a549细胞权威发布_a549细胞用什么培养基(2024年12月精准访谈)
急性臭氧暴露对大鼠肺部细胞遗传毒性的影响是什么? ? 前言 ? 臭氧(O3)是氮氧化物和挥发性有机物的二次污染物。近年来,光化学反应造成的大气O3污染逐渐变得较为严重,其主要来源是光化学烟雾,其次还可来源于消毒过程中紫外灯的使用等。 ? 已有研究表明,臭氧对植物、体外培养的微生物和细胞具有遗传毒性,关于体外培养细胞的研究多集中于对淋巴细胞、 A549细胞系、骨髓细胞等,对体内肺部细胞的遗传毒性研究相对较少,且仅局限于某一个水平探讨引起的遗传毒性。 ?? 将肺组织单细胞悬液涂于干净的载玻片上,自然晾干后,插入含甲醇固定液的槽中固定10 min,取出后放入Giemsa染色液中染色15 min,超纯水冲 洗,晾干,油镜下观察计数。 ? 遵循最常用的方法,即 Z字形方法来筛选载玻片。在每张载玻片上计数 1 000个具有完整细胞核和细胞边界的细胞。从1 000个完整的细胞中计数MN的数量。 ? ?DNA-蛋白质交联实验 ? 取0.5 ml肺组织制备好的单细胞悬液,加入 0.5 ml SDS溶液,轻轻摇匀,65℃水浴加热10 min。 将100 Tris-HCl-KCl溶液加入到上述溶液中。充分混合后,将液体倒入1 ml聚丙烯移液器吸头中, 重复上述步骤7次,使DNA长度一致。 ? 冰上预冷5 min,4℃10 000 r/min离心5 min,将上清液转移到 另一个离心管中保存。向沉淀中加入1 ml洗涤缓 冲液,65℃水浴加热10 min。冰上预冷5 min。4℃,10 000 r/min离心5 min,收集上清到另一离心管中。 ? 向上述沉淀中加入0.5 ml洗涤缓冲液和0.5 ml 蛋白酶K溶液,充分混匀。60℃水浴中加热3 h,冰 上骤冷5 min。4℃,12 000 r/min离心10 min,收集上清。 ? 用洗涤缓冲液制备各浓度的小牛胸腺DNA 溶液1 ml,使其终浓度为0、50、150、250、375、500、 750、1000、1500、2500 ng/ml,分别加入1 ml新鲜制 备的Hoechst33258溶液(400 ng/ml),混合均匀后, 测量各组溶液的荧光强度,绘制DNA浓度标准曲 线。 ? 取上述第三、四步骤中离心管的上清液并加入 1 ml新鲜制备的Hoechst 33258溶液。混合均匀后, 在相同条件下测量荧光值。DNA和蛋白质交联率 计算公式:DNA-蛋白质交联率=交联DNA含量/ (交联DNA含量+游离DNA含量)。 ? 实验结果数据采用均数ⱦ 准差(xⱳ)表达,采 用SPSS 13.0统计软件进行分析,计数数据用卡方检验,计量数据用方差分析(ANVOA)进行比较。 ? 大鼠肺组织内8-OHdG含量 的影响 ? 由于臭氧具有强氧化性,8-OHdG是DNA氧化损伤的产物,通常检测8-OHdG的含量可以反映出 DNA氧化损伤程度。随着臭氧浓度的升高,肺组织 内8-OHdG的含量逐渐升高,0.12 ppm、0.5 ppm、1.0 ppm、2.0 ppm及4.0 ppm臭氧暴露组与对照组相比 均有显著性差异,且在臭氧浓度为4.0 ppm时达到 最大值(P<0.05)。 ? 荧光显微镜下观察,对照组未见拖尾的细胞,只 有完整的头部,表明细胞未发生DNA断裂;臭氧暴 露组均可观察到拖尾的细胞,断裂的DNA游动移出细胞核外,形成尾部,形似彗星。 ? 采用软件分 析图片显示,随着臭氧浓度的增大,0.12 ppm、0.5 ppm、1.0 ppm、2.0 ppm及4.0 ppm暴露组的拖尾数 量及拖尾长度均显著升高(P<0.05)。 ? 大鼠肺部细胞内DNA-蛋白质交联率的变化 ? DNA-蛋白质交联(DNA-protein crosslink,DPC)是指DNA链通过共价键的作用与蛋白质稳定的结 合在一起,是一种较为严重的DNA损伤形式。 ? 与对照组相比,0.12 ppm、0.5 ppm、1.0 ppm、2.0 ppm及4.0 ppm臭氧暴露组大鼠肺部细胞内DNA-蛋白质交 联率均显著性增加(P<0.05),且在2.0 ppm时达到最大值。 ? 急性臭氧暴露对肺部细胞染色体水平的影响 0.12 ppm、0.5 ppm、1.0 ppm、2.0 ppm及4.0 ppm 臭氧暴露组大鼠肺部细胞微核率分别为1.4‰,1. 6‰,2.0‰,2.4‰,3.0‰和3.2‰,微核率的发生与对照组相比均无统计学差异(P>0.05),但均随着臭 氧浓度的升高,微核的发生率增加。 ? 结论 ? 综上所述,急性臭氧暴露对大鼠遗传毒性的影 响,在DNA断裂方面,臭氧浓度越大,断裂损伤越 大,而DNA-蛋白质交联方面,随着臭氧浓度的变化, 出现先升高后下降的趋势。所以,臭氧致肺细胞遗 传毒性方面,不同的水平进行分开检测与描述。
NSD3通过与PPP1CB结合抑制STAT3磷酸化 为了探索NSD3调控STAT3激活的机制,进行anti-NSD3 IP-MS分析。发现丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PPP1CB可与NSD3相互作用(图1a)。内源性和外源性Co-IP分析显示NSD3、PPP1CB和p-STAT3之间存在相互作用(图1b-c)。过表达NSD3的A549细胞中进行Co-IP实验,结果显示过表达NSD3可促进NSD3、PPP1CB和p-STAT3的结合,但过表达NSD3会降低p-STAT3的蛋白丰度(图1d)。此外,NSD3过表达或敲除不影响PPP1CB的水平(图1e-g)。免疫荧光也证实NSD3、PPP1CB和p-STAT3的共定位(图1h)。 进一步验证PPP1CB对STAT3 727丝氨酸位点的调控功能。 在NSD3敲除的细胞中过表达PPP1CB,结果显示PPP1CB存在可以抑制NSD3缺失引起的STAT3激活(图1i)。同时,NSD3抑制STAT3在727丝氨酸位点的激活,过表达PPP1CB可进一步抑制STAT3的激活(图1j)。这些数据表明PPP1CB是与NSD3结合催化p-STAT3 (Ser 727)去磷酸化并抑制HK2转录的磷酸酶。 全文分享请查阅:【《Adv Sci》老树新花:组蛋白甲基转移酶的非表观功能!NSD3在抑制肺腺癌糖酵解中的作用机理】。 如有相关机制研究,欢迎随时留言探讨。 #科研#⠣研究生#⠣实验外包#
裸鼠成瘤实验技巧全解析,助你成功研究! 裸鼠,又称无胸腺裸鼠,是一种先天性胸腺缺陷的小鼠,因其第VIII连锁群内裸体位点基因发生纯合而形成。这种小鼠在科学研究中具有巨大的潜力,尤其是作为试验模型。本文将重点介绍裸鼠成瘤实验的方法和技巧。 实验室常见成瘤细胞 常规易成瘤细胞:Hep-G2(肝癌)、Hep2(喉癌)、NCl-H460(大细胞肺癌)、A431(表皮癌)、SK-OV-3(卵巢癌)、MCF-7(乳腺癌)、SKBR3、A375/B16-F10(人黑色素瘤细胞)、SGC7901(人胃肿瘤细胞)、KB(人口腔表皮样癌细胞) 慢速成瘤细胞:CNE(鼻咽癌)、A549(肺癌)、SPC-A-1(肺腺癌)、HT-29(结肠癌)、BEL-7402(肝癌)、MDA-MB-231(乳腺癌)、CT26(小鼠结肠癌细胞)、SH-SY5Y(人神经母细胞瘤细胞)、U251(人胶质瘤细胞)、BGC-823(人胃癌细胞)、PC-3(人前列腺癌细胞) 有争议的细胞:Hela(宫颈癌)、HCT(人回盲肠癌细胞/人结直肠癌腺癌细胞) 㸩瘤实验技巧 选择合适的裸鼠 实验室常用的是BALB/c-nu裸小鼠。随着裸小鼠年龄增长或受病毒感染等因素影响,裸鼠体内正常T细胞会增加。因此,接种肿瘤实验一般采用4-6周龄的裸鼠。 细胞状态是关键 细胞生长状态对成瘤实验至关重要。取处于对数生长期的细胞,细胞密度达80-90%左右最为适宜。收集细胞前一天晚上更换新鲜培养基。 胰酶消化与清洗 用胰酶消化细胞后,用预冷的PBS洗两遍,以去除细胞中残余的血清。 调整细胞浓度 用PBS或无血清培养基吹打细胞沉淀至合适的浓度。一般皮下瘤接种的细胞量为1-5㗱0^6个细胞/支,接种体积为0.1-0.2ml,因此细胞悬液的浓度为1-5㗱0^7个细胞/ml。如条件允许,可加基质胶以加速瘤块生成,基质胶与PBS或无血清的比例为1:1。 通过这些技巧和注意事项,裸鼠成瘤实验将更加顺利和高效。希望这些信息对大家有所帮助!
沉香花的功效与作用 姐妹们有没有发现,最近大家都在讨论沉香花?这可是被誉为“香中之王”的神奇之花哦!不仅香气宜人,还在健康养生领域有着卓越的功效。今天我就来跟大家分享一下沉香花的各种神奇作用,赶紧看过来吧! 改善睡眠质量 沉香花之所以在健康养生领域备受推崇,得益于它富含的挥发油、黄酮等成分。这些成分具有安神助眠的神奇功效,能够调节神经系统,促进睡眠,从而显著改善睡眠质量。对于那些饱受失眠困扰的小伙伴们来说,沉香花简直就是一剂天然的良药哦!ᦊ癌活性 近期,中国科学院昆明植物研究所的王跃虎团队在研究中意外发现,沉香花还具备显著的抗癌活性!研究表明,土沉香花的乙醇提取物对人肺癌、宫颈癌、神经母细胞瘤等多种癌症细胞具有抑制作用。特别是对人肺腺癌SPC-A-1细胞、人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞以及人肺腺癌A549细胞,其抑制效果尤为显著。通过深入追踪,科研团队发现了三个葫芦烷三萜和一个2-(2-苯乙基)色酮类化合物,这些成分对紫杉醇耐药的人肺腺癌A549细胞株的抑制活性明显高于紫杉醇本身。这一发现无疑为癌症治疗领域带来了新的希望! 𘧾容养颜 除了上述的安神助眠和抗癌活性外,沉香花茶在美容养颜方面也有着不可小觑的功效哦!它的原料——沉香叶,具有强大的抗氧化活性,能有效延缓衰老,抑制黑色素的形成,从而改善雀斑及老年斑,让肌肤焕发青春光彩。更值得一提的是,沉香花茶还内含丰富的活性成分,这些成分能够增强消化功能,促进消化道平滑肌收缩,加快消化液分泌,从而改善消化不良、食欲不振等问题。这样的美容养颜佳品,不仅让外在肌肤焕发青春,更让内在健康得到提升。✨ 沉香花,这一自然界的瑰宝,以其独特的香气和卓越的功效,成为了健康养生领域的璀璨明珠。无论是改善睡眠质量、抗癌活性还是美容养颜,沉香花都展现出了其不凡的实力。在追求健康与美丽的今天,让我们共同探寻沉香花的奥秘,感受其带来的科学魅力与健康福祉。 好啦不说那么多了,赶快去试试吧!有任何问题或者想了解更多的小伙伴都可以留言告诉我哦!쀀
沉香花的功效与作用 家人们,你们有没有听说过沉香花?这种自然中的瑰宝,最近可是越来越火啦!今天我就来和大家聊聊沉香花的神奇功效,看看它是如何走进我们的生活,带给我们健康和美丽的。 改善睡眠质量 沉香花所散发的香气,纯净而深沉,真的好像拥有魔力一样。每次闻到这种香气,我都能感觉到心情逐渐平静下来,仿佛进入了一片宁静的森林。它的香气可以调节神经系统,促进睡眠,特别适合那些因工作压力大、生活节奏快而导致失眠的朋友们。🦊癌活性 没想到吧,沉香花不仅有香气,还有抗癌的功效!中国科学院昆明植物研究所的王跃虎团队近期发现,沉香花中含有三个葫芦烷三萜和一个2-(2-苯乙基)色酮类化合物,这些成分对人肺腺癌SPC-A-1、人肺鳞状细胞癌NCI-H520和人肺腺癌A549细胞均显示出显著的抑制活性。这一发现真的让人对沉香花充满了敬意和期待。𘊊♀️美容养颜 爱美的姐妹们注意啦!沉香花不仅可以改善睡眠和抗癌,它还是美容养颜的神器哦!沉香叶作为沉香花的原料,具有强大的抗氧化活性,不仅能有效延缓衰老,还能抑制黑色素的形成,从而改善雀斑及老年斑,使肌肤焕发青春光彩。长期饮用沉香花茶,不仅能美容养颜,还能增强体质,提高免疫力,真的是健康与美丽的双重滋养。 沉香花,这一自然中的瑰宝,以其独特的香气和神奇的功效,走进了我们的生活。不管是改善睡眠质量、抗癌研究还是美容养颜,沉香花都展现出了它独特的魅力和价值。家人们,不妨试试把沉香花茶当成日常饮品,享受它带来的美丽与健康吧!好啦不说那么多了,赶快去试试吧!欢迎大家留言分享你的体验哦~
沉香花的功效与作用 家人们,最近有没有听说过沉香花?这种古老而神秘的名贵中药材,最近可是养生界的“新宠”哦!今天我就来跟大家聊聊沉香花的三大主要功效与作用,看看它到底有多神奇吧! 𘦔睡眠质量 沉香花所散发的香气,真的是凝心静气、安魂定魄的好东西。对于长期失眠的朋友们来说,这简直就是福音呀!沉香花并不是直接让你入睡,而是通过香气调节神经系统,帮助你达到阴阳平衡的状态。中医认为,失眠往往是因为阴气过重、阳气不足,而沉香花正好能补足阳气,恢复正常的睡眠模式。此外,沉香中还含有与速效救心丸相同成分的稳定心率成分,进一步促进深度睡眠。是不是超级棒? ꨰ节内分泌、增强免疫力 现代人的失眠和压力问题越来越普遍,而沉香花茶就是绝佳的调节工具。一杯沉香花茶下肚,感觉有一股清流缓缓流过心田,紧绷的神经逐渐放松,睡眠问题也得到改善,第二天精神焕发。更棒的是,沉香花还能增强免疫力哦!它含有多种活性成分,如沉香酚、谷甾醇等,具有抗菌、抗病毒、抗氧化等多重功效,全面提升人体免疫力。姐妹们,赶快泡起来吧! ᦊ癌活性、抑制癌细胞 除了改善睡眠和增强免疫力,沉香花在抗癌活性方面也有显著效果。研究发现,土沉香花的乙醇提取物对人肺癌、宫颈癌、神经母细胞瘤等多种癌症细胞有显著的抑制作用。特别是对人肺腺癌SPC-A-1细胞、人肺鳞状细胞癌NCI-H520细胞以及人肺腺癌A549细胞,其抗癌活性更为突出。这为沉香花在抗癌领域的应用提供了新的可能。同时,沉香花中的挥发油、生物碱、酚类化合物等化学成分,也赋予了它独特的药用价值。 好啦,今天的分享就到这里啦!沉香花真的是一种集香气与健康于一身的宝贝,大家有机会一定要试试哦!欢迎大家留言分享你们的使用心得或者有任何问题都可以问我哦!感谢大家的关注,咱们下次见啦!
特发性肺纤维化(六) 末世圣药白芨 前边讲了凤凰医肺结节纤维方,菲牛蛭延胡索 黄芪阻纤融纤的药理。咱们继续来扒剩下的两 味药丹参和白芨。 丹参酚酸B具有强抗氧化、抗炎和抗纤维化等多 种生物活性,对保护心血管系统和肝脏健康有 显著疗效。 在肺纤维化中,丹参酚酸B能够通过调节相关信 号通路,减轻炎症反应,抑制肺纤维化的关键 病理过程,包括成纤维细胞活化、纤维化因子 的过度表达和细胞外基质的异常沉积。 丹酚酸B可通过抑制Rho A/ROCK有效减轻肺泡 结构破坏、炎症细胞浸润、胶原沉积和多种纤 维化因子的表达,同时上调E-cadherin,下调 N-cadherin和SMA的表达,延缓肺纤维化的 进展。 白芨是末世圣药之一,凤凰医诸多组方中用到 白芨。一切粘膜问题皆要用之,呼吸道消化道 生殖道粘膜的修复问题无药可比。包括宫颈糜 烂、胆囊萎缩等不治之症,博友实证白芨组方 有效。 白芨药理绝不止于此,中医对其认知甚少。借 此系统扒拉一下,凤凰医混沌一碗治百病,白 芨之功不可没。 1、抗菌作用 白芨所含的联苄类化合物和菲类成分,是白及 抗菌的主要活性成分。对金黄色葡萄球菌、大 肠杆菌、绿脓杆菌和枯草芽孢杆菌的活性有明 显的抑制作用,随浓度的增加抑菌作用增强 。 白及的内生菌株T21也有较好的抑菌作用,可 抑制革兰氏阳性细菌中的金黄色葡萄球菌和枯 草芽孢杆菌及革兰氏阴性细菌中的大肠杆菌和 铜绿假单胞菌。 2、促进胃肠道黏膜的修复 白芨可以促进胃肠道黏膜和消化道溃疡的修复 愈合,保护胃黏膜功能。白芨多糖能够减少炎 性细胞浸润并修复肠道黏膜的损伤。 药理是白芨多糖能够降低NF-p65、TLR-4基 因和蛋白表达,改善促炎因子白介素23和白介 素17的异常分泌,从而减轻炎症,起到保护胃 黏膜及修复其组织的作用。 白及提取物可增强胃黏膜的抗氧化能力,加快 溃疡周围组织上皮细胞的增生和新生毛细血管 的形成、促进新陈代谢和创面愈合,抑制幽门 螺杆菌生长,减轻溃疡及消化道症状。 3、抗肿瘤 白芨多种活性成分均有抗肿瘤作用,菲醌类化 合物能够诱导A549细胞产生大量活性氧自由 基,从而减缓癌细胞周期、导致癌细胞凋亡, 最终抑制肿瘤的生长。 白极与抗肿瘤药物合用时,可以辅助提高抗肿 瘤药效,白及多糖与硬脂酸和多烯紫杉醇形成 的聚合物,具有良好的抗癌活性。 对人体宫颈癌、乳腺癌、肝细胞癌、结肠癌的 效果优于单独使用多烯紫杉醇注射液,提高多 烯紫杉醇的抗肿瘤药效。白芨内生真菌强壮土 赤壳菌,对乳腺癌细胞MCF-7的细胞毒活性有 抑制作用。 白芨活性成分通过多靶标作用于多条信号通路 上,通过抑制癌细胞增殖、转移和诱导癌细胞 凋亡、自噬等过程发挥治疗肺癌的显著作用。 在临床实际应用中,中医对白艿抗肺癌的药理 无认知,但仅作为治疗肺癌的随证加减辅助用 药,多为了缓解肺部咯血症状或者用于消肿生 肌。 4、止血 白芨多糖独特的黏附性,可形成一层保护膜并 覆盖在创口表面,防止血液流出;同时通过激 活机体内、外源性的凝血系统,使血小板活化 聚集血细胞凝集,起到止血作用。 5、恢复纤维凝血系统平衡 调整机体内的t-PA / PAI-1比值,使纤溶系统和 凝血系统恢复平衡,这就是取其治疗肺结节纤 维的药理之一,纤溶系统失衡是纤维形成的重 要成因。 6、造血 白芨多糖能够升高外周血白细胞,加快造血干 细胞增殖及分化,促进造血功能损伤恢复。 7、增强免疫 白芨多糖可以通过提高巨噬细胞吞噬功能、诱 导免疫调节因子而增强机体免疫功能,减轻免 疫性肝损伤的程度。提高脾脏和胸腺指数,从 而增强机体免疫。 8、美白 白芨具有强大的抗DPPH、ABTS自由基清除活 性和铁离子还原活性。可显著降低酪氨酸酶活 性,抑制黑色素合成。 9、抗肺部疾病 白芨对肺的修复作用无药可比,临床多发性肺 穿孔都能修复。能显著改善矽肺患者肺组织纤 维化,同时对肺部免疫系统及氧化平衡系统有 良好的调节作用。 降低肺部促炎因子的表达,对TNF-MCP-1 的抑制作用尤为明显,改善亚急性肺损伤。 肺结节病根是外邪导致肺部过度免疫反应,形 成的肉芽肿及纤维化。凤凰医的百日咳方,不 止于止咳功率,还有治未肺结节之功。 10、改善认知功能障碍 白芨可以减轻脑白质缺血性损伤,对由于缺血 形成的脑白质损伤、学习记忆能力具有保护和 改善作用,并且可以改善其认知功能障碍。 11、改善心肌坏死 白芨多糖能够激活PI3K/AKT通路,抑GRP78/ PERK/eIF2🡥𗩀路蛋白表达,降低心肌细胞 凋亡,改善心肌梗死心肌坏死。 白芨应用范围相当广泛,后边再对症来谈。因 为白芨价格较高,你从医院药店买到末提取过 成份的白芨的概率为零,不接受任何反驳。 花影恨月光1的微博视频
无血清细胞冻存液大揭秘 想要找到一款便捷、高效的细胞冻存液吗?来看看雅酶的CellorLab无血清细胞冻存液吧!无需繁琐的分装步骤,更无需复杂的程序降温过程,直接-80℃冻存,轻松搞定! 该冻存液以无血清配方为基础,为细胞提供稳定的生存环境,确保细胞活性和复苏率。实验数据显示,使用CellorLab冻存液冻存的细胞,复苏率高达90%以上,甚至可达98%! ᨀ且,这款冻存液还经过了严格的实验验证,适用于多种细胞系,包括但不限于MCF7、NCI-H23、HCCLM3、A549等。无论你是科研工作者还是实验室人员,都能找到适合你的细胞冻存方案。 现在购买还有优惠活动哦!买1盒送50元京东卡,买3盒送1盒!这样的好康,你还在等什么?赶快行动吧!♀️♂️ 쥿릝娯试雅酶的CellorLab无血清细胞冻存液,让你的细胞冻存更加便捷、高效!ꀀ
12周龄裸鼠造模失败?试试这些方法吧! 最近在做A549皮下瘤的实验,真是让人头疼。之前细胞培养一直不稳定,好不容易养起来了,结果发现老鼠已经12周龄了。造模时打了不少细胞,每只老鼠都打了一个满的T25瓶。等了几天,结果还是失败了,细胞根本没长起来。튊我觉得失败的原因可能是因为鼠龄太大了。细胞活力其实挺好的,但就是不长瘤。有没有补救的办法呢?加上基质胶会不会有帮助?有经验的朋友们,求分享一下你们的经验吧! 现在真的是急需找到解决办法,不然实验就要泡汤了。希望大家能给我一些建议,或者分享一下你们之前遇到的类似情况是怎么解决的。谢谢大家了!
𘩼 成瘤模型构建全攻略 想要了解裸鼠成瘤(CDX模型)的构建方法吗?这里为你揭秘! 先,选择合适的裸鼠是关键。4-6周龄的Nude裸鼠是首选,确保它们在SPF环境中适应一周,以减少外界干扰。튊接下来,细胞接种是重要步骤。接种部位可以是皮下、静脉或原位,细胞量通常为5*106个/200ul。但请注意,不同细胞系可能需要稍作调整哦!슊⏰成瘤时间因接种部位而异。皮下接种一般需要1-2周,而尾静脉和腹腔接种则大约需要1周。请密切观察小鼠状态,确保它们健康无虞。 如果肿瘤不长,别着急!可能是细胞活力、动物选择或饲养环境出了问题。逐一排查,找出原因并解决。 𑨋姘䥭长起来又消失,可能是炎症反应在作祟。继续观察,必要时可考虑重新实验。 在实验过程中,要密切关注动物状态、体重和瘤体积的变化。体重变化能反映动物的整体状态,而瘤体积则可用公式V=ab2/2来计算。 如何判断肿瘤转移?病理剖检、小动物活体成像和小动物核磁是三大法宝,助你轻松应对! ꥓ꤺ细胞能成瘤?HCT116、HePG2、A549等细胞系都已验证过,放心使用!
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