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内参蛋白最新视觉报道_内参蛋白是什么意思(2024年11月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-11-28

内参蛋白

WB实验常见问题及解决方法详解大家好，今天我们来聊聊WB实验中一抗孵育的注意事项和一些常见问题。希望这些小贴士能帮助大家在实验中少走弯路，早日取得满意的结果！内参选择的小窍门 𐟧 在WB实验中，内参的选择非常重要。内参通常用于对照目的蛋白的相对丰度。选择内参时要考虑目的蛋白的分子量（一般建议目的蛋白与内参蛋白分子量相差5 kDa以上，但不要差距太大），表达部位以及实验的具体情况。具体注意事项可以参考图一。抗体回收？不推荐！ 𐟚늊关于抗体的回收和重复使用，我们并不推荐。使用过的抗体可能会因为浓度变化和污染问题而影响实验结果。所以，还是一次性使用为好。常见问题解析 𐟔 没有条带可能原因：抗体变质或种属选择错误。确认抗体是否超过保质期或保存得当。确认说明书上是否有推荐所用的物种。背景脏或非特异性条带可能原因：一抗特异性不好或浓度过高。由于大多数抗体的开发基于多肽免疫，容易出现非特异性结合。增加漂洗次数与时间。优化曝光时间。优先选择特异性好的抗体，如兔单抗。适当提高一抗稀释比并4Ⰳ过夜孵育。抗体稀释液中增加脱脂奶粉。条带信号弱可能原因：一抗浓度低。适当提高一抗浓度。增加一抗孵育时间。更换效价更高的一抗。降低洗涤液中的去污剂浓度和漂洗时间/次数。条带反白可能原因：一抗浓度过高。有的小伙伴发现条带信号较弱后就开始提高一抗浓度并增加上样量，结果中心部位高浓度HRP底物很快被消耗殆尽，然后就不发光了，于是出现反白条带。调整建议：降低一抗浓度。小结 𐟓 今天的“战神”专辑就暂时到这了，希望这些小贴士能帮助大家在WB实验中少走弯路，早日取得满意的结果！下次再见！

传统WB与荧光WB：谁更胜一筹？ 𐟌Ÿ近年来，Western Blot实验经历了一场从“黑白”到“彩色”的革命——荧光WB的出现，解决了传统WB实验中常见的难题，如背景颜色深、目的条带不明显、分子量不准确等。那么，荧光WB到底是什么？它与传统WB有何不同？ 𐟔常见的Western Blot显色方法主要有：放射自显影、底物化学发光ECL、底物DAB呈色。荧光WB的实验步骤与传统WB相似，但最主要的区别在于二抗的选择。传统WB的二抗是酶标记的，而荧光WB的二抗则是荧光标记的。这样，就可以省去繁杂的显影和照胶步骤，直接利用荧光成像仪进行成像。 𐟟ⰟŸᰟ”𕨍祅‰WB的优势： 1️⃣ 灵敏度高：荧光免疫印迹的灵敏度比传统化学发光印迹更高。这是因为红外区域膜上的低背景荧光产生了高的信噪比。配备有光电倍增管（PMT）的激光扫描成像仪可以放大弱信号几个数量级。 2️⃣ 量化精度高：通过复用技术，可以同时检测相同印迹上的两种抗原。例如，可以分析感兴趣的蛋白，并利用内参蛋白（如GAPDH、肌动蛋白）进行均一化，无需剥离或重新检测印迹，从而提高量化精度。 3️⃣ 线性动态范围广：为了确保可靠的定量测量，从Western Blot获得的信号必须在线性动态范围内。这意味着信号强度与目标蛋白质丰度呈线性相关。通过激光成像仪获得的静态荧光值是定量的，因为荧光强度与蛋白质丰度成正比，这提供了广泛的线性范围。 4️⃣ 一致性和可重复性强：荧光信号仅取决于目标抗原的量，而化学发光信号受多种变量影响，如酶底物反应，难以控制，导致结果不一致和不可重复。 5️⃣ 信号持续时间长：荧光信号非常稳定。可以将印迹存储在冰箱中，在准备好之后再进行成像。 𐟔–综上所述，荧光WB相较于传统WB在灵敏度、量化精度、线性动态范围、一致性和可重复性以及信号持续时间等方面都具有显著优势。这些特点使得荧光WB成为现代分子生物学实验中的一项重要技术。

WB实验避坑指南：样本准备篇 𐟧ꊦ𘪥ꌥš„习惯可能都不一样，但我总结了一些避免WB实验坑的小技巧，分享给大家。提前准备很重要 𐟧𜊥œ襊 RIPA之前，千万别偷懒不洗。残留的培基血清会影响蛋白的纯度，后续测浓度时会不准，内参也会不齐。 RIPA的量要合适 𐟓 很多小伙伴测出的蛋白浓度很低，问题就出在加入适量RIPA这一步。根据我的经验，如果细胞密度达到了80%，六孔板每个孔加100ul，60mm的中皿加200ul，100mm的大皿加500ul，这样最后的蛋白浓度大概在8ug/ul左右。不同处理组的细胞长势可能不一样，所以在提蛋白之前要先观察一下各个组细胞的情况，根据细胞密度适当调整RIPA用量，这样可以避免各组之间蛋白浓度差别很大。低温操作很关键 ❄️ 加入RIPA后，所有步骤都要保持低温环境，室温下蛋白很容易降解。我更喜欢直接将板子或培养皿放进4度冰箱，简单方便。同时，加入的RIPA很难直接铺满整个皿底，所以加入RIPA后需要摇匀，让其均匀铺满皿底，之后每隔10分钟摇一下，让它充分接触裂解。 Loading小技巧 𐟒‰ 我用的是康为世纪的Loading，吸的时候偶尔会堵枪头，一堵就吸不准。除了这个问题之外其他都还好，所以也一直没有更换品牌。首先要把Loading完全融化，因为颜色太深了看不到里面的小冰晶，而且在吸之前我会把Tip头剪一下，口子大一点就不会堵了。煮蛋白时要小心 𐟔劥œ觅‹白的过程中，很多盖子可能会自己爆开，这会导致液体损失。所以我会在加热前捏一下管子再盖盖子，让管子形成一点负压，这样就能很大程度降低爆开的概率。煮沸过后的管盖上会有很多水滴，这个时候千万不要急着打开盖子，不然水滴崩飞了前面的调浓度就白做了，要混匀离心，再放到冰箱里储存备用。长期保存要注意 𐟧Š 如果样本长期不用要放到-80度保存，虽然加了Loading后会稳定很多，但是依然会慢慢降解，长时间放在-20度再去做的时候有可能就是某些泳道干干净净。提取组织蛋白的步骤略有不同 𐟧슥悦žœ有在这方面遇到困难的小伙伴可以在评论区留言，我会尽我所能的帮你寻找原因。希望这些小技巧能帮到大家，避免在WB实验中踩坑！

WB实验：内参与目的蛋白同膜共存 𐟔젗B实验，即Western blot，是一种常用的免疫印迹技术，用于检测蛋白质的存在和表达。近年来，期刊对实验的要求不断提高，尤其是内参和目的蛋白需要在同一张膜上显示。 𐟓Š 现在，通过先进的实验技术，完全可以在同一张膜上同时显示内参和目的蛋白，甚至双带也可以与内参共存。

𐟧엂实验电泳全攻略𐟒‰ 𐟔 昨天我们讲到了WB实验的电泳部分，今天我们来深入探讨一下！ 𐟒𜠩斥…ˆ，从-80℃冰箱取出蛋白样品，解冻后在金属浴中95℃重新煮3分钟。这个步骤是为了确保蛋白的充分变性，便于后续的电泳分离。 𐟧ꠦŽ姝€，离心后将蛋白样品置于冰上，准备点样。这里有个小技巧，就是用5x的loading buffer与蛋白按1:4的比例混合，95℃煮10分钟。这样可以根据内参的灰度值来调整上样量，确保实验结果的准确性。 𐟔砧„𖥐Ž，就是电泳的部分了。将制备好的胶从冰箱中取出，组装好电泳槽。记得要确保内槽电泳液充满，且没有气泡。在点样前，可以用注射器或枪头轻轻吸走气泡。 𐟒‰ 点样时，可以使用前面较细的枪头，这样点样更加精准。点样完毕后，盖好盖子，连接好仪器，就可以开始电泳了。注意红对红，黑对黑，确保电流方向正确。 ⚡ 今天的电泳条件是90v 30分钟+120v 55分钟。这个条件可以根据实验需求进行调整。 𐟓 明天我们将继续分享WB实验的转膜和敷一抗过夜的部分，敬请期待！ 𐟔젥š实验虽然累，但每一步都要精心操作，才能得到准确的结果哦！加油！

westernblot原理 Western Blot（蛋白免疫印迹）是一种重要的蛋白质检测技术，广泛应用于基因在蛋白水平的表达研究、抗体活性检测和疾病早期诊断等领域。通过将电泳分离后的蛋白质从凝胶转移到固相支持物（如NC膜或PVDF膜）上，然后用特异性抗体检测特定抗原，实现对蛋白质的定性或定量分析。 𐟔 实验目的研究体外蛋白质分子是否存在研究目的蛋白质的表达情况，如上调或下调，以及在不同样品中的表达差异 𐟎ꌥŽŸ理 Western Blot的主要目的是对蛋白表达进行定性或粗定量。定性是通过观察处理后与未处理相比，某个蛋白是否表达；粗定量则是通过观察某个蛋白表达量的显著升高，表现为条带变粗。检测已知蛋白和未知蛋白的方法类似。对于已知蛋白，根据目的蛋白选择相应的抗体，抗体与目的蛋白特异性结合后，通过引入带有标签的二抗，可以检测到目的蛋白的存在。对于未知蛋白，先在目的蛋白前面加上标签，再选择特异性结合的抗体，整个过程与已知蛋白相同。 𐟓 实验步骤选择内参：内参的选择对于实验的准确性至关重要。膜的选择：根据实验需求选择合适的膜类型。封闭原理：封闭过程中需要注意避免非特异性结合。显色发光常见方法：选择适合的显色和发光方法，以提高实验灵敏度。 𐟒ᠥ𘸨灩—˜解答如何排查WB背景高的问题？如何处理WB有拖带的现象？如何解决WB条带中出现杂带的问题？通过这些步骤和原理的详细解析，你可以更好地理解和掌握Western Blot技术，为科研实验提供有力的技术支持。

𐟧WB实验，你该看什么？ 𐟔当你面对一份Western blot（WB）实验数据时，该如何解读呢？ 1️⃣ 首先，𐟧要留意蛋白的来源，是哪种组织或细胞类型提供的，这是理解结果的基础。 2️⃣ 接着，𐟔要仔细查看实验的分组与处理条件，包括对照组和实验组，以及它们各自受到的处理。这样，你能更深入地了解实验设计和处理对蛋白表达的影响。 3️⃣ 然后，𐟓Š关注WB图中的数据，如目的蛋白和内参蛋白的名称与分子量。这些数据是验证实验准确性的关键。通过比较各组目的蛋白的表达水平，你可以得出实验结论。 4️⃣ 最后，𐟓ˆ别忘了查看统计展示方式，通常作者会用柱状图等来直观展示不同组间的蛋白表达差异。仔细分析这些统计图，你能获取到实验结果的定量信息。 𐟔쨧㨯𛗂图时，要从蛋白来源、实验分组、数据以及统计展示等多个角度全面分析，这样才能确保你准确理解实验结果，并在此基础上进行科研探索。

WB新神器！科研更高效𐟚€ 嘿，科研界的小伙伴们！今天咱们来聊聊WB实验中的“内参”那些事儿𐟔‘。大家都知道，WB（Western blot）是蛋白检测的金标准，但想要做好可不容易哦！高背景、非特异性、假阳性…这些问题真是让人头疼。不过别担心，掌握好内参的使用，这些难题都能迎刃而解啦！ 𐟔 为什么要用内参？在WB实验开始之前，我们通常会通过生物化学方法测定蛋白总量，确保每个孔都有等量的蛋白。内参就像是实验中的“监督员”，它能帮助我们确认所有样品都已上样，电泳是否正常工作。而且，大多数科学杂志都要求WB结果中包含内参数据哦！ 𐟓Š 如何归一化WB结果？ WB是蛋白半定量的好工具。为了比较多个样品中目标蛋白的相对表达，我们需要将数据归一化。具体操作就是通过灰度值分析测定每个蛋白条带的强度，然后除以内参的条带强度。这样，我们就能更准确地比较不同样品间目标蛋白的表达变化啦！ 𐟔젩€‰择内参抗体的小窍门：分子大小：内参蛋白的大小要和目标蛋白区分开，这样才能更准确地分析数据。线性范围和上样量：确定样本的线性范围，避免上样量过高或过低产生的误差。表达强度和稳定性：选择高表达且稳定的内参，比如那些由保守基因编码的蛋白。 𐟔젦�𑉨熧•Œ学术平台：医学生物的AI图像分析工具！𐟌Ÿ 武汉视界学术平台有什么优势？ AI图像识别：强大的AI技术，让图像识别更精准、更高效。多功能软件：覆盖Western blot、病理染色、免疫组化等多种应用（持续研发），满足你的各种需求。数据可视化：输出精美图形和图表，让数据分析变得简单直观。操作便捷：WB一键识别分析，WB一键统计及画图，WB三维视觉导图。服务对象：生物学专业学生、导师、科研人员（实验室）利用平台提供的AI算法和数据分析工具，让你的科研工作更上一层楼！科研路漫漫，有了武汉视界学术平台，图像分析不再难！快去试试吧，让你的科研工作更加高效！𐟚€ 希望这些小技巧能帮到大家，让WB实验变得更加顺利！记得点赞、收藏哦~ 一起在科研的道路上越走越远！𐟚€

内参出现双条带？别慌，这里有解决办法！做 Western blot（WB）实验的小伙伴们，你们是不是也遇到过这种情况：目的蛋白在文献里明明是个单条带，但自己一做却跑出两个条带？别急，这可能是蛋白有多个亚型异构体，分子量不同，而你的抗体又能同时检测到它们，所以出现了双条带。如果你能找到特异性针对某一蛋白亚型的抗体，或者查查文献证明亚型异构体的存在，那就没啥大问题，发文通常也没啥影响，只要你能有理有据地解释清楚就行啦。不过，有些小伙伴在做 WB 实验时，内参竟然也出现了双条带！要知道，内参一般是不会有异构体的（除非是Tubulin 和Tubulin 这种情况，但特定内参也只是其中一种）。那到底是怎么回事呢？让我们一起来看看可能的原因吧𐟑‡ 内参蛋白降解在裂解细胞时，如果没有及时加蛋白酶抑制剂，蛋白就容易分解。比如我上次做实验时，稍微一疏忽没及时加，内参就出问题了。所以，记得在裂解细胞时一定要及时加蛋白酶抑制剂哦！内参抗体的问题内参抗体通常是多克隆抗体，本质上就是抗体的混合物。如果其他蛋白里正好有能和混合物中某种抗体结合的抗原位点，杂带就会出现。建议你在4度摇床过夜孵育，稀释内参抗体的浓度，这样可以降低杂带出现的可能性。当然，条件允许的话，选择单克隆抗体更好，不过价格会贵不少。凝胶和电泳液的问题凝胶和电泳液的 pH 值非常重要，会影响蛋白质的迁移速率和分离程度。我有一次实验没调好 pH 值，结果内参就出现了双条带。所以，一定要仔细调整 pH 值哦！胶片曝光的问题如果你还在用胶片曝光，注意操作时胶片不要发生位移，否则两个条带就会出现。这在新手操作时很容易出现哦。抗体剥离不完全在孵育内参之前剥离过抗体，如果内参和目的蛋白分子量接近，没剥离完全，显影时就会出现之前的条带。重复使用内参抗体很多实验室会重复使用内参抗体，但这会大大增加抗体污染的几率，从而导致双条带产生。记住：内参抗体效果虽好，但也要小心使用哦！以上这些原因有可能同时出现，做实验之前一定要仔细逐一检查并排除可能性哟！希望这些小建议能帮到你们，祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

𐟔 探索Western blot的奥秘，让我们深入了解分离胶和内参的选择技巧！ 𐟌€ 凝胶电泳，以聚丙烯酰胺凝胶为例，是SDS-PAGE的核心技术。通过控制凝胶的孔径大小，实现蛋白质的精准分离。 𐟒ᠥˆ†离胶浓度的选择至关重要，它直接影响到对不同分子量蛋白质的分辨率。例如： - 6%分离胶，适合75-200kDa的蛋白 - 8%分离胶，适合50-150kDa的蛋白 - ...以此类推，不同浓度对应不同分子量范围。 𐟔젥†…参蛋白的选择也是一门学问。通常，我们选择与目标蛋白分子量相差至少5kDa的内参，以确保结果的准确性。例如： - 若目标蛋白~100kDa，可选6%分离胶与tubulin内参 - 若目标蛋白~70kDa，可选7.5%分离胶与tubulin、actin或GADPH内参 𐟓 另外，根据蛋白大小，我们还会选择不同孔径的PVDF膜。20kDa以上选0.45，20kDa以下选0.22。 𐟒ᠥ𐏨𔴥㫯𜚥ˆ†析多个目标蛋白时，10%分离胶、36kD内参GAPDH和0.45 PVDF膜是常用组合。 𐟎‰ 现在，你掌握了Western blot中分离胶与内参的选择秘诀，快去实验吧！