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huvec前沿信息_huvec细胞是什么细胞(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-03

huvec

一次成功的血管生成实验：关键步骤详解在探索血管生成的奥秘中，我们采用了一种经过改良的24孔板实验方法，取得了令人满意的结果。以下是实验的关键步骤和注意事项，希望能为你的研究提供一些参考。 𐟓… 实验前一天准备：将孔板和枪头放入四度冰箱预冷，时间至少1小时。基质胶提前从四度冰箱取出，放入冰盒中融化。将融化的基质胶平铺在24孔板上，然后在四度冰箱中过夜，等待基质胶完全流平。细胞饥饿处理12小时，培养基中不加血清。 𐟔젥ꌥ𜀥狯𜚊准备冰盒，并在冰盒上套一层保鲜膜，提前放入超净台进行紫外消毒。基质胶必须放在冰盒上，否则会迅速凝固。 𐟧젧𛆨ƒž准备：实验中使用的是HUVEC细胞。每孔大约种植15万细胞，成管效果理想。 𐟓𘠥ꌧ𛓦žœ：我们进行了两次实验，一次使用康宁的基质胶，另一次使用模基的基质胶，都成功生成了血管网络。 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚊涂抹基质胶时，务必注意吸走气泡，否则可能会影响实验结果。通过这些步骤，我们成功地进行了血管生成实验，希望这些经验能为你的研究提供帮助。

𐟌ŸHUVEC细胞培养全攻略𐟌Ÿ 𐟌𑠥Ÿ𙥅𛈕VEC细胞需要耐心和细心，以下是一些实用的培养技巧： 1️⃣ 复苏细胞：将冻存的HUVEC细胞快速解冻，加入1ml的细胞冻存悬液和12ml的完全培养基，均匀分配到两个T25培养瓶中。 ⚠️ 注意：冻存的细胞不需要完全解冻，以免损伤细胞。 ⚠️ 建议：原代细胞不推荐离心去除DMSO，可以通过第二天换液的方式去除残留DMSO，减少离心对细胞的损伤。 2️⃣ 培养细胞：24小时后，当细胞贴壁良好时，更换新鲜的完全培养基。在细胞增至70%前，每48小时换液一次；增至70%后，每24小时换液一次。 3️⃣ 传代细胞：当细胞增至80%-90%时，按照1:3或1:4的比例进行细胞传代。 ⚠️ 注意：细胞密度不要超过90%，以防细胞融合后增殖速度变慢，影响后续传代。 4️⃣ 储存细胞：长期储存的细胞务必置于液氮中，-80Ⱕ†𐧮𑥂襭˜建议不超过1周。 ⚠️ 注意：T25培养瓶中，5ml培养基，融合度较高时建议增至7-8ml，但不可超过10ml。 ⚠️ 建议：传代时采用的胰酶浓度建议不超过0.05%，1ml胰酶足够，残余细胞用5ml PBS洗下来。 ⚠️ 建议：离心建议150g，3-5min，不宜转速太大&时间过长。 ⚠️ 建议：使用P5及之前的细胞进行干预，状态好的话P6也可以，尽可能不用代数更靠后的细胞。通过这些步骤，你可以更好地培养和储存HUVEC细胞，为后续的实验研究打下坚实的基础。

细胞标记必备：活细胞示踪剂使用指南最近发SCI论文真是越来越难了，没有几张亮眼的图片根本没法在一区发表。今天给大家介绍一个超级实用、操作简便的论文出图神器——活细胞示踪剂（论文里写作celltracker）。活细胞示踪剂可以用绿色荧光或红色荧光标记细胞，而且荧光能在七天内保持不淬灭。特别适合研究多种细胞共培养过程中，某种细胞的生长、分化和运动状态。比如你在水凝胶中培养细胞，但水凝胶透光率差看不清细胞，这时候就可以用示踪剂来标记观察。相比免疫荧光染色，操作步骤简单，成功率也高。新手也能一次成功！操作步骤我们用的是翌圣的CMFDA：用50ul DMEO溶解50ug CMFDA粉末，配成2mM的母液，然后存到-20度冰箱。使用时取出母液，放置五分钟化冻后，在离心机里离心3000转五分钟（这一步不能偷懒，不然母液会损失很多）。用DMEM或其他无血清培养基配置工作液。如果是细胞联系紧密的细胞系，比如HUVEC，工作液的比例是3ul母液+4ml DMEM。如果是细胞贴壁不牢（如231）或者细胞形态很长（如成纤维、成骨细胞），工作液比例是1ul母液+4ml DMEM。把配好的工作液加入T25细胞培养瓶中，37度孵育10分钟，镜下观察染色情况。孵育完成后用PBS清洗两遍，再37度孵育30分钟。注意事项工作液不要用PBS配，细胞会死很多。细胞最好长满一点再染色，活力会更好。工作液里母液浓度不要太高，孵育时间最好不要超过20分钟，不然细胞很容易挂掉（别问我为什么知道）。如果你在透光性不好的凝胶里养细胞，最好用共聚焦拍照。翌圣家还有一款红色的示踪剂，普通显微镜拍不到，只能用共聚焦拍。如果你有钱，也可以用赛默飞的产品，据说效果更好。最后提醒一下，活细胞示踪剂的结果不能代替免疫荧光的结果，如果需要做免疫荧光的朋友们不能偷懒哦！额外推荐我最近正在便宜出一些细胞，有HUVEC、231、HFOB1.19、HMCAF（人乳腺癌成纤维细胞），有需要的朋友可以联系我哦！希望这篇指南能帮到大家，祝大家科研顺利，论文多多！𐟒ꀀ

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