磁珠法核酸提取在线播放_磁珠法核酸提取试剂盒(2024年11月免费观看)
磁珠法核酸提取技术相比离心柱法和传统试剂法的优势
脱氧核糖是什么 脱氧核糖核酸(Deoxyribonucleic acid,DNA)是所有生物的遗传物质基础,其提取是分子生物学研究的关键步骤。自弗里德里希ⷧ퇥斦졨🛨ጄNA提取以来,科学家们不断改进方法,使其更可靠、更容易、更快速、更经济且产量更高。本期将介绍几种常见的DNA提取方法。 细胞裂解方法 物理机械法:通过机械切力作用使组织细胞破碎,适用于量少的动物组织。主要方法包括液氮研磨、超声法、反复冻融法和低渗裂解法。 化学法:利用化学试剂改变细胞膜的通透性,从而使内容物选择性释放出来。主要方法包括SDS法和CTAB法。 전NA提取纯化方法 沉淀法:主要有两种,苯酚/氯仿有机溶剂萃取法和盐析沉淀法。前者操作时间较长且有机溶剂对人体有害,后者操作简单、经济成本低且生物安全性更高。 离心柱法:采用特殊硅基质吸附材料,利用基因组DNA在高盐状态下选择性吸附于离心柱内硅基质膜,通过一系列快速的漂洗、离心等步骤去除杂质,最后低盐的洗脱缓冲液将纯净基因组DNA从硅基质膜上洗脱。 磁珠法:利用DNA在磁珠反应体系中会由线性压缩成球状,暴露出核酸骨架上大量的负电基团与反应体系中的阳离子连接,形成“阴离子-阳离子-阴离子”的盐桥结构,使DNA分子被特异性地吸附到磁珠表面。 方法学对比 沉淀法:操作时间较长,有机溶剂对人体有害。 离心柱法:获得DNA的纯度高、产量高,而且能进行微量操作。 磁珠法:操作简单,纯化效果好,适用于自动化设备。 通过以上介绍,希望你能找到最适合你的DNA提取方法!
国产柱法核酸提取试剂盒品牌大揭秘! 经过这三年的科普,连我们村上放羊的刘大爷都知道“核酸检测”了,虽然他依旧分不清蚱蜢和螳螂。核酸检测之前有一个步骤是核酸提取,除了磁珠法,还有溶液法和柱膜离心法(简称柱法)。今天我们只谈柱法核酸提取试剂盒。 你知道国内有多少个品牌的柱法核酸提取试剂盒吗?大多数人能想到的不会超过五家,但经过我简单的统计,我找到了29个品牌,可能还有遗漏的,是不是很惊人?一个这么小的领域居然有这么多玩家,实在是太卷了! 好多品牌! 先来看看我统计到的29个柱法核酸提取试剂盒的品牌。你会发现北京是最多的区域,拥有12家,这可能跟王春香博士2002年在北京创办的天为时代(现天根生化)有一定关系。其次是江苏,9家,毕竟市场在那里,成本优势在那里,这几家都属于后起之秀。另外这个品类收购也很常见,既有国外收购国内的案例,如德国Qiagen收购北京天为时代改名为天根生化;也有国内收购国外的案例,如上海百赛收购Corning-Axygen的Axykit改名为UElandy Biokit。作为基础分子类实验的切入口,这个类别的资本运作还远没有结束。29家品牌具体如下: 通过这次活动,我们希望能更深入地了解各个品牌的特点和优势,为未来的研究和开发提供更多的参考和借鉴。
质粒提取的四种方法及其适用范围 质粒提取是一种常见的实验技术,用于从细菌或其他生物体中获取纯净的质粒DNA。质粒提取的目的是为了进行后续的分子生物学实验,如基因克隆、基因表达和转基因等。我们通常使用商业化试剂盒来进行质粒提取,这些试剂盒可以根据实验目的和样品来源进行分类。 碱裂解法 ꯸ 原理:碱裂解法利用碱性溶液破坏细菌细胞壁和细胞膜,从而使质粒DNA从细胞中释放出来。碱性条件会导致细胞膜和细胞壁的破裂,释放出质粒DNA。随后通过中和和沉淀步骤进行纯化,去除蛋白质和其他杂质。 适用范围:碱裂解法适用于从大多数常见细菌中提取质粒DNA,特别适合小规模提取和常规实验。 高盐法 原理:高盐法利用高盐浓度破坏细菌细胞膜和蛋白质,从而使质粒DNA从细胞中释放出来。高盐浓度会导致细胞膜的破裂和蛋白质沉淀,从而实现质粒DNA的纯化。 适用范围:高盐法适用于从各种细菌中提取质粒DNA,包括一些难以处理的细菌株。这种方法对于大规模提取和高纯度要求的实验较为适用。 硅胶柱层析法 튥理:硅胶柱层析法使用硅胶柱作为质粒DNA的吸附材料。样品中的质粒DNA在硅胶柱上结合,而杂质则被洗脱。然后通过洗涤和洗脱步骤,纯化质粒DNA。 适用范围:硅胶柱层析法适用于从各种来源的细菌中提取质粒DNA,包括高GC含量的细菌。这种方法通常能提供较高的纯度和较好的质粒DNA回收率。 磁珠法 ꊥ理:磁珠法利用磁性珠子表面的特定配体与质粒DNA结合,然后通过磁场将质粒DNA与磁珠分离。杂质则被去除,最后通过洗涤和洗脱步骤纯化质粒DNA。 适用范围:磁珠法适用于从各种来源的细菌中提取质粒DNA。这种方法具有快速、高效、自动化的特点,适用于高通量实验和高纯度要求的实验。 实验常见问题和措施 芦:在质粒提取过程中,可能会发生DNA污染,导致提取的质粒DNA样品的纯度下降。为了避免污染,需要注意使用无菌操作和洁净的实验环境。 DNA降解:DNA在提取过程中容易受到核酸酶的降解。为了保护DNA的完整性,可以在提取过程中添加核酸酶抑制剂,避免长时间曝光在室温下,以及避免多次冻融循环。 低得率:有时候质粒提取的得率较低,可能由于菌落密度不足、提取方法不当等原因。为了提高得率,可以增加菌落培养的时间和密度,使用适当的提取方法,并根据实验需要优化提取步骤。 在进行质粒提取实验时,需要注意操作规范和控制实验条件,以确保提取的质粒DNA质量和纯度的准确性和可靠性。
circRNA实验全解 实验原理 在组织或细胞中提取的total RNA通常包含多种RNA。为了准确分析circRNA,首先需要去除样本中的核糖体RNA和poly-A RNA干扰,然后用RNase酶消化掉线性RNA,从而使circRNA富集。 实验目的 从总RNA中富集circRNA,采用Northern blot和特异的PCR进行验证,并对circRNA的成环特性进行评估。 ꠥꌦ料 RNA提取试剂盒 核糖体RNA去除试剂盒 PolyA结合磁珠 RNAaseR试剂盒 放线菌素D Northern blot试剂盒 发散引物RT-PCR 实验步骤 4.1 RNA提取 样品处理 组织样品:加入400ul Trizol溶液到装有绿豆大小组织块的EP管中,利用电动组织匀浆器在冰上充分匀浆1-2min,后放置室温充分裂解10min。 细胞样品:12孔板细胞弃去上清,每孔加入600ul Trizol溶液。先在冰上裂解15-20min,再用1ml移液枪吹打液体充分裂解贴壁细胞,后将液体转移到RNasefree EP管中。 RNA提取 按1:5比例,在Trizol溶液中加入氯仿,手动充分摇匀混合液20-30s,室温放置10min。 4度1200g离心10min,小心转移上层透明液体到EP管中。 按异丙醇与Trizol溶液比例为1:2加入异丙醇,上下颠倒混匀液体,室温放置10-15min。 4度1200g离心10min,弃去上清,可见羽毛状RNA沉淀于管侧底部。按等比例加入75%乙醇,温和地悬浮RNA沉淀。 4度7500g离心5min,尽量吸除上清,室温晾干5-10min。用20ul RNase free dH20溶解RNA,测浓度后-80度保存。 总RNA定量 RNA在260nm波长处有最大吸收峰,可通过测定RNA样品的OD260和OD280估算出RNA的含量和纯度。OD260值为1相当于40ug/ml单链RNA,该方法提取的RNA OD260/280值在0.8-2之间。 circRNA的预处理 去除核糖体RNA和poly-A RNA 使用Invitrogen的核糖体RNA去除试剂盒RiboMinusTM Human/Mouse Transcriptome Isolation Kit(货号K1550-01)。 通过磁珠法结合Poly(A)的RNA后剩余的RNA即为Poly(A)-RNA样品。 RNAaseR酶消化 RNase R是一类核糖核酸外切酶,能降解大部分线性RNA,但circRNA不易被RNase R酶消化降解。因此可以通过该实验鉴别circRNA和线性RNA。 准备总RNA样品:提取细胞或组织的总RNA,测浓度后备用。 RNaseR反应体系:取5ug total RNA样品按下面体系准备消化。 短暂旋转试管,添加5xFirst-StrandBuffer, 0.1MDTT, RNasin和SuperScriptM RT,轻轻移液并将反应液在25℃下孵育5分钟。 在50℃下孵育60分钟,然后通过灭活反应在70℃加热15分钟。 发散引物可以扩增circRNA,而不能扩增线性RNA。 参考文献 Chen et al. (2015). Isolation of non-polyadenylated and ribosomal-free RNAs from mammalian cells. Methods Mol Biol 1206, 69-80. Yang et al. (2016). Characterization of Circular RNA. Methods Mol Biol 1402, 215-227.
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