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细胞培养基前沿信息_细胞培养基是什么(2024年11月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-11-28

细胞培养基

DAPI染色指南：从入门到精通 𐟌Š DAPI：DNA的荧光标记笔 DAPI，全称4',6-二脒基-2-苯基吲哚，是一种能够与DNA特定AT序列结合的荧光染料。它就像细胞核的染色剂，常用于检测细胞凋亡。DAPI通过粘附在DNA双螺旋的小沟区来染色，虽然它不能穿过活细胞的细胞膜，但能穿透那些已经扰乱的细胞膜，从而对细胞核进行染色。DAPI具有很高的光漂白抵抗力，适用于检测酵母线粒体DNA、叶绿体DNA、病毒DNA、microplasm DNA以及染色体DNA。DAPI-DNA复合物的激发和发射波长分别为360nm和460nm。 𐟓 溶解度和储藏 DAPI是一种黄色固体，易溶于水。建议将DAPI储存在-20Ⰳ的环境中，以保持其活性。 𐟧ꠤ𝿧”覭婪䊦𚶨磄API：用1mL的ddH2O将DAPI溶解，制成2.9mM的DAPI溶液（1mg DAPI：1mL H2O）。注意，DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解，需要先用水溶解。制备DAPI溶液：取适量DAPI水溶液加入PBS缓冲液中，制成10~50ⵍ的DAPI溶液。推荐使用以下PBS配制方法：8.00g NaCl、0.20g KCl、2.9g Na2HPO4ⷱ2H2O和0.2g KH2PO4溶解于1L纯水中。添加DAPI溶液：将1/10体积培养基的DAPI溶液加入细胞培养基中，或者用1/10浓度的DAPI缓冲液替代培养基使用。培养细胞：在37℃恒温条件下培养细胞约10~20分钟。洗涤细胞：用PBS或合适的缓冲液洗两次细胞。观察细胞：用带有360nm激发波长和460nm发射波长的滤光片的荧光显微镜观察细胞。 𐟌Ÿ 注意事项 DAPI不能直接用PBS等缓冲溶液溶解，需要先用水溶解。使用DAPI时，注意操作规范，避免污染。通过以上步骤，你就能轻松掌握DAPI的使用方法，为你的细胞研究提供有力的支持！

细胞培养基成分液质联用高分辨质谱快速检测法(四)「全能培养基」「培养基成分」「高分辨质谱测试」「氨基酸」「维生素」「培养基组分监控」「蛋白」「多肽」CREADY医药研发的微博视频

生成 iPSC 衍生的人类静脉内皮细胞，用于血管畸形建模和药物发现#ECGM内皮细胞培养基

赛贝培养基：干细胞新宠探索干细胞的奥秘，赛贝生物（Cellapy）带来了一款革命性的产品——MSCeasy人间充质干细胞培养基。这款培养基专为间充质干细胞（hMSC）设计，化学成分清晰，不含血清，无需铺底，为干细胞研究提供了全新的可能。 𐟌𑠩€‚用于多种来源的干细胞：无论是骨髓（BM-hMSC）、脂肪组织（AT-hMSC）还是脐带（UCM-hMSC），MSCeasy都能有效支持干细胞的原代分离和传代，同时保持其多向分化的潜能。 𐟒‰ 无需添加血清或血清替代物：使用MSCeasy，您可以省去繁琐的血清添加步骤，直接使用，方便快捷。 𐟔젦‰𙩗𔥷‚小，细胞倍增速度快：MSCeasy的批间差异小，这意味着无论您在哪个实验室，都能获得一致的实验结果。同时，细胞倍增速度快，大大缩短了实验周期。 𐟌Ÿ 无论是IPS细胞、细胞冻存液还是细胞培养基，MSCeasy都是您实验室中不可或缺的得力助手。让我们一起探索干细胞的无限可能，为医学研究和治疗提供更多可能。

细胞培养基常见问题解答（二） 9. 为什么有些培养基不含酚红？酚红在培养基中起到模拟固醇类激素（如雌激素）的作用。为了避免这些反应，特别是在培养哺乳类细胞时，使用不含酚红的培养基更为合适。此外，酚红会干扰流式细胞检测，因此有些研究人员在进行流式细胞检测时也会选择不加酚红的培养基。 10. 培养液渗透压如何影响细胞生长？渗透压是指细胞内外环境的分子浓度差异。当渗透压发生变化时，水分会通过渗透作用流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压会使水分从细胞中流出，导致细胞收缩，可能会破坏DNA和蛋白质，使细胞周期停滞甚至死亡；而低渗透压则会使水分流入细胞内，导致细胞肿胀破裂。 11. 培养液pH如何影响细胞生长？大多数细胞的适宜pH值为7.2-7.4，偏离这个范围会对细胞造成有害影响。不同细胞对pH值的耐受性不同，原代细胞培养对pH值变动较为敏感，而无限细胞系则耐受性较强。总体来说，细胞在酸性环境中比碱性环境中生长得更好，因此配制培养液时可以将pH值稍微调低一些。需要注意的是，液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，pH值会上升约0.2。 12. 干粉培养基中是否含有NaHCO3？所有的干粉培养基中都不含NaHCO3。在使用干粉培养基时，需要根据说明书或包装袋上的标注，在完全溶解后添加NaHCO3。 13. 酚红的作用是什么？酚红在培养基中作为pH值指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。 14. NaHCO3的作用是什么？ NaHCO3与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基pH值稳定。 15. 实验室培养箱CO2浓度一直为5%可以吗？不可以。不同的培养基要求添加NaHCO3的量不同，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持pH值稳定，必须用高浓度的CO2平衡，一般不低于8%；而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L，还有一些培养基要求添加更少，那么这些培养基就要求较低的浓度平衡，一般是5%。

霉菌形态与饲料检验：从基础到高级霉菌菌落的特征 𐟌🊩œ‰菌菌落通常较大，质地疏松，外观干燥且不透明，形状可能松散也可能紧密。菌落与培养基之间的连接紧密，不易挑取。菌落正面和反面的颜色、构造，以及边缘与中心的颜色、构造常不一致。霉菌的菌丝 𐟌𑊩œ‰菌的菌丝有营养菌丝和气生菌丝的分化。气生菌丝没有毛细管水，因此它们的菌落与细菌或酵母菌的不同，更接近放线菌。菌丝是构成霉菌营养体的基本单位，是一种管状的细丝，放在显微镜下观察，很像一根透明胶管，直径一般为3～10微米，比细菌和放线菌的细胞约粗几倍到几十倍。菌丝可伸长并产生分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。无隔膜菌丝和有隔膜菌丝 𐟌€ 根据菌丝中是否存在隔膜，可将霉菌菌丝分成两种类型：无隔膜菌丝和有隔膜菌丝。无隔膜菌丝中无隔膜，整团菌丝体就是一个单细胞，其中含有多个细胞核，这是低等真菌所具有的菌丝类型。有隔膜菌丝中有隔膜，被隔膜隔开的一段菌丝就是一个细胞，菌丝体由很多个细胞组成，每个细胞内有1个或多个细胞核。在隔膜上有1至多个小孔，使细胞之间的细胞质和营养物质可以相互沟通，这是高等真菌所具有的菌丝类型。菌丝变态 𐟦 为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育的需要，许多霉菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态和组织，这种特化的形态称为菌丝变态。生长在固体培养基上的霉菌菌丝 𐟌𑊧”Ÿ长在固体培养基上的霉菌菌丝可分为三部分：营养菌丝：深入培养基内，吸收营养物质的菌丝。气生菌丝：营养菌丝向空中生长的菌丝。繁殖菌丝：部分气生菌丝发育到一定阶段，分化为繁殖菌丝，产生孢子。吸器和假根 𐟌🊥𘥙诼š由专性寄生霉菌如锈菌、霜霉菌和白粉菌等产生的菌丝变态，它们是从菌丝上产生出来的旁枝，侵入细胞内分化成根状、指状、球状和佛手状等，用以吸收寄主细胞内的养料。假根：根霉属霉菌的菌丝与营养基质接触处分化出的根状结构，有固着和吸收养料的功能。菌网和菌环 𐟌€ 某些捕食性霉菌的菌丝变态成环状或网状，用于捕捉其它小生物如线虫、草履虫等。菌核 𐟌𐊥䧩‡菌丝集聚成的紧密组织，是一种休眠体，可抵抗不良的环境条件。其外层组织坚硬，颜色较深；内层疏松，大多呈白色。如药用的茯苓、麦角都是菌核。子实体 𐟍„ 由大量气生菌丝体特化而成，子实体是指在里面或上面可产生孢子的、有一定形状的任何构造。例如有三类能产有性孢子的结构复杂的子实体，分别称为闭囊壳、子囊壳和子囊盘。

如何快速解决实验室支原体和噬菌体污染细胞培养的基本条件 𐟌𑊥ˆ适的细胞培养基培养基是细胞在体外生存和生长的关键。实验室常用的有DMEM、1640、IMDM和L15等。不同种类的细胞需要不同的培养基，比如贴壁细胞多用DMEM，悬浮细胞则多用1640。血清的品质合成培养基只能维持细胞生存，要想细胞生长和繁殖，需要补充优质血清。血清含有多种生长因子和营养成分，是培养基中最重要的成分之一。无菌无毒的细胞培养环境无菌无毒的环境是保证细胞生存的首要条件。细胞在体外培养时失去了抵抗能力，一旦被污染就会死亡。因此，保持无菌无毒的环境是体外培养细胞的基本条件。恒定的细胞生长温度细胞增殖和生长需要合适的温度，通常在37℃左右。合适的气体环境细胞需要合适的气体环境，主要有氧气（O₂）和二氧化碳（CO₂）。氧气提供能量，二氧化碳则是细胞代谢物，也是细胞需要的成分，主要用于维持培养基的pH。支原体污染的解决方案 𐟦 疑似支原体污染可以通过检测来确认是否被支原体污染。没有支原体污染如果检测没有发现支原体污染，可以使用支原体预防试剂，并做好环境和实验用具的消毒工作。确诊支原体污染如果检测确为支原体污染，可以使用支原体去除试剂进行挽救。如果无法挽救，只能重新复苏一管或者引进新的细胞。如果能够挽救回来，后续实验中要定期使用支原体预防试剂，避免再次污染。生物污染的处理当细胞培养过程中出现生物污染时，可以使用杀孢子剂对环境及实验器具表面进行灭菌处理，包括空间的终末消毒处理。诺福系列杀孢子剂是目前实验室清除污染常用的高效生物污染清除产品，配合相关的比林科汉KV-3000及相关配件，可以快速完成实验室的生物污染清除，包括超净工作台、生物安全柜及培养器具等。通过这些措施，可以有效解决实验室的支原体和噬菌体污染问题，保证细胞培养的顺利进行。

动物细胞培养全攻略：从基础到实践 𐟌𑠥Š觉駻†胞培养的基础步骤获取材料：从动物胚胎或幼龄动物的器官、组织中获取材料。剪碎处理：将材料剪碎，并用胰蛋白酶（或胶原蛋白酶）处理，形成单个细胞。培养基配制：将处理后的细胞移入培养基中，配成一定浓度的细胞悬浮液。细胞贴壁：悬浮液中的细胞会贴附在培养器皿壁上，形成细胞贴壁。接触抑制：当贴壁细胞分裂生长到互相接触时，细胞会停止分裂增殖。传代培养：将出现接触抑制的细胞重新用胰蛋白酶处理，再配成新的细胞悬浮液。 𐟔젥Š觉駻†胞培养所需的器皿培养器皿：分为玻璃和塑料材质。玻璃材质易于清洗和重复使用，而塑料材质则价格便宜且一次性使用。常见的培养器皿有三种：培养瓶：用于培养及繁殖细胞，置于95%空气与5%CO2混合气体的培养箱中进行培养。培养皿：用于装取、分离、处理组织，以及进行细胞毒性、单细胞分离、同位素掺入实验。多孔培养板：用于各种检测实验，如细胞克隆及细胞毒性实验。不同颜色的多孔培养板有不同的用途。操作器皿：用于实验室中的操作，包括贮液瓶、吸管和加样器。贮液瓶：用于存放或配制培养用液体，如培养液、血清及试剂等。吸管：分为刻度吸管和无刻度吸管，前者用于吸取、转移液体，后者用于吸取、转移液体、吹打、混匀及传代细胞。移液器：又称加样器，用于吸取、移动液体或滴加样本。最好的是微量加样器，吸量准确、方便，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性好。其他用品：包括离心管（收集细胞）、试管（放置试剂）、玻璃容器（存放吸管）、贮槽（存放小件培养物品）、冻存管（冻存细胞），各种注射器、烧杯、量筒、漏斗、酒精灯等。 𐟧ꠥŠ觉駻†胞培养的实践应用原代培养：从机体取出后立即进行的细胞、组织培养。传代培养：当细胞从动植物中生长迁移出来，形成生长晕并增大后，将其分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。通过这些步骤和器皿的使用，可以进行有效的动物细胞培养，为科研和实验提供可靠的细胞来源。

克隆形成实验：步骤与注意事项详解克隆形成实验是一种研究细胞增殖潜力的有效方法。通过在体外培养环境下，使单个细胞经过连续分裂繁殖至少6代，形成的细胞集群被称为克隆或集落。每个克隆的尺寸通常在0.3-1.0mm之间，含有50个以上的细胞。通过计算克隆形成率，能够对单个细胞的增殖潜力进行量化分析。 𐟔 用途：评估细胞增殖能力：克隆形成实验可以帮助研究人员评估细胞的增殖潜力。通过观察和计数形成的独立克隆，可以了解细胞在体外环境中的增殖速率和能力。研究细胞群体依赖性：克隆形成实验有助于了解细胞的群体依赖性，即细胞是否需要相互合作形成克隆。这对于理解细胞群体内的相互作用和细胞信号传导至关重要。筛选药物和治疗方案：克隆形成实验可用于评估药物对细胞增殖的影响。通过在实验前后比较克隆形成率，研究人员可以评估潜在药物或治疗方案的疗效。 𐟓ˆ 常用的实验手段：平板克隆形成实验：通过将细胞培养于培养基中，主要适用于贴壁生长的细胞，以评估细胞的克隆形成能力。软琼脂克隆形成实验：通过将细胞悬浮于含琼脂糖的培养基中，主要用于评估贴壁和悬浮的肿瘤细胞或转化细胞系的克隆形成潜能。 𐟓 平板克隆形成实验的步骤：从处于对数生长期的细胞开始，通过胰酶消化将细胞完全悬浮于全培养基中，并进行准确计数。在每个实验组中，控制细胞数量在400-1,000个细胞/孔的范围内（对于不同的细胞类型，需要进行预实验以确定最佳细胞数量），并接种于6孔板。持续培养至14天，或直到大多数单个克隆中的细胞数超过50个。在培养过程中，每隔3天更换培养基，并观察细胞状态。克隆形成完成后，使用1mL 4%多聚甲醛进行细胞固定，固定时间为15-30分钟。最后，用PBS洗涤。向每个孔中加入1mL结晶紫染液，染色时间控制在10-20分钟内。利用PBS进行多次细胞洗涤，进行拍照（分别对整个六孔板及每个孔进行单独拍照）。 ⚠️ 注意事项：本实验的成功关键在于细胞悬液的制备和适度的接种密度，务必确保细胞均匀分散，防止细胞团的形成，并谨慎确保接种密度不过于密集。通过这些步骤和注意事项，研究人员能够更准确地评估细胞的增殖潜力和药物对细胞的影响，从而推动科学研究的进展。

细胞培养那些事儿：心累到想哭的时刻细胞培养这事儿，真的是让人又爱又恨。你永远不知道下一秒会遇到什么问题：细胞不长了、不贴壁了、悬浮细胞成簇……简直是让人操碎了心。培养细胞不贴壁 𐟘“ 可能原因：胰蛋白酶消化过度：这个锅你得背，消化时间太长或者浓度太高都会让细胞受不了。支原体污染：这个可是个大问题，得赶紧分离培养物，检测支原体，清洁支架或者培养箱。如果发现支原体，果断丢弃培养物。培养基pH值过碱：NaHCO3分解了？用无菌醋酸溶液调整pH值，或者充入无菌CO2。细胞老化：细胞也有寿命，用新的保种细胞试试吧。接种细胞起始浓度太低或太高：调整一下浓度，找到最佳接种点。解决方法：缩短胰蛋白酶消化时间或降低浓度。分离培养物，检测支原体，清洁支架或培养箱。用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2。启用新的保种细胞。调节最佳接种细胞浓度。悬浮细胞成簇 𐟘– 可能原因：培养液中含钙、镁离子：用无钙镁平衡盐溶液洗涤细胞，轻巧吹吸。支原体污染：分离培养物，检测支原体。蛋白酶过度消化：这个得小心，蛋白酶过度会让细胞裂解。 DNA污染：用DNasel处理细胞。培养细胞生长缓慢 𐟘䊥糖𝥎Ÿ因：更换不同培养液或血清：比较新培养液与原培养液成分，比较新血清与旧血清支持细胞生长实验，让细胞逐渐适应新培养液。培养液中一些细胞生长必须成分如谷氨酰胺或生长因子耗尽或缺乏：换入新鲜配置培养液，或补加谷氨酰胺及生长因子。培养物中有少量细菌或真菌污染：用无抗生素培养液培养，如发现污染，丢弃培养物。试剂保存不当：血清需保存在-10到-20℃，培养液需在2-8℃避光保存。含血清完全培养液在2-8℃保存，需在1周内用完。接种细胞起始浓度太低：增加接种细胞起始浓度。细胞已老化：换用新的保种细胞。支原体污染：分离培养物，检测支原体，清洁支架和培养箱。如发现支原体污染，丢弃培养物。培养细胞生长不好 𐟘ž 可能原因：细胞本身的状态：传代次数多，细胞老化；接种量过低，细胞生长缓慢；传代时间过晚，细胞中毒；胰酶消化时间过长或过短；细胞的冻存与复苏：慢冻速溶。污染：支原体污染、霉菌污染。培养基或血清：更换血清或培养基之前未进行验证；选择的培养基是否合适；培养基配制是否合适；培养基配制是否准确无误。细胞培养真的是一场耐力赛，每一步都得小心翼翼。希望这些小贴士能帮到你，让你的实验顺利一点，心累少一点。加油！𐟒ꀀ

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