ncbi最新视觉报道_ncbi pubmed(2024年12月全程跟踪)
载体构建攻略犰젨𝓦建全流程 目的基因的扩增 首先,从NCBI上找到目的基因的核苷酸序列,利用Snapgene设计引物。通常在序列的前后各选20-25bp作为上下游引物。先用普通MIX进行退火温度优化,然后使用高保真酶(如诺维赞的2X Phanta⮠Max Master Mix)进行50uL体系的扩增。若需要高浓度,可扩增两管。 连接 连接目的基因与载体可选择T4连接酶,需在目的基因两端设计酶切位点和保护碱基(注意这些位点不能出现在片段内,以免片段被内部切开)。也可选择无缝克隆方式,利用同源重组原理,在引物5'端加入载体的同源臂,引物顺序为同源臂+酶切位点+基因引物。我个人偏爱这种方式,省时方便。本次使用的是诺维赞的ClonExpress⮠II One Step Cloning Kit连接酶,9个片段一次性连接成功。20uL的连接体系在37℃作用30 min,取10 uL用于转化。 目的基因与载体的比例 本次使用的载体是PcDNA3.1(5500bp),基本50ng的载体就足够了。ClonExpress⮠II One Step Cloning Kit试剂盒推荐的载体和片段的摩尔比为1:2,例如片段500bp,浓度5ng/uL,载体5000bp,浓度25ng/uL。则片段摩尔数是载体的2倍,片段需要2㗵=10ng,即2uL。 转化 取10 uL连接产物转化DH5a。 阳性克隆的筛选 在1.5mL的EP管中加入800 uL的氨苄LB,用10uL的枪头把单个菌落全部占走,打入EP管中,震荡培养4h。一般选择8个克隆。4h后进行菌液PCR鉴定阳性克隆,选择2个送测序。 注意事项 移码问题:选择酶切位点时注意是否会引起目的基因的移码,可用Snapgene模拟。 感受态:购买的商品化感受态可一支当两用,否则太浓不好挑选。自制的感受态在使用前需设置阳性对照,排除感受态质量问题。 终止密码子和起始密码子:用于蛋白表达的目的基因需从ATG开始,以终止密码子结尾。 砦建小贴士 退火温度优化:对于高保真酶,退火温度至关重要,可通过梯度PCR找到最佳温度。 引物设计:选择合适的引物长度和位置,确保扩增效率和特异性。 连接效率:优化连接体系,确保目的基因与载体的高效连接。 筛选策略:通过多个克隆的筛选,提高阳性克隆的比例。 通过以上步骤,你可以顺利构建出含有目的基因的载体,为后续实验打下坚实基础。
终于搞定了Aspera插件的安装! 嘿,大家好!今天我要分享一下我终于搞定了Aspera插件的安装过程,真的是太开心了! 第一步:进入IBM官网 首先,打开IBM官网,找到你想要下载的软件。我点击了图1中的箭头,直接跳转到了图2。 第二步:下载Windows版本 在图2中,按下键盘上的下标键,找到“windows”版本,然后点击下载。下载完成后,你会看到图3。 第三步:安装软件 直接打开下载好的文件,按照安装流程一步步来,很快就安装好了软件。 第四步:下载浏览器扩展插件 接下来,回到图2的页面,找到“edge”字眼,下载对应的浏览器扩展插件。安装好之后,就可以继续下一步了。 第五步:开始上传数据 最后一步,打开NCBI的SRA上传原始数据页面,选择你要上传的文件,然后就开始上传吧!我这次上传了17-18mb/s,速度还是蛮快的! 希望我的分享能帮到你们,如果有任何问题,欢迎留言讨论哦!
Pubmed无法访问?原因竟是它! 最近发现Pubmed突然不能用了,真是让人头疼㣀无论是挂梯子还是直接访问,都显示无法连接到SOLR服务器。这到底是怎么回事呢? 经过一番搜索,发现并没有关于Pubmed要维修或停用的官方消息。NCBI的其他数据库都能正常访问,看来问题可能出在Pubmed本身的服务器上。 可能是为了进行维护或升级,服务器暂时不可用。大家可以耐心等待一下,相信很快就能恢复正常访问。 如果你也在使用Pubmed时遇到类似问题,不妨检查一下网络连接,或者稍后再试。希望这篇文章能帮到你们!
「十四行诗」「重返未来1999」「维尔汀」探索时间缝隙, 犹如十四行诗点燃梦境,维尔汀的每一步,都是时空的惊艳绝伦!有人准备好跟上这趟超维旅程了吗?时空旅人们,留言区见!.ncbi.gov.cn电竞赛事大围观的微博视频
如何用生物信息学鉴定木薯成分 觔物信息学领域,鉴定物种的亲缘关系和相似性是必备技能。 想要知道木薯和红薯之间的关系?这里有一个简单的方法: 下载数据:首先,从NCBI(美国国立生物技术信息中心)获取木薯和红薯的基因组序列。劦𘎦﹥饓进行测序,然后使用BLAST工具进行基因组比对。슊通过这种方式,你可以确定待测物品中是否含有木薯成分。𑊊但请注意,待测物必须能够提供基因组序列。如果你一直吃食堂,不知道粉条的制作流程,可能会影响基因组的提取。 如果有相关经验,欢迎分享你的提取方法!颀밟袀
SCI文献咋查?四网搞定! 学生们常常不知道如何查找SCI文献,许多学校也缺乏相关的课程或培训。以下是四个实用的SCI文献查找网站,快来看看吧! 1️⃣ Web of Science Web of Science是当前最全面的外文文献搜索引擎,覆盖了自然科学、工程技术、生物医学等多个领域。它收录了8850种SCI、3200种SSCI和1700种AHCI的核心学术期刊,是全球最大的综合性学术信息资源之一。 2️⃣ SCI-Hub SCI-Hub的口号是“to remove all barriers in the way of science”,旨在为科研人员提供免费文献。虽然由于版权问题,SCI-Hub的网址经常更换,但你可以通过搜索引擎查询最新的可用网址。 3️⃣ 谷歌学术镜像 谷歌学术是一个广为人知的学术搜索引擎,但由于某些问题,其官网需要科学上网才能访问。这里提供一个镜像网站,不仅包含谷歌学术,还有其他学术网站,方便大家浏览。 4️⃣ NCBI-PubMed 젥﹤物/医学领域的同学们,PubMed是一个提供生物医学论文搜寻和摘要的免费数据库。它的数据库庞大且操作简单,利用网络上的一些小插件,你还可以随时在网页上查找文献的影响因子。 以上网站都是查找SCI文献的宝贵资源,记得收藏哦!
「游戏悬赏令」【传说延续,泪点揭晓】《王国之泪》的每一瞬,都是玩家心海的涟漪。 Switch上的旷世冒险,等你揭开新篇章!𖢜覎⩙饮𖤻쯼准备好感动了吗?在游戏中寻找那份触动吧!.ncbiンbnSwitch小达人的微博视频
如何设置PubMed自动推送最新文献 砦PubMed账号 首先,点击“Login”按钮开始注册。如果你已经有NCBI的账号,可以直接点击“NCBI account”登录;如果没有,点击“Signup”进行注册。在注册页面,按照提示填写相关信息。注意,PubMed会默认使用你填写的邮箱地址来接收推送文章。 设定推送方法 在这里,我们使用自由词检索,虽然这种方法有时不太准确,但可以根据个人习惯来制定。点击“Advanced”按钮,可以设定多个布尔逻辑运算、截词检索、主题词检索、限制字段检索等方式。完成检索后,点击检索框下面的“Create alert”。 填写推送设置 Name of search:这是检索结果的名称,默认是检索内容,但你可以根据个人习惯更改。 Search terms:这是你的检索式,一般不需要更改。 Would you like E-mail updates of new search results:默认选项是“No, thanks”,一定要更改为“Yes, please”。 E-mail:当有新的文献时,PubMed会将内容推送到这个邮箱。邮箱一般默认为注册邮箱,但你也可以根据自己的习惯更改。 Schedule:表示推送频率,一般建议选择“daily”,每天推送。如果没有文献更新,PubMed当天不会推送相关内容。 Format:推送格式,一般选择“Summary”,只推送标题、杂志名、作者等内容。当然,也可以选择“Medline”格式,此时会推送摘要。 Number of items:这个比较关键,每次推送的条目数,一般建议设置为200(最大)。如果设置为5条,而当天PubMed有10条更新,则其只会推送前5条。因此建议设置为最大。 𞠤🝥혨设置完成后,点击“Save”按钮,就完成了推送的相关设置。之后,一旦有相关的更新,PubMed会在24小时内向订阅者的邮箱发送相关文献。如果想退订相关内容,可以直接点击邮件中的“Unsubscribe”按钮。当然,也可以通过PubMed中的MyNCBI进行退订。
WB分子量不对?7个原因帮你找出问题 蛋白翻译后修饰 如何判断蛋白是否被修饰?可以在 NCBI 或 Uniprot 上查询。例如,PD-L1经过N端糖基化修饰后,分子量会增加到45-55KDa。 ꠨白水解与剪切 蛋白在翻译后可能会被水解或剪切,这会影响其分子量。 堥源蛋白异构体 可以通过查询 Uniprot 来确定一个蛋白是否存在不同的 isoform。 多聚形式 如果检测到的分子量是理论分子量的倍数,可能是多聚形式。 蛋白样本降解 蛋白样本存储不当或提取操作不当可能导致分子量降低。记得加入蛋白酶抑制剂。 非特异性条带 一抗或二抗的浓度过高可能会导致非特异性条带。 通过以上几点,你可以找出WB分子量不对的原因,并进行相应的调整。
PubMed永久停更❓ 琵bMed是美国国立医学图书馆(NLM)的国家生物技术信息中心(NCBI)开发的生物医学文献免费检索系统,包含1966年以来的来源于70多个国家和地区的4000多种生物医学期刊的文献。PubMed包含的文献不局限于MEDLINE,还包括其他一些未被MEDLINE收录的文献。 PubMed蕞新的文献停留在11.7,也就是说截至目前,已经停更6天了!没错,11月7日,就是懂王赢得大选的日子。 ⚠️这次停更,是否和要禁止Pubmed有关?因为Pubmed数据库包罗万象,恰恰就包括海量的病例数据和基/因组数据(如GEO),完全符合限制条件。
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