容易，细节决定成败！𐟒ꀀ

实验原理怎么写 𐟌 肿瘤血管生成的定义血管生成是指肿瘤在生长过程中，新血管的形成。这个过程起始于已存在的毛细血管和毛细血管后微静脉，通过一系列复杂的步骤，如血管内皮基质降解、内皮细胞迁移、增殖、管道化分支形成血管环和形成新的基底膜，最终形成新的毛细血管性血管。 𐟓š 如何写实验方法描述查找文献：通过文献检索，了解相关实验的检测内容。方法确认：对照中英文文献，确认实验方法。方法提取：从中文文献中参考，以英文文献为主要提取来源。方法完善：对特殊方法进行特殊说明，明确试剂、仪器、分组、时间点和剂量。 𐟓 案例实操：miR-488靶向调控FZD7基因介导wnt信号通路对胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭通过 CCK-8 试剂盒检测 miR-488 对 MKN-45胃癌细胞增殖的影响。将 MKN-45细胞接种于96孔板中，分为空白对照组（未处理组）、miR-488 mimic NC（miR-488表达对照组）和 miR-488 mimic（miR-488表达组）。分别于1、2、3、4天进行 CCK-8 检测。每孔中加入 10  CCK-8，孵育3.5小时后，利用酶标仪在 450nm处检测光密度值[D(450)]，每次实验重复3次。通过以上步骤，你可以详细描述实验原理和方法，为科研工作者提供清晰的实验指导。

𐟔젃CK8细胞增殖曲线绘制指南 CCK8实验是细胞增殖研究中非常重要的一部分，其原理如下： 𐟔 原理： WST-8（四唑盐）是CCK-8的主要成分，呈粉色。在电子载体（1-Methoxy PMS）的作用下，被线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲臜类染料（Formazan），并释放到细胞外溶解在培养基中。生成的甲臜物的数量与活细胞的数量成正比。通过酶联免疫检测仪在450nm波长处测定其光吸收值，可以间接反映活细胞数量。 ⚠️ 注意事项： 1⃣️ 细胞消化要充分，铺板时要均匀，不能过密，一般每孔3000个细胞，不同细胞类型可能需要调整。 2⃣️ CCK8孵育时间为1-4小时，具体时间可以通过预实验确定最佳反应时间。 3⃣️ CCK8最好稀释成10%（用完全培养基稀释）后加入细胞中。 4⃣️ 建议使用双波长检测，检测波长为450nm，参比波长为600nm。参比波长可以过滤掉因液体浑浊或孔板底部不干净带来的测量误差（OD450-OD600即可）。 5⃣️ 每天定点测量，孵育CCK8的时间要保持一致。 6⃣️ 96孔板不易污染，可以直接用于测定。测完后尽快盖上盖子放回原处。如果酶标仪距离培养室较远，可以将上清液吸到新的96孔板中进行测定。通过以上步骤，可以绘制出准确的细胞增殖曲线，为细胞研究提供有力支持。

DiBAC4(3)荧光探针使用指南 DiBAC4(3) 是一种对电位变化敏感的荧光探针，它能够缓慢响应细胞内的电位变化。这种探针可以进入去极化细胞，并与细胞内的蛋白或膜结合，从而发出增强的荧光和红色光谱迁移。在荧光显微镜下，我们可以通过观察荧光强度的变化来推测细胞膜电位的变化。使用方法溶解：DiBAC4(3) 可以用DMSO、无水乙醇或纯水溶解。通常用DMSO溶解成10mM的母液储存，但如果需要低浓度溶液，也可以用纯水溶解。荧光显微镜测定膜电位的方法试剂准备 DiBAC4(3) Dulbecco’s MEM (DMEM) FBS (fetal bovine serum) 操作步骤将消化好的细胞移至DMEM中。加入FBS，控制浓度在2～15%之间。加入DiBAC4(3)，控制浓度在1～5 ⵭ol/L。用荧光显微镜观察刺激后荧光强度的变化。推荐使用Ar激光(488 nm)的激光共聚焦显微镜，因为DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃的条件下测定。由于细胞膜的电位会变化，可以观察细胞质内的荧光强度变化。酶标仪测定膜电位的方法试剂准备 DiBAC4(3) 检测用缓冲液 (pH7.4; 20 mmol/L HEPES, 120 mmol/L NaCl, 2 mmol/L KCl, 2 mmol/L CaCl2, 1 mmol/L MgCl2, 5 mmol/L glucose) 操作步骤培养细胞：在微孔板中培养细胞。清洗细胞：用含5 ⵭ol/L DiBAC4(3) 的检测用缓冲液200 ⵌ，清洗微孔板中培养的细胞2次。染色：在孔板中加入180 ⵌ含5 ⵭ol/L DiBAC4(3) 的检测用缓冲液，在5%CO2，37℃培养箱中孵育30分钟。测定：用荧光酶标仪观察刺激后荧光强度的变化。由于DiBAC4(3)的荧光会随温度变化而改变，所以必须在37℃的条件下测定，加入20 ⵌ含DiBAC4(3) 的检测用缓冲液，每隔30秒测定1次荧光变化。膜电位的标准曲线原理膜电位变化时色素的分布也随之变化，所以荧光和吸收也会变化。这种变化程度取决于色素的分子数和细胞数的比率、色素的浓度以及细胞的种类。膜电位的标准曲线是通过用电极直接测定目的细胞的膜电位，在该电位所测得的荧光和吸收强度而制得的。试剂准备 DiBAC4(3) Eagle-Dulbecco medium PBS 操作步骤用Eagle-Dulbecco medium培养细胞。取PBS中的细胞在37℃的CO2培养箱中孵育30～60分钟，然后改变孵育时间，制备不一样的CO2浓度的样品。加入DiBAC4(3)，终浓度为2 ⵭ol/L。 20分钟后，在517 nm测定各个浓度的荧光强度，并用电极直接测定此时的电位差。用荧光强度和对应的电位差来制作标准曲线。其他方法还有通过钾扩散电位和荧光或吸收强度比较的方法。缬氨霉素引起钾扩散电位，钾扩散电位 (V) 是按照Nernst 方程计算如下： V= -RT／F log[K+]in／[K+]out = -59 log[K+]in／[K+]out (mV) 所以在缬氨霉素存在时，通过改变细胞外钾离子浓度和细胞内钾离子浓度，计算扩散电位，测定各个电位的荧光或吸收强度，比较后可以得到标准曲线。