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PH缓冲液前沿信息_乙酸盐缓冲液ph4.5(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-11-30

PH缓冲液

液相色谱流动相使用常见错误及注意事项流动相在液相色谱中扮演着至关重要的角色，相当于液相的“血液”。在使用过程中，有些“坑”需要特别注意。以下是一些常见的错误操作：加入有机溶剂后测量流动相的酸碱度 𐟓Š 如果你使用有机添加剂来测量pH值，得到的pH值会与加入有机溶剂之前不同。重要的是要保持测量的一致性。如果你总是在加入有机溶剂后测量pH值，务必在方法中明确说明，这样其他人也会按照统一的方式进行操作。虽然这种方式不保证完全准确，但至少可以保持方法的前后统一。没有使用缓冲液 𐟌€ 缓冲液的作用是控制pH值并防止其变化。许多其他方法会改变流动相的pH值，导致停留时间、峰形和峰值响应的漂移。甲酸、TFA等不是缓冲剂。缓冲液pH值不在正常范围内 𐟓‰ 每个缓冲盐有2个pH单位范围宽度，在这个范围内可以提供最稳定的pH值。窗口之外的缓冲盐不具备有效的抗pH值变化能力。要么在正确的范围内使用缓冲剂，要么选择一种缓冲剂可以涵盖你所需要的pH值。将缓冲液加入有机溶液中 𐟚능𐆧𜓥†𒦺𖦶𒤸Ž有机相混合，可能会引起缓冲液沉淀。即使沉淀现象已经发生，仍很难被发现。记住，一定要将有机溶液加入到水相当中，这样可以降低缓冲液沉淀的几率。从0%用泵混合浓度梯度 𐟌„ 现在使用的泵可以有效地混合流动相并实现在线脱气，但并不是使用你的方法的所有人都会配有高质量的泵。将A和B混合到一个单独的溶液中，在100%线上运行。比如说通过用50ml水混合制备有机950ml起始混合物。这样做的好处是可以减少HPLC之间的可变性，减少系统中产生气泡和沉淀的可能性。值得注意的是泵混合液的比例是95:5并不代表瓶体的预混合保留时间也为95:5。使用错误的酸（碱）改变缓冲液 𐟌 只能使用形成你使用的缓冲盐的酸或碱。比如磷酸钠缓冲液应仅用磷酸或氢氧化钠调节。没有在方法中阐述有关缓冲液的全部信息 𐟓 缓冲剂的类型决定了能够缓冲的pH范围。所需的浓度决定了缓冲强度。5克或无水磷酸钠和5克一水合物磷酸一钠具有不同的缓冲强度。没有先检查就开始添加有机溶剂 𐟔 如果上一个方法中基线B中使用过的是缓冲液，而你的方法中基线B使用的是有机溶液，好在你可以沉淀泵管和泵头中的缓冲剂。通过避免这些常见错误，可以确保你的液相色谱实验更加准确和可靠。

如何测量和校正QC-pH值？𐟌᯸ 今天我们来聊聊pH值测量的一些基本知识，特别是关于QC-pH的部分。pH值的测量在药品研发和质量控制中非常重要，涉及到的样品包括工艺用水（如注射用水）、某些原辅料（如氢氧化钠）、注射液、口服液以及疫苗等。测量pH值通常使用pH计，操作过程与渗透压测量类似，需要先进行校正再进行实际测量。校正过程中需要用到标准缓冲液，这些缓冲液可以通过标准物质管理部门购买，或者按照特定方法自行配制。校正过程有两种主要方法，我们重点介绍其中一种。首先，需要准备三种不同的标准缓冲液。先用两种缓冲液进行自动校正，获取斜率和漂移值（设备上通常有对应的按钮，按照提示将电极放入对应的缓冲溶液中，设备会自动给出结果）。结果符合要求后，用第三种缓冲液进行验证。这个过程类似于样品检验，但已知“样品”的具体pH值，通过读取的pH值与已知值对比，符合要求则校正通过。例如，如果已知样品pH值大约在6.5左右，可以选择pH值为4.01和9.18（25℃时）的缓冲液进行自动校正，然后用pH值为6.86（25℃时）的缓冲液进行验证。验证通过后，再读取样品的实际pH值。需要注意的是，不同温度下的标准缓冲液的真实值有所不同。如果使用的pH计有温度补偿功能，可以忽略标准缓冲液的温度。如果没有温度补偿功能，应尽量将标准缓冲液的温度控制在室温，并用设备读取出来的pH值与读取出来的温度对应图三中的真实值进行对比确认。例如，用pH值为6.86（25℃时）的缓冲液进行验证，读数结果pH值为6.82，缓冲液温度为20.0℃，那么此时该缓冲液理论pH值为6.88，6.82-6.88＞0.05pH，则验证未通过。此外，还有一些注意事项，例如为了除去二氧化碳和温度对标准缓冲液配制和样品检测的影响。希望这些信息对大家有所帮助！如果有任何疑问或需要进一步解释的地方，欢迎在评论区留言。

缓冲液配置：先调pH还是先定容？ 𐟔 在配置缓冲液时，到底是先调整 pH 值还是先定容，这个问题困扰了许多实验人员。𐟤” 𐟓Œ 实验室中，我们通常会在最终溶液达到 9 成时，先调整 pH 值，然后再进行定容。𐟘Ž 这样做虽然可能会使 pH 值有一些偏差，但只要在 0 到 1 的范围内，都是可以接受的。𐟘‰ 𐟒ᠧ„𖨀Œ，如果先进行定容，再调整 pH 值，虽然 pH 值固定了，但溶液的总体积也会发生变化，从而影响成分浓度。𐟘“ 𐟔젥œ詅置如 PBS、TBS、TBST 等缓冲液时，这个问题尤为突出。如果先调 pH，可能需要花费较多时间和精力一点一点加入酸或碱，好不容易调到某个数值，但一旦定容，pH 值又会发生变化。𐟘– 𐟤— 大家对此有何看法呢？欢迎分享你的经验和见解！

WB缓冲液配方大全，实验必备！ 𐟓– 上样缓冲液 SDS 上样缓冲液（Laemmli 缓冲液）：63 mM Tris-HCl、10% 甘油、2% SDS、0.0025% 溴酚蓝，pH 6.8 𐟓‘ 2X 储存液配方 LDS上样缓冲液：106 mM Tris-HCl、141 mM Tris base、2% LDS、10% 甘油、0.51 mM EDTA、0.22 mM SERVA Blue G250、0.175 mM 酚红，pH 8.5 𐟓˜ 4X 储存液配方电泳缓冲液 Tris- 甘氨酸 SDS 电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM 甘氨酸、0.1% SDS，pH 8.3 Tris- 甘氨酸非变性电泳缓冲液：25 mM Tris base、192 mM 甘氨酸，pH 8.3 MOPS SDS 电泳缓冲液：50 mM MOPS、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.7 MES SDS 电泳缓冲液：50 mM MES、50 mM Tris base、0.1% SDS、1 mM EDTA，pH 7.3 Tricine SDS 电泳缓冲液：100 mM Tris base、100 mM tricine、0.1% SDS，pH 8.3 𐟓 转印缓冲液 Tris-甘氨酸转印缓冲液：12 mM Tris base、96 mM 甘氨酸， pH 8.3 Bis-Tris 转印缓冲液：25 mM bicine、25 mM Bis-Tris（游离碱）、1 mM EDTA，pH 7.2 这些配方是进行WB实验时常用的缓冲液配方，根据实验需求选择合适的缓冲液，以确保实验结果的准确性。

𐟧쨛‹白质等电点测定实验揭秘𐟔 𐟔즎⧴⨛‹白质的神秘世界，从等电点测定开始！在这个实验中，我们将一探究竟，了解蛋白质在特定pH值下的溶解状态。 𐟒᥮ž验原理很简单：蛋白质在等电点时，溶解度最小，最易生成沉淀。通过调节溶液的pH值，我们可以观察到这一现象，并记录下来。 𐟓实验步骤如下： 1️⃣ 准备实验材料，包括试管、胶头滴管等。 2️⃣ 准确称取一定量的蛋白质样品。 3️⃣ 在试管中加入适量的缓冲液和蛋白质样品。 4️⃣ 用胶头滴管滴加酸碱指示剂，并记录溶液的pH值。 5️⃣ 混合均匀后，静置几分钟，观察溶液的变化。 𐟔实验结果与分析：通过观察溶液的变化，我们可以发现，在某个特定的pH值下，蛋白质溶解度最小，最易生成沉淀。这个pH值就是蛋白质的等电点。这个实验不仅让我们了解了蛋白质的溶解特性，还为我们提供了关于蛋白质结构的重要线索。 𐟒ᨮ訮𚯼š 蛋白质的等电点测定对于研究蛋白质的结构和功能具有重要意义。通过调节溶液的pH值，我们可以更好地理解蛋白质的稳定性和相互作用。这个实验为我们打开了一个探索蛋白质世界的新窗口！

TBS缓冲液 𐟧ꤻŠ天要和大家分享的是实验室里常见的TBS缓冲液。作为一个生化实验的“小帮手”，它可是有着广泛的用途和重要的作用哦！一起来看看吧～ 𐟧‘‍𐟔씂S缓冲液的配制方法 TBS缓冲液是生化实验中的常客，用途广泛。配制方法其实并不复杂，只需要几个简单步骤： 1. 准备一个500mL的容器，先加入400mL的去离子水。 2. 接着，加入50mL的1 M Tris基，搅拌均匀，直到Tris完全溶解。 3. 然后逐渐加入75g的氯化钠(NaCl)，继续搅拌，这个过程可以用磁力搅拌器加速。 4. 使用pH计检测溶液的pH值，如果需要，可以用盐酸(HCl)或氢氧化钠(NaOH)调节pH至7.4。 5. 如果体积不足500mL，就用去离子水补足到500mL。 6. 记得用0.22微米的滤器过滤缓冲液，确保无菌。这样，一份500mL的TBS缓冲液就配制好了，非常简单吧！𐟑 𐟧딂S缓冲液的主要用途 TBS缓冲液在生物化学和分子生物学实验中可是多面手，常用于以下几个方面： 1. 免疫组化和原位杂交实验中的洗涤缓冲液。 2. 酶联免疫实验（ELISA）中的洗涤缓冲液。 3. 配制抗体稀释液及封闭液。 4. 免疫印迹实验中，用于清洗那些非特异性结合的抗体。这些用途可以说是实验中的必备功效。特别是在免疫印迹中，TBS缓冲液能够有效清洗掉非特异性结合的抗体，确保实验结果的准确性。 𐟥𜔂S缓冲液与其他缓冲液的对比 TBS缓冲液与PBST和TBST相比，各有千秋。以下是一些主要的区别： 1. TBS缓冲液的主要成分是Tris-HCl和NaCl，能够提供等渗条件，适用于免疫组化和原位杂交等实验。 2. PBST缓冲液是PBS加Tween-20，常用于细胞培养和洗涤步骤。 3. TBST缓冲液是TBS加Tween-20，适用于免疫印迹等实验。它有更好的洗涤效果，尤其在抗体稀释时效果突出。这些不同的缓冲液各有其适用场景。比如，在需要反复使用的抗体稀释中，TBST是更好的选择，因为它能够有效避免沉淀。而在细胞培养中，PBST则更为合适。 TBS缓冲液虽然用途广泛，但在特定的实验需求下，也有可能需要选择更为专用的缓冲液哦～ TBS缓冲液是不是很简单易用呢？实验室的小伙伴们不妨试试看哦！如果你有任何问题或使用心得，欢迎在评论区和我互动哦～𐟒쀀

荧光双标全攻略𐟔챯𘏢ƒ㊥ꌦ𕁧苯𜚊异源双标脱蜡至水：将切片依次放入环保型脱蜡液中各10分钟，然后放入无水乙醇中各5分钟，共3次。抗原修复：将组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液（PH8.0）的修复盒中，微波炉中火8分钟至沸，停火8分钟，再转中低火7分钟。过程中防止缓冲液过度蒸发。自然冷却后，将玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。画圈：切片稍甩干后，用组化笔在组织周围画圈，防止抗体流走。血清封闭：在圈内滴加BSA孵育30分钟。如果一抗是山羊来源，则加驴血清。加一抗：甩掉封闭液，在切片上滴加按一定比例配好的一抗，两种一抗按一定比例混合，滴加到组织上，切片平放于湿盒内4Ⰳ孵育过夜。湿盒内加少量水防止抗体蒸发。加二抗：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属标记的按一定比例配好的二抗覆盖组织，室温孵育50分钟。两种二抗按一定比例混合孵育。 DAPI复染细胞核：切片稍甩干后在圈内滴加DAPI染液，避光室温孵育10分钟。自发荧光淬灭：切片稍甩干后，在圈内加入自发荧光淬灭剂5分钟，流水冲洗10分钟。封片：玻片置于PBS（PH7.4）中在脱色摇床上晃动洗涤3次，每次5分钟。切片稍甩干后用抗荧光淬灭封片剂封片。镜检拍照：切片置于扫描仪下采集图像。DAPI紫外激发波长330-380nm，发射波长420nm，发蓝光；FITC激发波长465-495nm，发射波长515-555nm，发绿光；CY3激发波长510-560nm，发射波长590nm，发红光；CY5激发波长608-648nm，发射波长672-712nm。DAPI染出来的细胞核在紫外激发下为蓝色，阳性表达为相应荧光素标记的红光、绿光或蓝光。同源双标见下期。

𐟧쨛‹白质等电点测定实验全攻略𐟓š 𐟔 实验名称：蛋白质等电点测定实验 𐟓Œ 实验目的： 1️⃣ 了解蛋白质的两性解离性质 2️⃣ 掌握测定蛋白质等电点的方法 3️⃣ 认识蛋白质溶液稳定性的影响因素 4️⃣ 理解蛋白质变性与其等电点的关系 𐟒ᠥꌥŽŸ理：蛋白质作为两性电解质，在溶液中存在等电点。当蛋白质处于等电点时，其理化性质会发生显著变化，利用这种性质可以测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是观察缓冲液中溶解度变化来确定等电点。 𐟔젥ꌦ�꤯𜚊1️⃣ 准备所需试剂和仪器，如试管、移液管、胺头滴管等。 2️⃣ 配置不同pH值的缓冲液，并加入适量蛋白质溶液。 3️⃣ 观察并记录各管中蛋白质的溶解度变化。 4️⃣ 根据溶解度变化确定蛋白质的等电点。 𐟓 实验结果与分析：通过观察各管中蛋白质的溶解度变化，可以确定蛋白质的等电点。在等电点附近，蛋白质的溶解度会发生变化，从而可以利用这一性质来测定不同蛋白质的等电点。此外，通过等电点的测定，还可以进一步了解蛋白质的结构和性质，以及其在生物体内的功能。 𐟒ᠥꌦ𓨦„事项： 1️⃣ 确保实验过程中使用的所有仪器和试剂都是干净的。 2️⃣ 在配置缓冲液时，要准确控制pH值，以确保实验结果的准确性。 3️⃣ 在观察溶解度变化时，要细心记录数据，并确保数据的准确性。

𐟧ꐂS缓冲液各PH配方大揭秘！𐟔 𐟑颀𐟔즯次配制PBS缓冲液都要查找配方？别再麻烦了，这里为你整理了详细的PH配方！ 𐟓ŒPH5.8配方： - 母液1：7.16g磷酸氢二钠溶于100ml水 - 母液2：3.12g磷酸二氢钠溶于100ml水 - 混合液：92ml母液1 + 8ml母液2 𐟓ŒPH6.8配方： - 混合液：51ml母液1 + 49ml母液2 𐟓ŒPH7.4配方： - 混合液：19ml母液1 + 81ml母液2 𐟓ŒPH8.0配方： - 混合液：5.3ml母液1 + 94.7ml母液2 𐟒ᥰ贴士：配制时请确保所有试剂都已溶解，并使用精确的测量工具来保证配方的准确性哦！ 𐟔짎𐥜诼Œ你可以根据需要轻松选择合适的PH值啦！

pH计校准步骤与注意事项详解 𐟛 ️ pH计校准所需工具和材料标准缓冲液：选择与待测溶液pH值接近的标准缓冲液。我国常用的标准缓冲液有3种，分别是：邻苯二甲酸氢钾（KHC8H4O4），pH 4.003，0.05M 混合磷酸盐（Na2HPO4），pH 6.864，0.025M 硼砂（Na2B4O7ⷱ0H2O），pH 9.182，0.01M 𐟓 标准缓冲液的配置方法邻苯二甲酸氢钾标准缓冲液（pH 4）：精密称取在115Ⱶ℃干燥2～3小时的邻苯二甲酸氢钾10.12g，加水溶解并稀释至1000mL。磷酸盐标准缓冲液（pH 7）：精密称取在115Ⱶ℃干燥2～3小时的无水磷酸氢二钠4.303g与磷酸二氢钾1.179g，加水溶解并稀释至1000mL。磷酸盐标准缓冲液（pH 6.8）：精密称取在115Ⱶ℃干燥2～3小时的无水磷酸氢二钠3.533g与磷酸二氢钾3.387g，加水溶解并稀释至1000mL。硼砂标准缓冲液（pH 9）：精密称取硼砂3.80g（注意避免风化），加水溶解并稀释至1000mL，置聚乙烯塑料瓶中，密塞，避免与空气中二氧化碳接触。 𐟔砰H计校准步骤校准前的准备：将实验室用的pH计仪器斜率调至最大。拨开电极上部的橡胶塞，使小孔露出。校准基准点：将电极从装蒸馏水的烧杯中取出，用滤纸吸干残留的蒸馏水。将电极放入装有混合磷酸盐的烧杯内，等待15分钟以上。调整仪器上的定位旋钮，使仪器显示6.86pH。清洗电极：将电极从装有混合磷酸盐的烧杯内取出，用蒸馏水洗净。将电极放入装有蒸馏水的烧杯内，等待3分钟左右。校准斜率：将电极从装蒸馏水的烧杯内取出，用滤纸吸干残留的蒸馏水。将电极放入装有邻苯二甲酸氢钾或硼砂的溶液中，等待15分钟以上。观察仪器显示是否为4.00或9.18pH。如果不是，调节仪器上的斜率旋钮，使仪器显示为4.00或9.18pH。三点校正：如果需要进行三点校正，将另一种溶液按上述步骤操作一遍即可。 𐟓Œ 注意事项在进行校正时，确保电极上的小孔露出，否则会产生负压，导致溶液不能正常进行离子交换，影响测量数据。校正过程中，使用滤纸吸干电极上的残留液体，避免影响测量结果。

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