转座因子最新视觉报道_转座因子是什么(2024年11月全程跟踪)
DNA文库构建,一文读懂! 嘿,大家好!今天咱们来聊聊DNA文库构建的那些事儿。其实,这个过程还挺有意思的,尤其是对于那些喜欢搞科研的小伙伴们。好了,废话不多说,咱们直接进入正题吧! 片段化:第一步也是最关键的一步 ꊊ首先,咱们得把提取出来的DNA片段化。为什么呢?因为测序仪的读长有限,不能直接把整段DNA放进去测序。所以,我们需要把DNA剪切到适合的长度。现在常用的方法有两种:超声破碎法和酶切法。 机械打断:操作复杂但效果不错 犊机械打断就是用一些物理方法把DNA打碎。虽然这种方法对样本的损耗比较大,操作也复杂,但它确实挺有效的。不过,市面上更常用的还是酶切法。 酶切法:操作简便,成本低 𘊊酶切法就是用一些特定的酶来打断DNA。相比机械法,酶切法的成本更低,操作也更简便。你只需要加入片段化酶,然后反应一段时间就行了。目前常用的片段化酶是基于转座子原理的Tn5转座酶。 Tn5转座酶:背后的原理 슊Tn5转座酶最早是从E. coli中发现的一种细菌转座子。它的序列主要包括四个部分: IS50、IS50R和IS50L:这些序列高度同源。IS50R上的Tnp和Inh分别编码转座酶(Tnp)和转座抑制因子(Inh)。Inh可以和Tnp形成多聚体复合物,从而抑制Tnp介导的转座。 OE序列:由19个碱基组成,可以被Tnp识别,参与整个Tn5的转座。 IE序列:不参与Tn5的转座,但参与IS50的转座。 耐药基因:Tn5上的耐药基因主要有kan、str和ble。 总结 无论是机械打断还是酶切法,最终的目的都是为了把DNA片段化,方便后续的测序工作。希望这篇文章能帮到你们,对DNA文库构建有个更清晰的认识!如果有任何问题或者想法,欢迎在评论区留言哦!
쩫通量测序技术大揭秘! 즎⧴⨡訧遗传学的奥秘,我们离不开高通量测序技术!今天,就让我们一起揭秘几种重要的高通量测序技术吧! 1️⃣ ATAC-seq 力术原理:利用转座酶Tn5识别并切割开放的染色质区域,加上测序接头,揭示染色质开放性。 ᦊ术特点:高效、低起始量,高信噪比和特异性,非常适合研究转录调控机制、转录因子结合分析等。 2️⃣ ChIP-seq 力术原理:通过甲醛交联目标蛋白与染色质,用抗体免疫沉淀后纯化并测序,揭示转录因子调控机制和组蛋白修饰作用。 3️⃣ CUT&Tag 𗯸 力术原理:基于改造的Tn5转座酶,通过抗体介导实现DNA切割和测序接头的添加,简化实验流程,降低样本需求量。 4️⃣ RIP-seq ኊ力术原理:结合RNA免疫共沉淀和高通量测序,研究RNA与RNA结合蛋白的相互作用,适用于全转录组RNA-蛋白互作分析等。 5️⃣ CLIP-seq ✂️ 力术原理:通过紫外交联RNA与蛋白质,免疫沉淀后测序,揭示RNA-蛋白质相互作用,具有高准确性、强特异性。 这些高通量测序技术各有千秋,为表观遗传学研究提供了强大的支持!你更想了解哪一种呢?快来探索吧!
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