当前位置：网站首页 » 导读 » 内容详情

pet28a载体新上映_pet28a载体详细讲解(2024年12月抢先看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-11-30

pet28a载体

分子克隆实验指南：从零开始到成功大家好！首先，非常感谢你们的关注和喜欢，真的很开心我的笔记能帮到大家。还记得最开始的那篇笔记，记录了我那次离谱的分子克隆实验，4个片段的同源重组竟然花了两个月！后来我慢慢发现，分子克隆其实非常微妙，有点像高中时的数学，学霸们轻而易举考100分，而我这种小学渣每次都在及格边缘反复横踩。所以，我想用这个账号记录我的科研日常，希望能和大家一起学习。之前的几篇笔记中，我分享过引物设计、载体酶切、同源重组等非常具体的实验方法。但最近我发现，很多粉丝朋友们刚开启自己的科研之旅，或者是偏向临床的科研大佬们，对分子克隆实验整体了解比较少。所以今天，我想跟大家分享一下质粒构建的大体流程。明确你的目标 𐟎斥…ˆ，在构建质粒之前，你需要有一个清晰的计划。明确你要使用哪种克隆方法，比如同源重组、TOPO克隆还是T4连接。TOPO/TA克隆不需要同源臂，而同源重组和T4连接是需要同源臂的。选择合适的载体 𐟚€ 根据你的实验目的，选择合适的表达载体。例如，常用的原核表达载体有pET28a，真核表达载体有pcDNA3.1，CRISPR/Cas9表达载体有Lenti-V2等等。载体可以通过酶切或者环形PCR后，跑胶回收所需的载体片段。设计引物并扩增片段 𐟔슦 𙦍€选的构建方法，设计并合成引物。PCR扩增需要插入的目的片段，PCR的产物也需要通过跑胶回收。连接与转化 𐟔„ 将载体和目的片段连接后，转入合适的感受态细胞内。例如，DH5˜“产生突变或者缺失，而Stable3相对更加稳定。但提质粒时需要使用试剂盒中的去蛋白液洗3遍，以充分去除核酸酶，减少后续对质粒酶切等实验的影响。通常连接产物的用量不超过总体积的1/20。然后在冰上静止20分钟，热激1分钟，再冰上静置3分钟，加入无抗的LB培养基，摇床摇40-60分钟，最后涂在合适抗性的LB平板上。培养与鉴定 𐟧ꊌB板子放在37度培养箱内过夜生长，第二天挑取单克隆细胞，置于合适抗性的LB培养基中摇菌，然后提质粒送测序公司测序。如果你想偷懒的话，也可以直接送菌液到公司哦，菌液和质粒的测序价格是一样的。今天就分享到这啦，希望这些内容对大家有用！如果有什么问题或者要补充的，欢迎评论或者私信哦！𐟘Š

质粒构建时如何选择合适的蛋白标签？𐟤” 蛋白标签是一种在DNA体外重组技术中常用的工具，它们与目的蛋白融合表达，以便于目的蛋白的表达、检测、示踪和纯化等。那么，在质粒构建时，我们应该如何选择合适的蛋白标签呢？以下是一些常用的蛋白标签及其应用场景： 6xHis标签 𐟐Ÿ 6xHis标签可以插入目的蛋白的C末端或N末端，主要用于重组蛋白的分离纯化。这种标签在非离子型表面活性剂存在的条件下或变性条件下纯化时非常有用。常见的带有6XHis的载体有pET-28a(+)、pET-28b、pET-22b(+)、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pACYC-duet1等。 Flag标签蛋白 𐟚銆lag标签蛋白广泛应用于蛋白表达、纯化、鉴定、功能研究及其蛋白相互作用等领域。常见的带有Flag标签的载体有pESC-His、pFLAG-CMV2、pENTR4-FLAG等。 C-Myc标签 𐟦 C-Myc标签是一个含11个氨基酸的小标签，这11个氨基酸作为抗原表位表达在不同的蛋白质框架中仍可识别其相应抗体。C-Myc标签已成功应用在Western-blot杂交技术、免疫沉淀和流式细胞计量术中，可用于检测重组蛋白质在靶细胞中的表达。常见的载体有pCMV-MYC、pcDNA3.1(+)_myc-hisA、pCMV-RFP-C-Myc、pCMV-Myc等。 eGFP/eCFP/eYFP/mCherry标签 𐟌ˆ 这些标签分别是增强型绿色荧光蛋白、增强型黄绿色荧光蛋白、增强型黄绿色荧光蛋白和单体红色荧光蛋白，具有不同的激发波长发射波长，均由野生型荧光蛋白通过氨基酸突变和密码子优化而来。常见的带有eGFP的载体有pEGFP-N1、pEGFP-C1、pcDNA3.1-EGFP、pIRES-EGFP等。 SUMO标签 𐟌€ SUMO标签蛋白是一种小分子泛素样修饰蛋白，研究发现SUMO可以作为重组蛋白表达的融合标签和分子伴侣，不但可以进一步提高融合蛋白的表达量，且具有抗蛋白酶水解以及促进靶蛋白正确折叠，提高重组蛋白可溶性等功能。SUMO标签也常用于和其他标签一起应用，作为特异酶切水解位点。常见的带有SUMO标签的载体有pET-SUMO、pET28a-SUMO等。在选择蛋白标签时，应根据实验的具体目的和需求来决定。希望这些信息能帮助你在质粒构建时做出最佳选择！

𐟧젨𔨧𒒧š„多样世界 𐟌 探索质粒的奇妙世界，我们发现了许多不同类型的质粒载体。在原核表达领域，pET系列载体以其高效表达能力脱颖而出，特别适合大肠杆菌中的蛋白质生产。𐟧 pET28a、pET22b等都是这一领域的佼佼者。如果你需要更精细的控制，pBAD系列载体或许是你的不二之选。它们使用L-arabinose作为诱导剂，为低水平或可调控的表达提供了可能。𐟒ኊpUC系列载体则是一类通用质粒，虽然表达效率稍逊于pET系列，但它们在克隆和表达目标基因方面同样表现出色。对于那些追求高效表达的科研工作者，pGEX和pRSF系列载体提供了强大的支持。pGEX专门用于GST标签蛋白的表达和纯化，而pRSF则以其高效的T7启动子为特点。𐟚€ 当然，还有许多定制化的载体，满足你特定的表达需求。无论是包含特定结构域、标签还是启动子，这些载体都能为你提供个性化的解决方案。在真核表达领域，我们同样拥有丰富的选择。pCMV系列载体以其强大的启动子能力，在哺乳动物细胞中高效表达目标基因。𐟒ꊊ如果你对绿色荧光蛋白感兴趣，pEGFP系列载体将是你理想的选择。它们能轻松检测和追踪目标蛋白在真核细胞中的表达和定位。𐟒š pIRES系列载体则允许同一质粒上的多个基因以类似于多载体的方式进行表达，非常适合共表达或共转染的研究。此外，腺病毒载体、逆转录病毒载体以及酵母载体等，都为真核细胞的短期和长期表达提供了强大的支持。𐟌𑊊在这个质粒的多样世界中，总有一款适合你！无论你是科研工作者还是生物技术爱好者，这些质粒载体都将为你提供无尽的灵感和可能！𐟌Ÿ

专栏内容推荐

894 x 684 · png
pET-28a(+)载体_质粒图谱 - 优宝生物
素材来自:youbio.cn
912 x 890 · png
pET28a- TEV载体图谱质粒图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等基本信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com

996 x 849 · png
pET28a-DsRed2-北京华越洋生物
素材来自:huayueyang.com.cn
1064 x 890 · png
pET28a-sumo pET28aSUMO质粒图谱、载体图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com

927 x 901 · png
pET-28a-EGFP pET28a-EGFP质粒图谱、载体图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com
850 x 901 · jpeg
pET-28a质粒-北京庄盟国际生物基因科技有限公司
素材来自:zomanbio.com

920 x 886 · png
pET-28a-mCherry pET28a-mCherry质粒图谱、载体图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com
983 x 872 · png
pET28a-EYFP pET28aEYFP质粒图谱、载体图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com

597 x 612 · png
pET-28a(+)载体_质粒图谱 - 优宝生物
素材来自:youbio.cn
894 x 733 · png
pET28a-其云生物
素材来自:qiyunbio.com

900 x 761 · png
pET28a-ULP/SUMO-北京华越洋生物
素材来自:huayueyang.com.cn
707 x 795 · png
pET28a-ORF10新冠病毒原核表达质粒-质粒载体-ATCC-DSM-CCUG-泰斯拓生物
素材来自:testobio.com

875 x 692 · png
pET-28a(+)-其云生物
素材来自:qiyunbio.com
673 x 681 · png
pET28a-EBFP_载体及菌株库_产品中心_奥诺基因-HonorGene-基因研究资源提供商
素材来自:honorgene.com

660 x 503 · jpeg
pET-28a-EGFP-C载体信息/pET-28a-EGFP-C质粒图谱/pET-28a-EGFP-C序列 » 爱科博生物
素材来自:axybio.com
602 x 604 · png
pET-28a-EGFP-N 载体品牌：LMAI Bio中国/美国/欧洲-盖德化工网
素材来自:china.guidechem.com

906 x 816 · jpeg
pET28a/Cas9-Cys载体图谱质粒图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等基本信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com
705 x 588 · png
pET28a-mCherry_载体及菌株库_产品中心_奥诺基因-HonorGene-基因研究资源提供商
素材来自:honorgene.com

690 x 719 · png
pET28a-SUMO(pET28aSUMO)价格_品牌:LMAI Bio-丁香通官网
素材来自:biomart.cn
521 x 557 · jpeg
pET-28a（+）大肠杆菌蛋白表达载体，大肠系列质粒_质粒-上海远慕生物科技有限公司
素材来自:chem17.com

936 x 892 · jpeg
pet28a载体图谱-千图网
素材来自:ecywang.com
812 x 804 · gif
pet28a载体图谱-千图网
素材来自:ecywang.com

1011 x 1026 · png
pet28a质粒图谱,_大山谷图库
素材来自:dashangu.com
638 x 615 · jpeg
pET28a(+)表达载体价格_品牌:赛尔瑞成-丁香通官网
素材来自:biomart.cn

899 x 785 · png
pET28a-sfGFP pET28asfGFP载体图谱质粒图谱、序列、价格、抗性、测序引物、大小等基本信息_生物风载体
素材来自:biofeng.com
899 x 735 · jpeg
pET28a SnoopTag-MBP
素材来自:yq.cnreagent.com

983 x 884 · png
AG真人百家乐(China)官方网站
素材来自:hedgehogbio.com
925 x 884 · png
pET28a-2019-nCoV-M 新冠病毒膜糖蛋白原核表达质粒-质粒载体-ATCC-DSM-CCUG-泰斯拓生物
素材来自:testobio.com

548 x 533 · jpeg
pET28a-EGFP载体质粒图谱、序列、说明书、价格_诱导
素材来自:sohu.com
621 x 644 · jpeg
pet-28a-gfp图谱,p28a质粒图,图_大山谷图库
素材来自:dashangu.com

902 x 729 · jpeg
pet28a载体图谱-千图网
素材来自:ecywang.com
973 x 878 · png
pET28a-mCherry-北京华越洋生物
素材来自:huayueyang.com.cn

713 x 439 · png
pET28a-SGN-北京华越洋生物
素材来自:huayueyang.com.cn
995 x 864 · png
pET28a-EGFR_其他_质粒载体_【官网】中国细胞系_稳转株_原代细胞_病毒包装_质粒购买_载体构建_ORF基因_cDNA基因,中国细胞 ...
素材来自:fenghbio.cn

980 x 775 · jpeg
pET28a-EYFP-北京华越洋生物
素材来自:huayueyang.com.cn

素材来自:查看更多內容

当前用户设备UA：Mozilla/5.0 AppleWebKit/537.36 (KHTML, like Gecko; compatible; ClaudeBot/1.0; +claudebot@anthropic.com)