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组织固定液前沿信息_组织固定液生产厂家(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-02

组织固定液

如何科学保存实验动物样品？一文搞定！嘿，大家好！今天咱们来聊聊实验动物样品的保存和寄送问题。很多小伙伴在这方面可能有点摸不着头脑，别担心，我来帮你理清楚。动物组织样本的保存首先，咱们得知道，离体后的组织样本最好在20分钟内固定好，这样才能保证后续检测的准确性。送检的样本必须是固定好的，而且固定时间要超过两天。不同组织和不同的检测目的，固定的方法也不一样。病理检测样本组织样本离体后要立刻固定，常用的固定液有10%中性福尔马林或4%多聚甲醛（尽量不要用酒精固定），室温保存就行。固定的器皿要根据样本体积来选，组织固定液的体积应该是样本体积的10-15倍。避免用V型底、细长或小管的固定器皿。大组织标本要切开固定，防止中间部分自溶腐败。如果有特殊要求，可以根据实验要求选择其他处理方式。如果是冰冻切片标本，必须新鲜处理。步骤是：组织离体后用OCT包埋，-80℃保存。送检过程中要有足够的干冰或冰袋。特殊组织需要用特定的固定液，避免样本发生变化，影响后续检测。具体要求可以参考表格1。胃、肠道的内容物处理要注意：不能用挤的方式，会破坏黏膜。可以用针打10%中性福尔马林或4%多聚甲醛到胃和盲肠里固定一会儿，半小时后切开用10%氯化钠溶液清洗，再固定。对于皮肤、肺等比较轻、容易漂浮的组织：可以在固定液上放沾湿的棉花团压住，避免组织漂浮导致固定不充分。或者完整的肺组织离体后，往主支气管中灌固定液冲洗整个肺部，使肺部充盈，然后把充盈后的整肺放入固定液中送检。细胞样本贴壁细胞：细胞消化后离心，倒掉培养液保留细胞沉淀，用PBS洗一遍，离心倒掉液体保留细胞沉淀后加固定液（10%中性福尔马林或4%多聚甲醛）重悬，常温送检。悬浮细胞：离心，倒掉培养液保留细胞沉淀，用PBS洗一遍，离心倒掉液体保留细胞沉淀后加固定液（10%中性福尔马林或4%多聚甲醛）重悬，常温送检。希望这篇文章能帮到你们，实验顺利哦！如果有任何问题，欢迎留言讨论！𐟒쀀

𐟔젧Ÿ𓨜᥈‡片HE染色全攻略：步骤与技巧苏木精-伊红染色法（Hematoxylin-Eosin staining），简称HE染色法，是切片技术中常用的染色方法之一。苏木精染液为碱性，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着紫蓝色；伊红为酸性染料，主要使细胞质和细胞外基质中的成分着红色。 𐟧ꠥꌦ�꤯𜚊取样固定取新鲜的组织样品，加入4%多聚甲醛组织固定液的EP管中。取样材料应该小而薄，约黄豆粒大小。脱水采用梯度酒精浓度法脱水。通常选择50%-60%-70%-90%-95%-100%的浓度梯度，各酒精浓度要求准确。95%以前各步骤脱水1小时，95%和100%均分为两步进行，分别脱水30分钟。实验中常将组织在后一步的95%的酒精溶液中过夜，以便进行脱脂。透明浸蜡为了使石蜡更容易进入组织，要对脱水后的组织进行透明处理。将组织依次浸入二甲苯:无水乙醇(1:1)溶液和二甲苯透明样品各30分钟，然后在60℃的石蜡溶液中充分浸泡2小时。包埋和切片通过包埋机，将浸泡后的组织块使用蜡液包埋后，放到冷台上凝固。之后使用刀片进行修整，在切片机上固定好后进行连续切片（5um）。所得的切片用银子在42℃温水中展开，之后固定在载玻片上，经40Ⰳ烘干后进行HE染色。 HE染色 HE染色的程序如下：浸入二甲苯ⅠⅡ，95%酒精，90%酒精，80%酒精，70%酒精各15分钟。二甲苯:100%酒精(1:1)，100%酒精Ⅰ，50%酒精，蒸馏水各2分钟。苏木精染液5-10分钟，水洗后分化入1%盐酸酒精5秒，自来水10分钟。 1%氨水蓝化，自来水，50%，70%，80%，90%和95%酒精各2分钟。伊红染液5分钟，95%酒精，100%酒精ⅠⅡ，100%酒精:二甲苯(1:1)，二甲苯I、各2分钟。中性树脂封片，不应该等切片上的二甲苯干了再封固。通过以上步骤，即可完成HE染色，观察到细胞核和细胞质的清晰染色效果。

如何进行组织处理及切片、染色 𐟆—组织处理是生物学研究中的重要环节之一，它涉及到对生物组织的固定、脱水、透明、浸蜡等步骤，以保持其形态结构，便于后续的切片和观察。𐟌𙊱、固定：迅速将新鲜组织放入固定液中，确保组织完全浸泡在固定液中；根据组织类型选择合适的固定液浓度和时间。防止细胞自溶和组织腐败，保持细胞的形态结构和抗原性。⏰ 2、脱水：按照从低到高的顺序依次更换酒精溶液，每次更换前需充分摇匀；注意控制脱水的温度和时间，避免过度脱水导致组织收缩或变形。去除组织中的水分，为后续的透明和浸蜡做准备。𐟌𙊳、透明：将脱水后的组织置于透明的有机溶剂中，轻轻摇晃容器使其均匀接触；透明时间不宜过长，以免影响组织的完整性。使组织变得半透明，以便于观察内部结构。𐟥Ž 4、浸蜡：将透明后的组织放入融化的石蜡中，待其冷却凝固后取出；注意控制石蜡的温度和质量，以确保组织块的完整性和硬度。将组织包埋在石蜡中，形成坚硬的块状物，便于切片。𐟔劵、切片：调整切片机的厚度至所需大小；将组织块固定在切片机上，缓慢转动刀片进行切片；收集切下的薄片，放置在载玻片上备用。𐟍𘊶、染色：根据所选用的染色方法，配制相应的染色液；将切片放在染色液中浸泡一定时间，然后冲洗干净；最后进行封固，制成永久性的玻片标本。𐟥‡ 在进行组织处理以及切片和染色的过程中，需要注意以下事项。𐟌™ 1、避免污染：组织处理过程中应严格无菌操作，避免污染。𐟌Ÿ 2、控制时间和温度：：控制好每个步骤的时间和温度，以防组织受损。𐟌𑊳、选择合适的试剂和处理条件：以保证实验结果的准确性和可靠性。𐟑‰ 𐟔在进行切片染色前需要做一些检查方法，具体请查看图片3。ℹ#组织处理

𐟧쨋木精伊红染色法大揭秘𐟔 𐟔쨋木精伊红染色法，简称HE染色法，是石蜡切片技术中常用的染色方法之一哦！𐟒ኊ𐟌ˆ苏木精染液呈碱性，它能让细胞核内的染色质与胞质内的核糖体着上紫蓝色的美丽色彩。而伊红染液则是酸性的，它主要负责让细胞质和细胞外基质中的成分染上鲜艳的红色。𐟒– 𐟓实验步骤来啦： 1️⃣ 取样固定：新鲜的组织样品要加入4%多聚甲醛组织固定液中，记得要小而薄，像黄豆粒大小就不错！ 2️⃣ 脱水处理：用梯度酒精浓度法来脱水，50%-60%-70%-90%-95%-100%，每一步都要脱水1小时哦！ 3️⃣ 透明浸蜡：为了让石蜡更容易进入组织，要对脱水后的组织进行透明处理，用二甲苯、无水乙醇等溶液浸泡。 4️⃣ 包埋切片：通过包埋机把组织包埋在蜡液里，然后切片成5微米厚的薄片。 5️⃣ HE染色：最后就是关键的HE染色步骤啦！把切片浸入各种浓度的酒精和蒸馏水中，再加入苏木精染液和伊红染液，就能得到美丽的染色结果啦！𐟎‰ 𐟒ᥰ贴士： * 固定时要确保组织在固定液中的位置，并随时翻动组织哦！ * 脱水过程中要保证脱水液体的浓度，并经常更换新溶液。 * 浸蜡、包埋和切片时都要尽量在恒温下操作，防止温度差造成的影响。 * 染色前切片脱蜡要彻底，这样才能得到更好的染色效果哦！𐟌Ÿ

病理实验样本保存与邮寄小贴士 𐟧갟šš 大家好，今天来聊聊一个让人头疼的问题：病理实验中样本的保存和邮寄。相信很多小伙伴都遇到过这样的情况，辛辛苦苦造好的动物模型，取材后因为保存不当，结果检测做不了，几个月的努力全都白费了。今天我就来给大家分享一些小技巧，希望能帮到大家，避免踩坑。组织样本的保存 𐟧ꊦ𘅦𔗥Ž立即固定：取材后，组织离体清洗干净，然后立即用10%中性福尔马林或4%多聚甲醛固定。室温保存即可。固定液的量要足够：固定用的器皿要根据样本体积来选择，组织固定液的体积应是样本体积的10-15倍。避免使用V型底、细长或小管固定，大组织标本要切开固定，以免中间部分自溶腐败。冰冻切片样本的保存 ❄️ 新鲜取样：冰冻切片标本必须新鲜，处理步骤是组织离体后用OCT包埋，然后放入-80℃保存。送检过程中要有足够多的干冰或冰袋。特殊组织的处理 𐟧ꊧ‰𙦮Š组织需要特定固定液：有些特殊组织需要用特定的固定液，避免样本发生变化，影响后续检测。具体要求可以参考相关图表。胃、肠道内容物的处理：胃和肠道的内容物处理时要特别注意，不能用挤的方式，会破坏黏膜。可以用针注射10%中性福尔马林或4%多聚甲醛到胃和盲肠里固定一会儿，半小时后切开用10%氯化钠溶液清洗，然后再固定。轻飘飘的组织：对于皮肤、肺等比较轻，容易漂浮在固定液上面的组织，可以在固定液上面放一个沾湿的棉花团压住，避免组织漂浮导致固定不充分。或者对于完整的肺组织，可以往主支气管中灌固定液冲洗整个肺部，使肺部充盈，然后把充盈后的整肺放入固定液中送检。石蜡切片和冰冻切片的运输 𐟚š 石蜡切片：4%多聚甲醛（福尔马林）固定，冰袋运输。冰冻切片：取样后直接-80℃保存，干冰运输。透射电镜样本的保存 𐟔슩€射电镜：2.5%戊二醛固定，冰袋运输。特殊样本：ROS（活性氧检测）需要新鲜样本。希望这些小贴士能帮到大家，避免在实验中遇到不必要的麻烦。下次我们再来聊聊透射电镜和扫描电镜的取材及保存注意事项。祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

𐟧숅染色组织切片制作指南𐟒‰ 𐟔젦ƒ𓨦了解HE染色组织切片的制作流程吗？跟着我们的步骤，一步步来！ 𐟓株*实验准备**： 1️⃣ 主要器材：脱水机、包埋机、病理切片机、冻台、组织摊片机、正置光学显微镜和成像系统。 2️⃣ 必备试剂：无水乙醇、二甲苯、通用型组织固定液、环保型脱蜡液、中性树胶、苏木素-伊红(H&E)染液和高清恒染试剂盒。 𐟔꠪*组织切片制备**： * 从病理组织取材并进行固定。 * 使用包埋机进行包埋，然后切成薄片。 𐟌ˆ **染色步骤**： 1️⃣ 脱蜡与水化：将切片依次放入脱蜡液和不同浓度的酒精中，最后用水冲洗。 2️⃣ 预处理：用高清恒染预处理液处理切片。 3️⃣ 苏木素染色：让切片在苏木素染液中染色，然后进行分化和返蓝处理。 4️⃣ 伊红染色：用伊红染液对切片进行染色。 5️⃣ 脱水与封片：通过一系列脱水步骤，最后用中性树胶封片。 𐟔 **结果判读**： * 细胞核应为蓝色，细胞质为红色。 𐟓 **操作要点**： * 注意细胞核的分化程度，确保染色效果。 * 定期检查苏木素和伊红的效价，及时更换。现在，你准备好开始你的HE染色实验了吗？𐟧ꢜ耀

大鼠膝关节组织HE染色全流程详解 𐟐�. 脱钙将大鼠膝关节软骨组织固定在4%多聚甲醛溶液中至少48小时。然后，将组织从固定液中取出，放入EDTA脱钙液中浸泡，脱钙时间大约为4周。 𐟒砲. 脱水将脱钙后的组织从脱钙液中取出，放入脱水机内，依次通过梯度乙醇进行脱水。具体步骤如下：75%乙醇4小时→85%乙醇2小时→90%乙醇2小时→95%乙醇1小时→无水乙醇30分钟→无水乙醇30分钟→醇苯10分钟→二甲苯I 10分钟→二甲苯II 10分钟→石蜡I 1小时→石蜡II 1小时→石蜡III 1小时。 𐟓栳. 包埋将融化的石蜡放入包埋框，在石蜡凝固之前将组织从脱水盒内取出，按照包埋要求放入包埋框，并贴上对应的标签信息。将包埋框置于-20℃的冷冻台上冷却，待蜡块凝固后，将其从包埋框中取出并修整。将包埋好的石蜡块放入4℃冰箱中定型，并根据后续实验要求确定好定型的时间。 𐟔꠴. 切片定型10小时后，从4℃冰箱中取出蜡块固定在切片机上，先粗调切厚度为1毫米的蜡片，确定好组织切面，再细调切成5微米的石蜡切片。将切好的切片用小镊子夹入到45℃恒温水中摊片，待切片摊开平整后，用载玻片将切片从水中捞出，待自然晾干后放于37℃烤箱烤干。 𐟎蠵. 染色烤干后从烤箱中取出，立即按照以下步骤进行HE染色：二甲苯I脱蜡5分钟→二甲苯II脱蜡5分钟→二甲苯III脱蜡5分钟→甲苯Ⅳ脱蜡5分钟→无水乙醇脱水5分钟→90%乙醇脱水5分钟→80%乙醇脱水5分钟→70%乙醇脱水5分钟→自来水洗涤3次（浸泡清洗，每次1分钟）→苏木素染色5～10分钟→自来水洗片3次，每次1分钟→1%盐酸酒精分化5～10秒→自来水水洗3次，每次1分钟→37℃恒温水浴箱中返蓝10分钟→伊红染色2～3分钟→自来水快速清洗→80%乙醇脱水10秒。 𐟔„ 6. 封片将染色完成的切片放入37℃烘干机进行干燥，干燥1小时后，从烘干箱中取出，使用中性树胶封片，应小心不要产生气泡。将切片放置于通风橱内，室温下自然晾干。 𐟓𘠷. 拍照在光学显微镜下观察各组大鼠膝关节软骨组织结构，并拍照记录。

荧光原位杂交样本制备与运输全攻略荧光原位杂交技术是一种非放射性的分子生物学方法，它利用标记了报告分子的核酸探针与染色体或DNA纤维切片上的靶DNA进行杂交。当两者互补时，会形成杂交体，然后通过免疫化学反应检测荧光信号，从而实现对待DNA的定性、定量或相对定位分析。 𐟓栩€样要求包埋：石蜡包埋、OTC包埋动物组织：已固定在4%多聚甲醛中。处死动物后立即取材，生理盐水冲洗表面，4%的多聚甲醛固定，一般组织固定48小时后进行包埋，大小不超过1cm*1cm*0.5cm。装组织的管子要比组织大，固定液是样品体积的5倍以上，以保证充分固定，封口膜封好避免运输过程中固定液洒出。植物组织：新鲜取材后固定于FAA固定液中。大小不超过1cm*1cm*0.5cm，如果组织悬浮于固定液上，可以抽真空使其下沉。常温或少量冰袋运输。 𐟔ꠥˆ‡片：石蜡切片、冰冻切片石蜡包埋的组织：冰袋运输。 OTC包埋的组织：干冰运输。 𐟎蠦Ÿ“色：脱蜡至水、苏木素染色、伊红染色、脱水封片石蜡切片：石蜡切片码齐装在塑料切片盒中，冰袋运输。冰冻切片：冰冻切片码齐装在塑料切片盒中，干冰运输。 𐟓𘠦‹照：光学拍照(白光)、数字扫描(白光) 已染色的切片，常温或少量冰袋运输。通过以上步骤，可以确保样本的质量和实验的准确性，为荧光原位杂交实验打下坚实基础。

动物组织冰冻切片全攻略𐟧Š𐟔ꊱ. 𐟔„ 脱水步骤：将新鲜组织置于20%的蔗糖溶液中，待其沉底后转入30%的蔗糖溶液进行脱水。对于较大的组织，可以再次使用30%的蔗糖溶液进行脱水，确保脱水彻底。 𐟧Š 固定与包埋：将组织固定在固定液中48小时。如果需要进行特殊染色，可以直接用液氮速冻组织，然后使用OCT包埋剂进行包埋。 𐟔ꠥˆ‡片准备：将脱水后的组织用滤纸吸干表面水分，然后在包埋盒中滴入一些包埋剂。将组织切面朝下放入包埋盒，用OCT包埋剂覆盖完全，常温浸润约5分钟。将包埋盒放在冰冻切片的速冻台上速冻，待OCT变白变硬后即可进行切片。如果暂时不切片，可以保存在-20℃。 ✂️ 切片操作：将包埋块固定在切片机上，先进行粗切（25）修切平整后，开始切片，厚度为5-12。将干净的载玻片平放在切出的组织片上方，将组织贴于载玻片上，切片后保存在-20℃或-80℃。

𐟔짟𓨜᥈‡片制作全攻略𐟒ꊰŸŒ𑥏–样与固定：首先，从新鲜组织中取出小而薄的样品，大约黄豆粒大小，并立即将其放入4%多聚甲醛组织固定液中。 𐟒樄𑦰𔥤„理：采用梯度酒精脱水法，经过50%、60%、70%、90%、95%直至100%的酒精浓度，逐步去除组织中的水分。每个浓度脱水1小时，95%和100%酒精则分两步进行，各脱水30分钟。 𐟔明与浸蜡：为了使石蜡更好地渗透组织，需进行透明处理。将脱水后的组织在二甲苯:无水乙醇(1:1)溶液中浸泡30分钟，再在60℃的石蜡溶液中浸泡2小时。 𐟔ꥌ…埋与切片：使用包埋机将组织块用蜡液包埋，待其冷却凝固后进行修整。然后在切片机上固定并连续切片，厚度为5微米。将切片在42℃温水中展开，并固定在载玻片上，40℃烘干。 𐟎舅染色： HE染色是石蜡切片制作的关键步骤。将切片依次浸入二甲苯、各级酒精、蒸馏水，再经过苏木精染液、盐酸酒精、氨水等处理，最后用伊红染液染色。完成后用中性树脂封片。 ✨恭喜！你成功完成了石蜡切片的制作！𐟎‰