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巯基乙醇最新视觉报道_巯基乙醇对人的危害(2024年12月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-12-01

巯基乙醇

比昨天更困的是今天BETA-巯基乙醇_的微博视频

Western膜保存再生秘籍在多次实践的基础上，总结出一种效果极佳的Western Blot膜保存、Strip及膜再生方法，详细步骤如下：保存方法：曝光后的膜经过TBST清洗后，用甲醇浸泡5秒，然后晾干，最后用塑封膜封好，存放在-20℃冰箱中。使用方法：用甲醇清洗5秒，再经过三次TBST清洗。进行Strip操作，清洗后封闭，然后进行抗体孵育。 Stripping Buffer配方（20ml体系）： 巯基乙醇：140 10% SDS：4ml Tris（0.5M，pH 6.7）：2.5ml ddH2O：13.36ml 在50-55℃下反应30分钟（中间可晃动两次），然后用TBST清洗三次，封闭后进行抗体孵育。另一种Stripping Buffer配方（需要调pH，不常用）：甘氨酸：0.75g SDS：0.05g 加水：40ml 吐温-20：500 pH调至2.2，加水定容至50ml。实验步骤：用Stripping Buffer清洗两次，每次5分钟。用PBS清洗两次，每次10分钟。换TBST清洗两次，每次10分钟。封闭后进行抗体孵育。注意事项：加巯基乙醇时，必须在生物安全柜中进行，因为味道大且有毒。 Strip及Strip后清洗时，需加盖子防止味道散发。通过以上步骤，可以有效保存和再生Western Blot膜，确保实验结果的准确性。

简述巯基乙醇的作用

WB实验，选对洗脱液！在进行Western Blot（WB）实验时，为了节省蛋白样品和提高实验效率，我们通常会使用stripping buffer来清除膜上结合的抗体，以便重复使用同一张膜。以下是几种常用的stripping buffer及其特点：聚合美 𐟌ˆ 适用于PVDF膜。使用后，膜会变得透明。虽然洗脱效果相对较差，但可以通过延长洗脱时间来解决。过度洗脱的风险较低。博迈德 𐟒ꊠ 支持NC膜和PVDF膜，有强洗脱和弱洗脱两种选择。弱洗脱效果更好，而强洗脱含有巯基乙醇，虽然洗脱效果强，但有刺激性气味。Mild Buffer的洗脱效果表现优异。中科瑞泰 𐟔加专为PVDF膜设计，含有巯基乙醇，强洗脱效果。不过，这种洗脱液可能会将膜上的目的蛋白也洗掉，对于检测痕量蛋白的实验不太友好。使用时需要掌握好分寸。弗德 𐟌Ÿ 适用于PVDF膜，加入后膜会变透明，相对温和一些。具体效果还需要进一步实验验证。总结来说，博迈德的温和stripping buffer在避免过度洗脱方面表现较好，值得推荐。

请问，苯酚和巯基乙醇谁更臭……..[困]

自制蛋白上样缓冲液，WB实验更稳定！自从进入实验室，我发现大部分实验试剂都是自己配置的，尤其是Western blot实验的一整套试剂，从头到尾都是自配的，非常稳定，实用效果非常好！今天就来分享一下如何配置各种蛋白上样缓冲液。 5xNative-PAGE Loading Buffer 𐟌🊥œ訿›行天然蛋白的研究分析时，需要使用非变性的蛋白上样缓冲液来处理样品，以保持蛋白的天然活性。相比变性的蛋白上样缓冲液，它不添加去垢剂和还原剂。以下是5xNative-PAGE Loading Buffer的配方（10 mL）： 0.25M Tris-HCL (pH 6.8) - 1M Tris-HCL (pH 6.8) 2.5mL 溴酚蓝 (BPB) - 0.5%（WM）0.05g 甘油 - 50%（WM）5mL dH₂O - 2.5mL 配置步骤：将所有组分混合均匀。室温或不超过37℃的水浴中溶解非变性蛋白，然后立即放置室温，尽量避免长时间水浴。各组分的作用 𐟔 十二烷基硫酸钠 (SDS)：破坏蛋白质的二级和三级结构，使其去折叠，覆盖蛋白质本身的电荷，赋予蛋白质净负电荷。同时与硫醇试剂一起使蛋白质线性化，电泳时蛋白质的分离只与分子大小有关。还原剂：如巯基乙醇或二硫苏糖醇（DTT），用于减少含硫氨基酸（如半胱氨酸）之间产生的二硫键。此外，由于硫醇剂具有抗氧化特性，能够防止半胱氨酸的氧化。与SDS发挥协同作用，使蛋白质线性化。甘油：增加样品的密度，发挥样品沉降作用。 Tris-HCL：维持pH在6.8左右，防止在低温保存的过程中蛋白质肽键断裂，保证了蛋白质的稳定性；同时，Tris可以抑制酶促反应并防止蛋白酶降解蛋白质。溴酚蓝：指示样品在凝胶中的位置。自制蛋白上样缓冲液不仅稳定，而且可以根据实验需求进行调整，确保实验结果的准确性。希望这些配方和步骤对你有所帮助！

在冰箱乱放𗯥Ÿ𚤹™醇的人毕不了业，文章发不出去，延毕了也会再延毕。

𐟌𙦎⧴⩝ž变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的奥秘 𐟔줻Š天，我们将一起揭开生物科技领域的一个神秘面纱——非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳（Native-PAGE）。这个看似复杂的术语，实际上隐藏着生物科学的无数奥秘。 𐟎‰非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳是一种在不添加任何变性剂（如SDS和巯基乙醇）的情况下，对蛋白质进行电泳分析的技术。它能够保持蛋白质的天然形状和电荷，从而让我们更准确地了解蛋白质的特性和功能。 𐟒ᩂ㤹ˆ，它的实验原理是什么呢？简单来说，非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳主要依赖于蛋白质的电荷和大小进行分离。在电场的作用下，不同电荷和大小的蛋白质会以不同的速度在凝胶中移动，从而实现分离。由于不添加变性剂，蛋白质在电泳过程中能够保持其天然状态，这对于酶的鉴定、同工酶分析和提纯等实验具有重要意义。 𐟔쥜襮ž验过程中，我们需要准备一些必要的器材和试剂，如电泳仪、电泳槽、离心机、丙烯酰胺、Tris、HCl等。在配置电泳缓冲液时，我们需要注意不要添加任何变性剂，以确保实验的准确性。 𐟓œ接下来，让我们来了解一下实验步骤。首先，我们需要制备聚丙烯酰胺凝胶，并配置好电泳缓冲液。然后，将待测蛋白质样品加入到凝胶中，进行电泳分离。在电泳过程中，我们可以观察到不同蛋白质在凝胶中的移动情况。最后，将凝胶进行染色和观察，就可以得到蛋白质的分布情况了。 𐟒ᩜ€要注意的是，由于蛋白质的电荷和大小不同，所以在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中，我们需要根据蛋白质的性质选择合适的电泳条件。例如，对于碱性蛋白质，我们需要使用低pH值的凝胶系统；而对于酸性蛋白质，我们则需要使用高pH值的凝胶系统。 𐟎‰通过非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，我们可以更加深入地了解蛋白质的特性和功能，为生物科学领域的研究提供有力支持。希望这篇笔记能够帮助大家更好地了解非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳技术，激发大家对生物科学的热爱和兴趣！

这实验真是越做越顺手最近在做实验的时候，发现了一个超级好用的WB抗体剥离液，简直是实验员的福音！这个剥离液真的是越用越顺手，完全不费劲。温和且高效𐟒ꊩ斥…ˆ，这个剥离液的温和性真的很棒，不会破坏抗体，还能有效地去除抗体，不影响目的蛋白的检测。这样一来，实验的准确性和可靠性都大大提高了。节省时间和样品𐟕’ 其次，这个剥离液还能让一张膜进行多次抗体检测，真的是节省了时间和样品。以前总是担心样品不够用，现在完全不用担心这个问题了。背景干净，适用性强𐟧𜊥‰姦𛥐Ž的背景非常干净，不管是PVDF膜还是NC膜，都适用。这样一来，实验结果看起来更加清晰，数据分析也更加方便。无毒无味，环保安全𐟌🊦œ€棒的是，这个剥离液不含有毒有味的巯基乙醇，对实验人员非常友好。以前总是担心实验做完后身上会有异味，现在完全不用担心这个问题了。总之，这个WB抗体剥离液真的是我在实验中发现的一个宝藏，强烈推荐给大家！

Trizol法提取RNA的13个关键步骤 𐟌Ÿ 步骤概览： 1️⃣ 加入Trizol：向样品中加入500 的Trizol，确保样品体积占总体积的10%。 2️⃣ 混合氯仿：加入100 的氯仿，与Trizol等比例混合。 3️⃣ 充分混匀：摇动混合物30秒，然后室温静置2分钟。 4️⃣ 离心分离：在4℃下，以13200 rpm离心10分钟。 5️⃣ 收集上清液：将上清液转移到新的EP管中，加入等体积的异丙醇。 6️⃣ 沉淀RNA：在-20℃下沉淀30分钟以上。 7️⃣ 再次离心：在4℃下，以13200 rpm离心10分钟。 8️⃣ 清洗RNA：去掉上清液，加入85%的乙醇（用DEPC水配制）。 9️⃣ 润洗管壁：轻轻颠倒EP管，以7500 rpm离心5分钟。 𐟔Ÿ 去除乙醇：尽可能去掉上清液，瞬时离心后再次去除上清。 1️⃣1️⃣ 晾干RNA：让RNA在空气中晾干10分钟。 1️⃣2️⃣ 溶解RNA：加入DEPC水，确保RNA完全溶解。 1️⃣3️⃣ 质控检查：跑2%琼脂糖凝胶，观察核糖体RNA的完整性。测定吸光度：A260/A280应在1.8到2.1之间，A260/A230应大于2.0。测定RIN值，确保RNA完整性良好（RIN值应大于8）。 𐟔 原理解析： Trizol含有异硫氰酸胍（变性蛋白质），苯酚（裂解细胞），巯基乙醇（破坏RNase的二硫键），8-羟基喹啉（抑制RNase），甘油（促进苯酚溶解），EDTA和柠檬酸钠。氯仿加速有机相与水相分层，离心后RNA在上层水相，DNA和蛋白质在中间相或下层有机相。异丙醇用于沉淀RNA。 85%乙醇用于清洗RNA。 𐟓 注意要点：无酶操作：所有用品和试剂需为RNase-free级别，包括移液枪、枪头、EP管等。操作时需戴口罩，防止唾液中的RNase污染样品。取上清液时需小心，避免取到中间层的蛋白质，否则会影响吸光度。 85%乙醇清洗后需确保上清液吸干净，否则会影响吸光度。加水溶解RNA后，需确保RNA完全溶解，否则吸光度比值会差。如果RNA过分干燥，可放37℃水浴几分钟，颠倒混匀确保溶解。跑胶时若没有RNA专用的胶槽，可倒掉原来的buffer，用水冲洗后新加buffer。通过以上步骤和注意事项，您可以成功提取高质量的RNA，为后续实验打下坚实基础。

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