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Transwell实验详解,测侵袭! 体外Transwells小室趋化侵袭实验——24孔趋化小室(孔径8um) 实验原理 在Transwell实验中,上室种植肿瘤细胞,下室加入FBS或特定趋化因子。肿瘤细胞会向营养成分高的下室移动。与肿瘤细胞迁移实验不同,此实验在上室侧铺上一层基质胶,模拟体内细胞外基质。细胞欲进入下室,需先分泌基质金属蛋白酶(MMPs)降解基质胶,才能通过聚碳酸酯膜。计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的侵袭能力。 实验方法大致流程 1️⃣ 将冻存的Matrigel胶在4℃冰箱中过夜解冻,使其液态化。 2️⃣ 用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液稀释Matrigel胶,按1:1的比例在冰水浴中混匀。 3️⃣ 将稀释后的Matrigel胶均匀铺在聚碳酸酯膜上,覆盖整个膜面,置入37℃恒温箱中静置30min-1h使其凝固形成基质屏障胶。 4️⃣ 将转染后收集的细胞或对照组细胞进行常规胰酶消化、PBS冲洗3遍。 5️⃣ 用不含10%胎牛血清的完全培养液重悬细胞,进行细胞计数并调整细胞密度至2.5㗱0^5个/mL。 6️⃣ 将形成基质屏障胶的膜用不含10%胎牛血清的RMPI1640培养液进行浸润水化。于上室加入处理后的细胞,24孔板小室一般加200。 7️⃣ 在下室内加入含有20%优质胎牛血清的RMPI1640培养液进行细胞侵袭诱导,每个组设3个平行复孔。 8️⃣ 将小室在37℃、5%的CO2恒温培养箱中培养24h后,倒弃上室中的细胞及液体,并用PBS冲洗2遍。 9️⃣ 将上室内的Matrigel基质屏障胶用棉签擦去,滤膜上层贴壁生长但未能穿过膜的细胞。将上室置于95%乙醇室温固定30min。 将固定后的膜经结晶紫染色10~15min后,蒸馏水冲洗终止染色。 1️⃣1️⃣ 显微镜下随机挑选5个低倍视野(200X)的细胞计数,以其穿膜细胞的平均数作为细胞侵袭能力的参数,计算平均值。 通过以上步骤,你可以评估肿瘤细胞的侵袭能力,进一步了解肿瘤细胞的生物学特性。
国产牛血清市场:谁才是真正的老大? 前几天,一个朋友问我,国产牛血清(包括国产血源和进口血源,仅看品牌注册地)的老大是不是依科赛?我告诉他,这个问题得看你从哪个角度来算。如果只看科研领域或者单纯胎牛血清,那依科赛确实是老大;但如果算年销售额,那情况就另当别论了。 国产牛血清的真实排名 其实,国产牛血清(包括胎牛、新生牛、小牛)最大的厂商是不愿意透露的L品牌。2022年,这家公司的销售额达到了惊人的N个小目标。依科赛虽然按总销售额只排在第7位,但科研口的头号交椅还是它的。以下是我从“路边社”获取的一些未经证实的消息和我的一点感受: 真实排名 2022年的数据表明,L品牌在国产牛血清市场上遥遥领先。依科赛虽然科研实力强大,但按总销售额排名却不是老大。其他更多排名情况请参考下表。 主要应用 슊从上面的表格可以看出,用于科研的牛血清用量其实非常小。今年特别火的类器官培养也不需要用到牛血清。真正的大应用是工业研发生产,尤其是疫苗生产。头部企业L品牌、四季青和兰州荣晔在疫苗生产市场都有自己的稳固用户群体。 主要客户 劊疫苗生产企业是一个特别封闭的系统,都有自己的圈子。A血清品牌商可能做下了X客户,但很难做下Y客户。国内从事人用疫苗和动物疫苗生产的主要企业如下表: 其实也可以看出来,生产人用疫苗的很难进入生产动物疫苗的圈子,反之亦然。 一点感受 튊整个5月份,我对国产牛血清厂家都有一个强烈的感受,那就是他们都特别注重“上层关系”。康源生物的周年庆请到了明光市带“长”的领导和很多疫苗工艺专家。而依科赛更猛,乌拉圭ARTICA新厂落成时,中国驻乌拉圭大使王刚、乌外长布斯蒂略、牧农渔业部长马托斯等多位嘉宾都莅临现场。 有的朋友看到血清的销售额就蠢蠢欲动,想进军这个行业,但血清是一个资源产品,既指生产原料是一个资源,也指客户关系是一个资源。 总之,国产牛血清市场看似热闹,但其实背后有着复杂的竞争和合作关系。无论你是想进入这个行业还是已经在这个行业里摸爬滚打,都需要对市场有深入的了解和敏锐的洞察力。
牛血 䧥没有听说过牛血?作为一个美食爱好者,我可是一点都不陌生哦!今天就来聊聊牛血的营养价值、市场现状以及它的其他用途。 頧血的营养价值 牛血可是营养满满的食材!它富含蛋白质、铁元素、锌元素和维生素B族。蛋白质可是我们身体细胞和组织的重要组成部分,帮助维持身体的正常生理功能。铁元素对血红蛋白的形成非常重要,有助于预防缺铁性贫血。锌元素在免疫系统、生长发育和生殖健康方面发挥重要作用。维生素B族中的B12对神经系统和红细胞的生成也有帮助。 牛血在市场上的现状 虽然牛血营养丰富,但在市场上却不太容易买到。主要原因是牛血味道不佳,难以入耳,而且烹饪难度大。宰牛时接血也不容易控制,这增加了收集的难度。不过,有些地方的市场上还是有牛血卖,例如涮火锅时用的牛血可以去除异味,搭配其他食材一起食用。 ꠧ血的其他用途 除了用于烹饪和直接食用外,牛血还有其他用途哦!牛血可以用作细胞培养中的血清替代物。胎牛血清(FBS)是细胞培养中的重要营养来源,含有特殊的生长发育因子,但胚胎发育完全后这些因子会消失。为了避免道德争议和实验动物的痛苦,科学家们正在研究更合适的替代物。另外,公牛血还被用于制作红酒澄清剂,虽然现代化生产已经不再使用这种传统方法,但这也算是一种有趣的尝试吧! 其实,牛血虽然味道不太好闻,但它的营养价值和用途真的是不容忽视的。如果你有其他关于牛血的问题或者想了解更多,欢迎在评论区和我互动哦!一起交流美食和其他有趣的话题吧!
细胞培养基大揭秘:三种基础培养基详解! 炙胞培养环境中的核心成分,它为细胞生长提供必需的营养物质、生长因子和激素,并维持适宜的 pH 值和渗透压。今天我们来探索三种基本培养基:基础培养基、减血清培养基和无血清培养基。 🥟培养基 基础培养基包含细胞生长所需的多种营养成分,如氨基酸、维生素、无机盐和碳水化合物。大多数细胞系在基础培养基中能够良好生长,但通常需要添加血清。例如,DMEM(Dulbecco's Modified Eagle Medium)是一种常见的基础培养基,适用于多种哺乳动物细胞的培养。 减血清培养基 减血清培养基在基础培养基的基础上减少了血清的含量。Opti-MEM™ I 减血清培养基是一种改良的最低必需培养基 (MEM),能使胎牛血清的添加量减少至少 50%,而不会影响细胞的生长速率或形态。这种培养基常与阳离子脂质体转染试剂(如 Lipofectamine™ 试剂)配套使用,以提高转染效率。 无血清培养基 无血清培养基完全不含有动物血清。它通过使用适当的营养和激素配方来替代血清,避免了使用动物血清时可能出现的问题。无血清培养基 (SFM) 在细胞培养中具有独特的优势,适用于那些对血清成分敏感或需要更严格控制实验条件的细胞类型。 选择哪种培养基取决于细胞类型、实验目的和成本等因素。这三种基本培养基在细胞培养中各有优势,了解它们的特点可以帮助你做出最佳选择。
动物血清大揭秘:你知道这些血清的秘密吗? 你知道吗?动物血清在科学研究和细胞培养中有着广泛的应用。常见的血清供体动物包括牛、马、猪、兔、羊和鸡等。让我们一起来看看这些动物血清的秘密吧! 牛血清 牛血清(Fetal Bovine Serum,FBS):这种血清富含细胞生长因子、激素、蛋白质和其他生物活性物质。由于成分复杂且来源不确定,FBS在细胞培养中被广泛使用,但也存在一定风险,如可能含有病原体和免疫原性。 小牛血清(Calf Serum):从小牛血液中提取的血清。与FBS相比,小牛血清中的生长因子和蛋白质含量较低,但相对稳定。它通常用于特定的细胞类型培养,如肌肉细胞和骨髓细胞。 新生牛血清(Newborn Calf Serum):这种血清中含有较高浓度的抗体,适用于特定的细胞类型培养,如淋巴细胞和淋巴母细胞。 大牛血清(Adult Bovine Serum):从成年牛的血液中提取的血清。大牛血清中的生长因子和蛋白质含量较低,通常用于特定细胞类型培养,如成纤维细胞。 马血清 쬤𘀧獩鬨ဦ𘅥릜大分子蛋白较多,适用于蛋白封闭。 第二种马血清为细胞培养级别,经过多次过滤,祛除了许多大分子蛋白,但保留了促细胞生长的活性因子,因而能用于细胞培养,例如神经细胞培养时,培养基中就需要添加马血清。优质的马血清来自健康马的血液,为封闭系统内无菌采血过滤而成,为淡黄色澄清液体,超低内毒素,无溶血,无异物,无细菌、真菌、支原体、噬菌体等。 猪血清 𗊧ꨡ清常用于猪肺炎支原体疫苗的生产。 山羊血清 山羊血清多用于封闭液,也有一些研究人员发现,优质的山羊血清可用于某些细胞的培养。 兔血清 𐊥 血清通常从六个月或更小的动物身上收集,可用于与 BSA 结合用作免疫细胞化学和免疫组织化学中的封闭血清。 鸡血清 鸡血清是从屠宰供人类食用的健康鸡中收集的。有研究用于血清维生素 B12 的放射性同位素稀释测定。 这些动物血清在科学研究和细胞培养中发挥着重要作用,了解它们的性质和用途可以帮助我们更好地理解和应用它们。
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5-Fu实验:测细胞迁移 实验步骤: 配制5-氟尿嘧啶溶液 首先,精密称取10mg的5-氟尿嘧啶,用灭菌蒸馏水溶解,然后定容至100ml的容量瓶中。接着,精密移取1ml溶液,稀释至100ml,得到1ug/ml的5-氟尿嘧啶溶液。 制备单层细胞 将细胞密度为5~10㗱05个/mL的Hep G2细胞铺于24孔板(每孔500 ),加入含10%胎牛血清的RMPI.1640培养液,培养16~24小时,使其形成单层细胞。 划痕处理 以五氟尿嘧啶(5-Fu)为例,首先配制1 /的母液。取45 该母液用PBS稀释至1.1 mL,得到浓度为40 /ML的5-Fu溶液。 用10 移液枪枪头(或无菌牙签)在单层细胞上划出“一”字划痕,用PBS清洗3次。然后加入上述配好的5-Fu溶液,平行两个样本,孵育24小时后换成含10%胎牛血清的RMPI.1640培养液,再孵育24小时。 观察并拍照 吸去培养液,用PBS清洗3次后,在倒置荧光显微镜下观察并拍照。 젩过这个实验,你可以观察抗肿瘤药物5-氟尿嘧啶对细胞迁移的影响,了解药物对细胞生长的抑制作用。
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