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pcr程序前沿信息_pcr扩增3次过程图解简图(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-04

pcr程序

阿联酋航空回国攻略：从法兰克福到广州 1. 𐟓… 提前一天，我去了法兰克福市中心做了PCR测试，结果花了55欧元。其实其他城市有更便宜的，建议大家提前查一下。测试结果最快当天晚上就能出来，最晚第二天早上7:45。虽然理论上可以PS一个，但说实话，海关可能还是会检查，所以还是建议大家老老实实去测。 𐟧𓠧쬤𚌥䩯𜌦ˆ‘去了T2航站楼托运行李。只要不超重，德国海关一般不问行李箱里装的是什么。需要提供PCR检测结果，看了电子版就通过了。还需要一个黑码，可以通过微信小程序“海关旅客指尖服务”申请。黑码需要先有座位号才能申请，海关工作人员非要检查我的黑码才让我值机，僵持了两分钟，最后还是先给我选了座位。黑码不需要人工审核，申请立刻就有。 𐟛‚ 接下来是出海关，要先经过警察检查护照，给他们看了ausweis就通过了。 𐟧𓠧„𖥐Ž去E出口，海关检查随身行李，没什么问题。 ✈️ 登机飞去迪拜，提前两个半小时到登机口，没什么问题。座位还可以给手机充电，舒适度高。阿联酋航空的服务特别棒，吃的也很棒！空少特别帅，全程各种发酒水还可以选葡萄酒！ 𐟔„ 在迪拜转机回国。机场很大，各种免税店和餐厅都是土豪金色，非常豪华。记不清是这里大还是北京机场更大了。中东温度高，把羽绒服毛衣全脱掉还挺热。转机时又查了一遍PCR测试。 𐟛젦œ€后在广州白云机场T2航站楼落地，取出托运行李，没有再被检查，顺利出海关。三年没回来，国内安检还是很严格的，好几个关卡都要查证件，进出一下机场都要做防爆检查，大概是全世界最安全的国家了。 𐟓𑠦œ€重要的是要有国内手机号，不然国内机场WiFi都连不上，完全处于失联状态。希望大家都能顺利回家，新年快乐！

本科生PCR实验全攻略，注意事项全在这！ PCR，全称聚合酶链式反应，是实验室中一种常用的鉴定试验动物基因型的方法，也是本科生学习的第一个基础实验。虽然PCR实验看似简单，但稍有不慎就可能导致结果不显著。本文以小鼠基因型鉴定为例，详细介绍PCR实验的整体流程和一些注意事项。 1⃣️ DNA提取 a) 准备组织样本（如脚趾或尾巴）+ 400 NaOH（确保样本全部浸于NaOH中） b) 100℃水浴20min（每隔5min开盖透气，防止蒸汽使EP管盖弹开） c) 加入40 Tris-HCl，混匀 d) 12000rpm，4℃，2min离心，取上清液，可在4℃储存数周 2⃣️ PCR体系配制 a) 根据目标基因型找到对应的引物，计算PCR体系（体系量应略多于样本数量） 2X Taq 10 F 0.5 R 0.5 RNase-free H2O 7 b) 将所需试剂冰上解冻后，按照计算体系配于EP管中（EP管应做好标记） c) 在八联管盖上做好对应样本的标记，按照18ul体系+2ul DNA加入八联管，并设置一个WT和水样作为对照组 d) 根据目标基因型选择对应PCR程序，扩增DNA 3⃣️ 制备琼脂糖凝胶 a) 2% 琼脂糖凝胶（大胶）：1.4g琼脂糖+70ml TAE（或1.6g琼脂糖+80ml TAE），微波炉加热1min，振荡后再加热1min，待溶液中无结晶颗粒后，冷却至40-50℃ b) 按1:20000加入EB核酸染料，摇匀（一定要充分摇匀，否则染料会单独跑出一条条带，而基因型不明显） c) 倒入凝胶托盘，待20-30min凝固。注意不要产生气泡（可以用枪头拨到角落） 4⃣️ 电泳加入marker和样本各8（根据梳尺大小或绿酶活性酌情增加或减少），最大电流，恒压110V条件下跑胶20-30min，关注marker最前端条带，勿使样本跑出凝胶。 5⃣️ 扫膜（具体步骤略）通过以上步骤，你就能顺利完成PCR实验，鉴定出小鼠的基因型啦！𐟎‰

𐟧쐃R、QPCR、RT-PCR全攻略𐟌Ÿ 𐟔젦Ž⧴␃R、QPCR和RT-PCR的奇妙世界！从RNA反转录到cDNA的合成，再到DNA的扩增，每一步都充满了科学的魅力。 1️⃣ RNA抽提：采用TRlzol法，借助苯酚的强力裂解作用，轻松获取RNA。准备好试剂耗材和样品，经过一系列离心和沉淀步骤，就能得到纯净的RNA啦！𐟒ꊊ2️⃣ RNA质量检测：分光光度计和凝胶电泳法是你的得力助手，确保RNA的纯度和完整性。 3️⃣ 反转录：以RNA为模板，借助反转录酶的力量，合成与RNA互补的cDNA。选择合适的引物，让反转录更加高效。𐟒ኊ4️⃣ PCR程序：三步法让你轻松掌握DNA扩增的诀窍。高温变性、低温退火、延伸，每一步都精准控制，确保DNA的准确复制。𐟔劊𐟎‰ 现在，你已经掌握了PCR、QPCR、RT-PCR的全教程！快来试试吧，用科学的力量探索生命的奥秘！

新加坡回国攻略：轻松入境，愉快隔离时隔三年，终于有机会回国了！虽然一路上心情有些忐忑，但最终还是顺利入境。酒店盲盒也开得很顺利，住进了心仪的【天府国际健康服务中心】。隔离结束后，接下来的两个月，终于可以好好放松一下了！ ✈️⚠️𐟌 由于国内各城市的政策放开，回国变得方便了许多。以下是我从新加坡回国的经历分享。 𐟓‹𐟓𐟦 【关于核酸报告】目前只需要提供48小时的核酸报告，真的是省心又省钱。我是在Travel Swab做的PCR，65新/次，建议晚上8点之前去，8点后会加收15新。报告出结果很快，我预约的晚上9点，做完后回家凌晨1点就收到结果了，并没有加急哦。 𐟧찟Œ᯸𐟔슣€关于防疫健康码】在Mini程序“防疫健康码国际版”上提交核酸报告、护照、行程单等信息，很快就能收到绿码，这个会在办理登机牌时使用。 𐟒Œ𐟓… 【关于健康申报码】在Mini程序“海关旅客指尖服务”上填报出入境健康申明卡，建议截图保存，入境时使用。 𐟔㰟†—𐟛… 【入境流程】其实入境流程并不复杂，先是咽部核酸检测、填写入境卡、入关、取行李，然后等大巴去隔离酒店。 𐟛Œ𐟛𐟔‘ 【关于隔离酒店】我住的是【天府国际健康服务中心】，靠近天府国际机场，每晚费用498元房费+80元餐费，省内5晚也算便宜。房间宽敞明亮，干净整洁，略微有股甲醛味；设施齐全，吹风机、烧水壶、牙膏牙刷沐浴液都有提供；智能家电，可遥控窗帘、电动马桶、天猫精灵等；房间提供泡面、饼干和矿泉水，喝完可要求补，上限30瓶；一日三餐菜品不重样，但还比较准时，有严格配餐时间，一定要在时间段内领取，不然会收走；不能点外卖，但可以收取京东和顺丰快递；核酸检测自费，16元/次。 𐟌Ÿ𐟌Ÿ𐟌Ÿ 【关于机场购物】这次起飞前在iShopChangi上下了些单，机场出境时直接取货，省去了很多时间，品牌多还有优惠哦。

PCR实验全攻略：从引物设计到结果分析大家好！今天我们来聊聊分子克隆中的PCR实验。上一期我们已经介绍了引物设计的基础知识，这一期我们就来聊聊PCR的具体操作步骤。 PCR反应体系：你需要准备什么？𐟧ꊊ首先，PCR反应体系需要哪些东西呢？每个实验室用的酶可能都不一样，所以最好还是看看你实验室用的酶的说明书。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的加样体系：先加水：提前计算好每个样品的加水量，然后从大体积开始加，这样更准确。加酶：根据说明书上的推荐量加入。加引物：根据引物的浓度来决定。加模板：如果是基因组或菌体，变性时间3分钟；如果是质粒或片段，变性时间30秒。 PCR反应程序设置：如何设置？𐟓Š PCR反应程序的设置也是关键。以下是一个常见的2㗐hanta Flash Master Mix酶的反应程序：变性（Denaturation）在95Ⰳ下变性30秒，让DNA双链解链成单链。这个步骤不需要修改，但变性时间可以根据模板的不同进行调整。退火（Annealing）在55Ⰳ下退火30秒，让引物通过碱基互补配对与单链DNA结合。退火温度可以根据引物的设计进行调整。延伸（Extension）在72Ⰳ下延伸1分钟，聚合酶开始合成新的DNA链。这个步骤一般不需要修改。循环数设置根据需要回收的片段大小，一般30个循环左右就够了。如果不需要回收，可以设置35个循环。其他步骤除了基本的PCR步骤，PCR仪还可以进行一些固定温度的孵育，比如37Ⰳ恒温酶切等操作。小贴士𐟓 枪头只沾到一点点液体也没关系，一般都能成功PCR。但还是要确认枪头有没有吸到相应的小体积液体。不同的酶延伸速度和温度可能不一样，需要根据具体情况调整。希望这些信息对你有所帮助！如果你有任何问题或需要进一步的指导，欢迎随时留言讨论哦！

𐟌北京到伦敦的旅行准备指南（上）由于网课突然改为线下，我不得不返回英国继续上课。以下是我的一些心得分享： ✈️航班路线：从北京首都机场出发，先飞往上海浦东机场，再转机到荷兰阿姆斯特丹，最终抵达伦敦希思罗机场。 𐟔𔦉€需文件： PLF（英国入境表）：在落地伦敦前48小时内填写完毕，电子版和纸质版均可。一定要在出发前填好，因为中国海关值机时会查看。 PCR（核酸检测）：需要中英文版本。虽然英国现在承认了中国疫苗，入境前后不需要检测，但中转国可能仍需要。建议在起飞前48小时内完成，我是在北京世纪坛医院做的，非常方便。新冠疫苗证明：通过微信小程序“防疫健康码国际版”搜索，点击中间的出国人员入口，按照指示操作即可获得证明，图片和纸质版均可。护照和BRP：BRP卡一定要带好。如果是第一次去英国的朋友，只需提供护照即可。希望这些信息对大家有所帮助！

降落PCR：解决PCR扩增问题的新方法降落PCR，也被称为TouchDown PCR，是一种常见的PCR优化方法，操作简单且效果显著。MedPeer网站上有详细的解释和视频教程，供大家参考。 𐟌𘠐CR扩增原理在PCR扩增过程中，DNA双链解螺旋成单链后，引物在退火温度下特异性结合到DNA单链上，并在Taq酶的作用下进行延伸。退火温度越高，引物结合的特异性越好；退火温度越低，非特异性片段产生的可能性越高。 𐟌𘠩™落PCR的优势降落PCR通过设定一个较高的初始退火温度，并在每个循环中逐渐降低温度，使得在前期的高温下扩增出特异性片段，而在后期的低温下提高PCR的特异性和效率。 𐟌𘠐CR体系配置（以20ul体系为例） 2x Taq Mix：10ul 引物F/R：0.5ul（可在0.5上下调整）模板：2ul（如果PCR条带不够亮，可以增加一点模板）加水至：20ul 𐟌𘠐CR程序设置预变性：94℃ 3min 循环1：94℃ 30s 循环2：65℃ 30s 循环3：72℃ 30s（10个循环，每个循环退火温度降低1℃至55℃）循环4：94℃ 30s 循环5：55℃ 30s 循环6：72℃ 30s（20-25个循环）延伸：72℃ 10min 保存：4℃至取出跑胶 𐟌𘠥ꌦŠ€术和方案以前做实验前需要查找文献和毕业论文来确定实验方案，做的时候对原理和步骤依旧模糊不清。好在MedPeer网站上提供了各种实验的详细介绍和视频教程，如果早知道这些资源，就不用巴巴地求着师兄师姐和同学教了。

𐟔젒T-PCR实验全攻略：从原理到实践 𐟓š 目录 cDNA与反转录 RT-PCR原理与目的 RNA抽提与质量检测反转录过程 PCR程序与引物设计 PCR酶与体系 PCR产物检测实时荧光定量PCR（RT-qPCR）常见问题与注意事项 𐟔젣DNA与反转录 cDNA（互补DNA）：与RNA链互补的单链DNA。在适当引物的存在下，由DNA聚合酶即反转录酶合成的单链DNA就是cDNA。反转录（Reverse Transcription）：在反转录酶的作用下，以RNA为模板合成DNA的过程。合成的DNA链称为与RNA互补的DNA，即cDNA。 𐟔젒T-PCR原理与目的原理：RT-PCR全称反转录聚合酶链反应（Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction），将RNA的反转录和cDNA的聚合酶链式扩增（PCR）相结合的技术。目的：检测核酸的表达，主要是RNA的表达。DNA不需要反转录的过程，直接PCR检测即可。 𐟔젒NA抽提与质量检测 RNA抽提方法：TRIzol法。主要成分包括苯酚，用于裂解细胞和变性蛋白。 RNA质量检测：分光光度计测定、凝胶电泳法。 𐟔젥转录过程以RNA为模板合成cDNA的过程。在这个过程中，遗传信息的流动方向与转录时相反，因此称为“反转录”。需要反转录酶，合成的DNA称为与RNA互补的DNA（cDNA）。根据不同情况选择不同的反转录引物。 𐟔점CR程序与引物设计 PCR程序：三步法，包括变性、退火和延伸三个基本反应。引物设计：找到目的基因的CDS序列，用软件设计和评价引物，并使用BLAST进行引物特异性检测。引物长度为15-30bp，最常用的为23bp；引物Tm值介于62-73℃之间，上下游引物Tm最好相近以保证其能高效工作；3'-端的Tm值要低于5'端；引物GC含量约为40-60%；避免扩增模板的二级结构域；避免引物的二级结构；避免与靶DNA错配。 𐟔점CR酶与体系 PCR酶：可选择普通的Taq酶、可扩增长片段的Taq酶或高保真酶。 PCR体系：按所选的PCR酶说明书来配制。 𐟔점CR产物检测一般采用琼脂糖凝胶电泳，必要时也可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳。 𐟔젥—𖨍祅‰定量PCR（RT-qPCR）基本原理：在PCR体系中加入能够指示DNA片段扩增过程的荧光染料或荧光标记的特异性探针，通过对PCR过程中产生的荧光信号累积或荧光标记的特异性探针释放的荧光信号进行监测和记录，实时监测整个PCR进程，再结合软件对获得的荧光信号数据进行分析，计算待测样品中特定DNA片段的初始量。扩增过程：包括荧光背景信号阶段、荧光信号指数增加阶段和荧光信号平台期阶段。常见问题与注意事项：在进行RT-PCR实验时，需要注意实验条件的选择、引物的设计、RNA的质量控制以及实验操作的规范性等问题，以确保实验结果的准确性和可靠性。

康复者回国全攻略：简单4步搞定！终于轮到我来分享经验啦！以下是详细的回国步骤： 𐟓𑠥œ襤礽🩦†小程序上提交确诊信息。 𐟧젨𕷩㞥‰至少14天，三天内做两次PCR检测，间隔24小时，并在不同实验室进行。 𐟧젥›ž国前48小时和24小时，再次进行PCR检测，同样需要在不同实验室。 𐟒š 检测报告出来后，通过小程序申请绿码。 𐟖䠨𕷩㞥‰一天或在机场申请海关黑码。然后就可以顺利回国啦！相比以前，现在的过程简单多了！我早上7点的飞机，凌晨3点半到达机场。办理登机手续时，排队将近一小时。如果需要在机场购物，要抓紧时间。飞行4.5小时到达重庆，不提供餐食，但会上飞机时分发一包零食和水。没有毯子，怕冷的朋友记得自备外套。在飞机上我几乎全程睡觉了。下飞机后，按照顺序进行消杀。建议不要背大牌包包，因为消毒水会喷得很湿。过关时会问很多问题，包括来自哪里、去哪里、为什么回国等。然后进行喉咙核酸检测，感觉有点难受𐟘‚。接下来就是等行李，这里花了不少时间。拿到行李后，按照指示牌走，外面有大巴等着，工作人员会指引。大巴坐满后就会出发去酒店。我被分配到了圣名酒店，房间挺大，但设施较老旧。隔离餐不太好吃。建议大家自带一些必需品，比如： 𐟩𔠦‹–鞋 𐟧𔠦𔗦𜱧”襓 𐟛️ 可以丢掉的旧床单被单 𐟩𒠤𘀦졦€祆…裤 𐟧𜠦𔗨ᣦ𖲯𜈦ˆ–酒店的小肥皂） 𐟧𛠦𔗨„𘥷𞊊祝大家回国顺利！

悉尼回国攻略：双阴检测与绿码申请全指南临近出发前，我了解到机场的histopath双阴检测只对当天乘机的旅客开放。朋友的弟弟和我一样，都是12月26号早上的飞机✈️。他们24号早上去机场histopath检测点排队时，被告知只能等到26号当天开门后再来排队检测，这也证实了我的猜测。为了确保回国绿码的申请不耽误，我开始了寻找其他检测点的行动。考虑到平安夜和圣诞节的特殊情况，我选择了位于Burwood的社区检测点，地址在35 Meryla St。这个检测点现在只接受drive thru服务，幸好朋友开了车𐟚™，否则我可能白跑一趟𐟘‚。 𐟓排队接近尾声时，会有工作人员发放小册子，里面有二维码供你填写检测信息。需要填写的内容包括护照号码、航班日期以及检测类型等。 𐟔𙨮𐥾—带上护照，填写信息和后续工作人员检查时都会用到。 𐟔𙦈‘是在24号下午大约两点做的检测，25号两点多收到了两份阴性检测报告，分别是PCR和IgM。我是先收到IgM的结果，隔了大概二十分钟后又收到了PCR的结果。 𐟔𙦋🥈𐦊契Š后，记得截图保存，同时截图自己的【疫苗接种证明】、【护照信息页】、【签证信息页】和【机票行程单】，因为这些在申请绿码时都需要上传图片格式。 𐟔𙩀š过微信小程序搜索【防疫健康码国际版】，进入后正常填写资料即可。我大约10分钟就拿到了绿码𐟤—。希望这些信息对大家有所帮助，祝大家旅途愉快！

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