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吖啶橙染色前沿信息_吖啶橙染色原理(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-11-29

吖啶橙染色

如何测量微生物的生物膜和运动性？𐟤”𐟔슦Ž⧴⥾Ÿ物的生物膜和运动性是生物学研究的重要部分。虽然传统方法在文献中屡见不鲜，但科研人员总是寻求更精确、更高效的方法。𐟔 𐟌€ 生物膜的测量：将目标菌株在液体培养基中震荡培养。将细菌悬液定量转移至96孔板，继续培养。使用结晶紫染色剂进行染色。利用多模式读板仪测量微生物膜的强度。 𐟔젧”Ÿ物膜发育情况的评估：将细菌培养液接种于无菌载玻片上。先后用结晶紫和吖啶橙染色剂染色。在显微镜下检测生物膜的附着或生成程度。 𐟏ƒ‍♂️ 运动性的测量：将细菌培养液分别接种于不同琼脂含量的培养基上。培养24至48小时。分别在24和48小时时测量细菌群集运动的直径。这些方法提供了对微生物生物膜和运动性全面而精确的了解，但科研人员总是不断探索新的、更有效的方法。𐟌Ÿ𐟌𑀀

细胞凋亡检测的六大关键指标 𐟌€ 细胞凋亡，也被称为程序性细胞死亡或细胞自杀，是一个在基因控制下主动结束生命的过程。它与细胞坏死不同，因为凋亡不会将细胞内容物释放到周围环境中。细胞凋亡在生物界普遍存在，无论是正常生理状态还是病理状态，它在胚胎发育、组织稳定、机体防御和免疫反应中都发挥着重要作用。细胞凋亡的特征 𐟌 细胞凋亡过程中会出现多种标志性生理现象。随着凋亡程度的加深，这些现象也会有所不同。早凋时期：细胞膜结构改变，磷脂酰丝氨酸（PS）外翻。 Bcl-2等凋亡相关蛋白激活。胞内Caspase酶激活。线粒体膜电势崩溃。凋亡中期：亚G1期细胞群增加。晚凋时期：细胞核皱缩。 DNA片段化。细胞膜出芽，形成凋亡小体。细胞凋亡的常见检测方式 𐟔슦˜𞥾œ观察：通过光学显微镜或荧光显微镜观察细胞的形态学变化，如HE染色、吖啶橙染色、台盼蓝染色等，检测细胞凋亡。 Annexin V检测：利用Annexin V与外翻的PS结合，通过检测荧光基团的信号判定凋亡发生情况。检测激活的蛋白：在细胞膜失去对称性后，某些凋亡相关蛋白被激活，如Bcl-2、BAX、FASL/TNFSF6、TNF-퉯𜌩€š过ELISA等方法测定这些蛋白的激活状态。 Caspase酶活性检测：检测Caspase的活力来判定细胞凋亡情况。 JC-1检测：正常细胞线粒体膜电位较高，JC-1可聚集发出红色荧光；当细胞发生凋亡时，线粒体膜电位降低，JC-1无法聚集，便以绿色单体存在。通过检测线粒体膜电位变化来判断凋亡发生情况。 TUNEL检测：在细胞凋亡晚期，DNA片段化，断裂的DNA暴露出的3’-OH可以被末端脱氧核苷酸转移酶（TdT）催化，与荧光素标记的dUTP结合。通过TUNEL试剂盒检测DNA是否发生片段化，判定细胞凋亡。通过这些方法，我们可以更深入地了解细胞凋亡的过程和机制，为疾病研究和治疗提供有力支持。

台盼蓝vs AO/PI，谁更胜一筹？细胞计数和状态判断是生物学研究中的重要环节，其中台盼蓝染色法和AO/PI染色法是两种常用的方法。以下是这两种方法的详细介绍： 𐟔 台盼蓝染色法台盼蓝：蓝灰色粉末，溶于水，微溶于乙醇，不溶于其他有机溶剂。它是一种细胞活性染料，常用于检测细胞膜的完整性，从而判断细胞是否存活。实验原理：活细胞胞膜结构完整，能够排斥台盼蓝，使其无法进入胞内；而丧失活性或细胞膜不完整的细胞，胞膜通透性增加，可被台盼蓝染成蓝色。因此，细胞膜完整性丧失通常意味着细胞已经死亡。借助台盼蓝染色，可以快速区分活细胞和死细胞。染色浓度：一般成品试剂为0.4%的储存液，使用时需稀释10倍。优点：价格低廉。缺点：在PBMC分离过程中，红细胞可能残留，其大小与PBMC接近，台盼蓝法无法分辨红细胞与活的PBMC，可能导致浓度与活率差异；CHO细胞在培养过程中会产生细胞碎片和杂质，台盼蓝法无法准确区分。 𐟌ˆ AO/PI染色法 AO/PI：指吖啶橙（AO）和碘化丙啶（PI）的组合。吖啶橙（AO）：可以发出绿色荧光的DNA结合染料。碘化丙啶（PI）：可以发出红色荧光的DNA结合染料。染色原理：AO可以通过完整的细胞膜，嵌入所有细胞的细胞核，呈现绿色荧光；PI只能通过不完整的细胞膜，即死细胞的细胞膜，嵌入所有死细胞的细胞核，呈现红色荧光。当两种染料均存在于细胞核内时，在合适的AO、PI配比下，两种染料发生能量共振转移，死细胞在绿色通道下激发出红色荧光。染色浓度：一般都是买的成品试剂。优点：弥补了台盼蓝染色法的不足；由于AO和PI为DNA结合染料，可有效排除杂质以及红细胞的干扰，确保对样品进行准确计数。缺点：成品试剂的成本较台盼蓝高。通过以上介绍，可以看出台盼蓝染色法和AO/PI染色法各有优缺点，选择时需根据具体实验需求和条件来决定。

细胞凋亡咋测？看这篇！一、实验简介 𐟌🊥–啶橙（AO）和溴化乙锭（EB）是两种常用的荧光染色剂，它们在细胞凋亡检测中有着广泛的应用。吖啶橙能够透过完整的细胞膜，嵌入细胞核DNA，发出明亮的绿色荧光；而溴化乙锭则能透过受损的细胞膜，嵌入核DNA，发出橘红色荧光。通过这两种染料的组合使用，可以有效地区分活细胞、早期凋亡细胞、非凋亡的死亡细胞和晚期凋亡细胞。二、实验材料及试剂 𐟧ꊥ–啶橙溴化乙锭 PBS缓冲液三、实验步骤 𐟓 细胞爬片：在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片，接种细胞悬液。干预后，用95%乙醇固定15分钟，然后进行荧光染色。将100mg/L的吖啶橙和100mg/L的溴化乙锭各5（临用前混合）加入PBS中，轻轻吹打，30秒后用激光共聚焦显微镜观察照相。制作细胞悬液：取100 PBS稀释的细胞悬液，加入2的染色液（AO/EB各含100/ml），30秒后观察摄像。四、实验所需试剂清单 𐟓‹ 序号产品名货号 CAS 备注 1 PBS缓冲液 HC2031 2 吖啶橙 SS2148 10127-02-3 3 溴化乙锭 SS0623 1239-45-8 通过这些步骤，你可以轻松地检测细胞凋亡，了解不同细胞的状态。希望这篇指南能帮助你顺利完成实验！

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