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常用细胞株前沿信息_细胞株种类(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-11-30

常用细胞株

悬浮细胞处理冷冻，一文搞定！在细胞培养过程中，许多实验人员可能会遇到各种疑难问题。以下是一些常见问题的解答，希望能帮助到你！悬浮性细胞的继代处理 𐟌€ 对于悬浮性细胞，只需持续加入新鲜培养基到原培养角瓶中，稀释细胞浓度即可。如果培养液太多，可以将培养角瓶口端稍微抬高，直到无法容纳为止。分瓶时，取出一部分含细胞的培养液到新的培养角瓶中，加入新鲜培养基稀释至适当浓度，重复此步骤即可。离心速率的选择 𐟔„ 回收动物细胞时，离心速率一般为300xg（约1,000rpm），离心时间为5-10分钟。过高的转速可能会导致细胞死亡。接种密度的确定 𐟌𑊦Ž姧密度可以根据细胞株的基本数据或稀释分盘的比例来确定。细胞数太少或稀释过多都会影响细胞的生长。冷冻培养基的成分 ❄️ 动物细胞冷冻保存时常用的冷冻培养基是含5-10%DMSO（二甲亚砜）和90-95%原来细胞生长用的新鲜培养基的混合物。注意，由于DMSO稀释时会放出大量热能，故不可将DMSO直接加入细胞液中，必须使用前先行配制完成。 DMSO的等级和过滤方式 𐟧ꊥ†𗥆𛤿存使用的DMSO必须为Tissue culture grade（如Sigma D2650），其本身即为无菌状况。第一次开瓶后应立即少量分装于无菌试管中，保存于4Ⰳ，避免反复冷冻解冻造成DMSO的裂解而释出有害物质，并可减少污染的机会。若要过滤DMSO，则须使用耐DMSO的Nylon材质滤膜。冷冻保存方法 ❄️ 方法一：冷冻管置于4℃30~60分钟，然后转移到-20℃30分钟，再放入-80℃16~18小时（或隔夜），最后放入液氮槽的vapor phase长期储存。方法二：使用已设定程序的可程序降温机，每分钟降1-3℃至-80℃以下，再放入液氮槽的vapor phase长期储存。注意，-20℃不可超过1小时，以防止冰晶过大，造成细胞大量死亡。也可以跳过此步骤直接放入-80℃冰箱中，但存活率会稍微降低。希望这些解答能帮助你更好地进行细胞培养实验！如果有任何疑问，欢迎随时交流探讨！

细胞培养基常见问题解答（三） 16. 丙酮酸钠在细胞培养中的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源。虽然细胞更倾向于使用葡萄糖作为碳源，但在没有葡萄糖的情况下，细胞也可以代谢丙酮酸钠。丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，保存于-20℃，培养基中的终浓度为1mM。 17. 谷氨酰胺在细胞培养中的作用是什么？几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有较高的需求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良甚至死亡。因此，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基在4℃冰箱储存两周以上时，应重新加入原来量的谷氨酰胺。 18. 可以使用与原先培养条件不同的培养基吗？不可以。每种细胞株都有其特定且已适应的细胞培养基。如果突然使用与原先不同的培养基，细胞大多无法立即适应，可能导致细胞无法存活。 19. 培养基中加入HEPES有什么好处？培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。 20. GlutaMAX-Ⅰ是什么？培养细胞如何利用GlutaMAX-Ⅰ？这个二肽有多稳定？ GlutaMAX-Ⅰ是一个L-谷氨酰胺的衍生物，其不稳定的a-氨基用L-丙氨酸来保护。一种肽酶逐渐裂解二肽，释放L-谷氨酰胺供利用。GlutaMAX-Ⅰ二肽非常稳定，即使在121℃灭菌20min，GlutaMAX-Ⅰ二肽溶液有最小的降解；而在相同条件下，L-谷氨酰胺几乎完全降解。L-谷氨酰胺在细胞培养时是重要的，但其在溶液中不稳定，经过一段时间后会降解，确切的降解率一直没有最终确定。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。因此GlutaMAX-Ⅰ是细胞培养中谷氨酰胺的替代品。

细胞培养常见误区及解决方法详解在细胞培养过程中，许多实验室新手常常会遇到各种问题。以下是一些常见的误区及其解决方法，帮助你更好地掌握细胞培养技巧。 𐟌€ 误区一：培养基选择随意选择培养基时，建议遵循以下步骤：首选：使用建立该细胞株时所用的培养基。参考：查阅相关文献。尝试：使用实验室常用的培养基。按需：根据细胞株的特点和实验需求选择。最客观：尝试多种培养基，根据实际效果选择，但这种方法较为繁琐。 𐟒Š 误区二：长期使用抗生素对抗污染不应常规在细胞培养中使用抗生素。连续使用抗生素会促进抗生素耐药性细胞株的产生，导致轻度污染持续存在，一旦停止使用抗生素，这种轻度污染最终将发展成大规模污染。此外，连续使用抗生素还会掩盖支原体感染及其他隐性污染，有些抗生素会与细胞发生交叉反应，干扰实验过程。 𐟍𖠨ﯥŒ𚤸‰：谷氨酰胺需要不断补充如果正确使用，一般不需要补加谷氨酰胺。以下是使用谷氨酰胺的一些注意事项： 4℃避光保存。分装，不要反复预热。含有谷氨酰胺的培养基，开封后应尽快用完。 ❄️ 误区四：培养基误存于-20℃，溶解后继续使用在-20℃下，培养基中的盐容易析出，再次融化后，有些盐可能无法重新溶解，从而导致培养基营养成分和渗透压改变，培养细胞时容易使细胞破裂而死亡。建议丢弃该培养基，重新购买新的培养基用于细胞培养。 𐟧𔠨ﯥŒ𚤺”：常见细胞系无需检测血清批次，可以直接切换血清来源于动物，组成成分有1000种左右，每个批号的组分和组分含量都是不确定的，批间差异是可能存在的。如果某一个批次血清使用效果较好，记住批号，订货时给予说明。如果需要换不同批号的血清，提前查询COA文件，寻找测试结果接近的批次。先订购一瓶试用，试用成功之后再大量订购该批号血清。通过避免这些误区，你可以更好地掌握细胞培养技术，提高实验成功率。

「金善禹超话」「金善禹蓝瞳」[微风][微风]「‍每日一善」种植方法是指通过特定的技术和步骤，将植物种子或幼苗植入土壤或其他介质中，以便植物能够生长和发育。不同的植物可能需要不同的种植方法。以下是一些常见的种植方法：种子直播：这是一种最常见的种植方法，适用于大多数农作物和花卉。将种子直接播入准备好的土壤中，然后覆盖一层薄土。这种方法简单易行，但可能会受到鸟类和其他动物的干扰[男孩儿][男孩儿][女孩儿][女孩儿] 育苗移栽：首先在苗床或育苗盘中培育幼苗，待幼苗长到一定大小后再移植到田间。这种方法可以提高成活率，但也更加耗时和费力3。扦插繁殖：适用于一些容易生根的植物，如月季、柳树等。选择健康的枝条，剪成适当长度的插穗，然后插入湿润的沙土或培养土中。保持适当的湿度和光照，直到插穗生根2。分株繁殖：适用于一些具有地下茎或匍匐茎的植物，如草莓、鸢尾等。将母株分成若干小株，然后分别种植。这种方法可以迅速增加植株数量，但需要有足够的空间和资源3。嫁接繁殖：将一种植物的枝条或芽接到另一种植物的茎上，使两者愈合并生长在一起。这种方法常用于果树和观赏植物的繁殖，可以结合不同品种的优点。组织培养：在无菌条件下，将植物的组织或细胞培养在人工配制的培养基上，使其生长和分化成完整植株。这种方法可以大量繁殖植物，但也需要较高的技术和设备支持2。种植方法的选择应根据植物的特性和生长环境的具体条件来确定。正确的种植方法不仅可以提高植物的成活率和生长速度，还可以有效地利用土地和资源。

𐟍Š柑橘树病虫害防治指南：炭疽病篇𐟌🊨👦œŸ，许多柑橘种植户面临柑橘叶子炭疽病的困扰。这种病害会导致叶子枯萎脱落，严重时甚至导致柑橘树死亡。以下从多个方面介绍柑橘炭疽病的防治方法及其症状。 𐟔 柑橘炭疽病症状柑橘炭疽病主要危害叶片，初期会在叶子上形成淡黄色的小斑点，随着病情发展，斑点会扩大并颜色加深，最终导致叶片脱落、枝条枯死甚至整株死亡。 𐟒Š 药物治疗药物治疗是防治柑橘炭疽病的重要手段，以下是几种常用的杀菌剂：代森锰锌：稀释成500倍液喷雾，可预防和治疗柑橘炭疽病。咪鲜胺：稀释成1000倍液喷雾，对柑橘炭疽病和黄斑病有治疗效果。甲基硫菌灵：稀释成700倍液喷雾，可预防和治疗柑橘炭疽病和黑斑病。多菌灵：稀释成500倍液喷雾，对柑橘炭疽病和黑斑病有治疗效果。使用时需严格按照稀释比例兑水，避免药害，并注意交替使用不同的药剂，以防止病菌产生抗药性。 𐟌𑠥†œ业防治农业防治也是预防柑橘炭疽病的重要部分，以下是几种常用的农业防治方法：加强栽培管理：合理施肥、浇水、修剪等，增强树势。例如使用果罗汉+硝钠萘乙酸可以促进柑橘细胞分裂，加速生长，提高抵抗力。清除病源：及时清理柑橘病叶、病枝和病果等，减少病菌传播。种植抗病品种：选择抗病性强的柑橘品种进行种植。生物防治：利用有益微生物及其代谢产物来控制病害。例如使用木霉菌等微生物菌剂来防治柑橘炭疽病。综合防治措施是控制柑橘炭疽病的关键，包括药物治疗和农业防治等方面。加强栽培管理、清除病源等细节处理至关重要。只有综合施策，才能有效保障柑橘树的正常生长和果实产量与质量。

如何一步步研究一个未知功能的基因？ 𐟎쬤𘀦�𜚧ᮥ ”究目标首先，你得找到一个在肿瘤中有研究潜力的基因A。最简单的方法就是查文献和数据库，看看这个基因在肿瘤中有没有差异表达。最好选那些没人报道过的基因，不过即使已经有研究，也别急着放弃，可以从不同的角度来分析它。接下来，通过改变这个基因在细胞内的表达，看看细胞表型会不会发生变化。常见的方法有敲减、过表达和突变，可以通过构建相应载体或使用基因编辑技术来实现。 𐟔 第二步：确认研究表型这一步，你需要确定基因A对肿瘤功能的影响，比如细胞增殖、凋亡、迁移侵袭、耐药性，还有更高难度的血管形成和能量代谢等。通常的做法是通过对基因A过表达或干扰后，检测基因表达改变对细胞表型的影响，来确定靶基因对肿瘤细胞表型是否产生了作用。为了验证细胞表型的改变，通常会做正反两种实验。比如验证细胞凋亡时，不仅需要做TUNEL实验，还需要补充一些rescue实验（在基因敲除细胞中重新导入基因A）。通常需要做2个以上的细胞株。 𐟒ᠧ쬤𘉦�𜚥ˆ†子作用机制/信号通路研究首先，找到与表型挂钩的信号通路分子，比如增殖相关的Akt、p53、MAPK等信号通路。通常的做法是寻找经典的信号通路与基因A之间的相互关系，并从中筛选出1-2个关键分子，检测其表达变化以及对信号通路的调节方式。如果没筛选到有变化的通路，可以采用比较烧钱的方法，比如基因/蛋白芯片来进行通路筛选。 𐟐�쬥››步：动物实验验证在肿瘤研究中，最常用的是裸鼠模型，即建立皮下移植瘤模型，再将基因导入动物体内，观察对体内肿瘤生长的影响，并进一步分析A基因相关的分子机制或信号通路，为肿瘤基因治疗提供潜在的靶点。 𐟓Š 第五步：临床样本的验证与临床意义最后一步是在大量临床样本中验证目标分子的表达。检测临床样本中功能基因A或功能基因A调控的下游分子的表达变化，分析其与肿瘤进展程度如肿瘤病理分期、复发、转移、预后等的相关性，确定基因A对临床研究的价值。如果第一步已经完成，这里可以省略。样本量越大越有意义，差异越显著价值越高；如果其表达水平能和肿瘤的病理进程相关，那么其临床意义就更凸显。按照这些步骤来研究一个未知功能的基因，你就能一步步揭开它的神秘面纱啦！希望这些建议能帮到你！

细胞衰老与长寿：从基础到策略细胞衰老是一个不可避免的生物过程，它涉及到多个方面的特征和分子机制。让我们一起来深入了解这个话题吧！细胞衰老的特征和分子机制 𐟧슧𛆨ƒž衰老的特征细胞衰老的特征包括：细胞形态学的改变：衰老细胞通常会变得扁平、增大，形状不规则。功能下降：衰老细胞的各种功能会逐渐减弱，比如细胞分裂能力、代谢活性和分泌功能。 DNA损伤的累积：衰老细胞中DNA损伤会明显增加，表现为染色体异常、DNA断裂和修复能力下降。细胞衰老的分子机制细胞衰老的分子机制主要有以下几个方面：端粒缩短：端粒是染色体末端的重复序列，每次细胞分裂时都会缩短。当端粒缩短到一定程度时，会触发细胞衰老的信号通路。端粒损伤响应：当端粒受到损伤或检测到端粒损失时，细胞会启动端粒损伤响应机制，促进细胞进入衰老状态。染色质不稳定性：衰老细胞中染色质结构和功能的稳定性下降，导致基因组不稳定性的增加，进而影响细胞的正常功能。细胞周期调控的紊乱：衰老细胞的细胞周期调控失调，通常表现为细胞周期延长、G1期延长和细胞周期检查点的功能异常。细胞衰老检测方法 𐟔슓A-Gal染色 SA-Gal染色法是一种常用的检测细胞衰老的方法。在细胞衰老过程中，galactosidase活性会显著增加，而SA-Gal染色法可以通过检测细胞内galactosidase活性来评估细胞是否处于衰老状态。这种方法相对简单，适用于多种细胞类型，是常用的衰老检测指标之一。 p16INK4a检测 p16INK4a是一个与细胞周期调控和细胞衰老密切相关的蛋白。在细胞衰老或受到DNA损伤时，p16INK4a的表达水平通常会上调。因此，检测细胞中p16INK4a蛋白的表达水平可以作为衰老检测的另一种指标。延长细胞寿命和减缓衰老的策略 𐟌🊧𛆨ƒž寿命延长的研究方法选择适合的细胞株：在研究细胞寿命延长时，选择适合的细胞株非常重要。一些细胞株具有较长的增殖潜能，如人类胚胎肺成纤维细胞（HEF），这些细胞在体外可以进行多次细胞分裂。选择适合的细胞株可以有效地研究寿命延长的效果。优化培养条件：细胞寿命与培养条件密切相关。优化培养条件可以提供细胞所需的营养和环境，延缓细胞衰老过程。例如，维持适宜的培养基、温度、pH值和氧气浓度等都可以对细胞寿命产生影响。减缓衰老相关基因的转染研究人员可以通过转染减缓衰老相关基因，如端粒酶逆转录酶（TERT）基因，来延长细胞的寿命。TERT是细胞中负责维持端粒长度的关键酶，其转染可以抑制端粒的缩短，从而延长细胞寿命。减缓衰老策略的研究方法抗氧化剂的应用：氧化应激是细胞衰老过程中的重要因素。抗氧化剂可以清除细胞内的活性氧，减轻氧化损伤，从而延缓细胞衰老。常用的抗氧化剂包括维生素C、维生素E、谷胱甘肽和硒等。 DNA修复机制的增强：细胞内的DNA损伤在细胞衰老中起着重要作用。研究人员可以通过增强细胞的DNA修复机制来减轻DNA损伤造成的影响，从而延长细胞寿命。例如，转染DNA修复酶相关基因，如PARP1，可以提高DNA损伤修复效率。端粒酶的激活：端粒酶在细胞衰老中发挥着关键的作用。研究表明，激活端粒酶可以延长细胞的端粒长度，减缓端粒缩短的速率，从而延长细胞寿命。针对端粒酶的激活研究可以是重要的减缓衰老策略之一。通过以上方法，研究人员可以探索延长细胞寿命和减缓衰老的策略，并进一步揭示细胞衰老的机制和调控途径，为后续科研提供重要的参考。

人参果叶发黑？速来，有解！ 𐟌🠧—‡状识别人参果叶霉病，听起来有点拗口，但它可是个大问题。这种病主要危害叶片，但也会波及茎和果实。通常从植株下部开始，逐渐向上发展。发病初期，叶片正面会出现不规则的淡黄色或浅绿色病斑。随着病情发展，叶片背面会出现灰白色、灰褐色甚至黑褐色的霉层。这是识别这个病的关键特征。病斑会逐渐连接成片，叶片卷曲、干枯，严重时整株植物都会枯死。嫩叶和果柄上的症状与叶片类似，常导致花瓣凋萎或幼果脱落。果实发病时，蒂部会出现近圆形的硬化凹陷斑。 𐟌᯸ 传播途径与发病条件叶霉病是一种真菌性病害。病菌可以在土壤中越冬，也可以附着在种子表面或潜伏在种皮内。当环境条件适宜时，病菌会产生分生孢子，从叶背的气孔侵入，在细胞间隙蔓延。病菌还能侵入花梗，直达子房，潜伏在种皮上进行为害。温室内空气流动或农事操作中的传带都会导致病害传播。适宜病菌生长的温度是20℃～25℃，相对湿度在80%以上或在水滴中。日光温室内气温22℃左右，空气相对湿度在90%以上，或夜间叶面有水膜时，病害极易发生和流行。如果温室通风不良、湿度过大、光照不足或植株密度过大，病情会加重。浇水后也容易引起病害大发生。 𐟌𑠩˜𒦲𛦖𙦳• 种子消毒：播种前用53℃温水浸种30分钟灭菌，晾干后催芽播种。加强栽培管理：起垄栽培，地膜覆盖，注意平衡施肥，避免过量施入氮肥。灌水时要小水勤浇，切忌大水漫灌。及时整枝、打杈，摘除植株下部的老叶、黄叶和病叶，做到通风透光。加强对温室温、湿度的管控，注意通风排湿。药剂防治：发病初期可喷施生物制剂如春雷霉素等。常用的化学药剂有苯醚甲环唑、氟硅唑或苯甲•丙环唑等，每隔7～10天喷一次，连续3～4次。希望这些信息能帮到你，让你的人参果叶子重新焕发生机！𐟍€

𐟐�鼠肝原位癌模型构建方法详解𐟔슰Ÿ” Hepal-6细胞诱发C57BL/6J小鼠原位肝癌模型 𐟓Œ 造模方法：将106个Hepal-6细胞注射到小鼠肝脏内，10天后使用高频超声观察肝脏接种部位并记录，随后处死小鼠，取肝组织进行病理学检查。 𐟌Ÿ 模型特点：Hepal-6细胞悬液直接注射到C57BL/6J小鼠肝内，无需体内适应过程。C57BL/6J小鼠抵抗力强，易于饲养，不需要特殊环境，操作简便，建模周期短，成功率高达100%。 𐟔 采用HepG2细胞株建立裸鼠肝癌模型 𐟓Œ 造模方法：将1.2㗱06个HepG2细胞皮下注射，14天后处死小鼠，测定瘤体直径、重量及血清AFP浓度并进行病理学观察。 𐟌Ÿ 模型特点：省略了癌细胞体内外交替培养的复杂过程，周期短，成功率100%。 𐟔 二乙基亚硝胺（DEN）诱发大鼠肝癌模型 𐟓Œ 造模方法：用0.25% DEN水溶液按10mg/kg体重灌胃每周一次，其余时间自由饮用0.025% DEN水溶液。4周后停饮含DEN水，改饮灭菌自来水4周。18周末诱癌成功率达100%。 𐟌Ÿ 模型特点：采用低浓度DEN通过自然饮水诱发的大鼠肝癌接近自然过程，单一致癌剂使用，避免其他致癌因子影响，便于观察和分析病变。 𐟔 黄曲霉素B1（AFB1）诱发大鼠肝癌模型 𐟓Œ 造模方法：将AFB1添加到饲料中定量食用，用含AFB1 4～5饲料连续饲养大鼠6周，90天左右诱癌率达100%。 𐟌Ÿ 模型特点：投药剂量小，给药时间短，癌灶形成较早；癌前病变的肝细胞增生以透明细胞灶多见，伴发肝硬化程度较DEN诱发的肝硬化程度轻，形成时间较晚。此方法与人体肿瘤发生病因学较为近似，常用于肿瘤特点的研究。

檀香精油：宁静致远的神圣之香 𐟌🊦ꀩ景𜌨🙧獥䨀的树木，从印度到中国，一直被人们视为神圣的象征。在东方的佛教庆典中，檀香是不可或缺的物品，它代表了专注的意念和至诚至圣的愿望。在宗教领域，檀香被誉为“神圣之树”；在风水学中，它是“招财之树”；在历史上，它象征着权力和地位，被称为“皇室之树”；在现代市场经济中，人们称它为“黄金之树”。檀香的成长非常缓慢，一株弱小的植物需要30年的时间才能出香。它的芳香是经过时间的沉淀而形成的。极品檀香精油则是用60年以上的檀香木芯蒸馏萃取得到的，蒸馏过程至少需要超过72小时。我们常用的檀香精油主要来自印度和夏威夷。通常说的檀香精油产自印度，而夏威夷檀香木萃取的精油则被称为夏威夷檀香精油。印度檀香产量稀少，已被列入国家保护树种，因此非常珍贵，常常断货。夏威夷岛面积有限，使得夏威夷檀香也变得可遇不可求。自古以来，檀香精油的抗菌作用被用于调理各种生殖尿道系统问题，如膀胱炎和尿路感染。檀香精油中富含的檀香醇是其独有的珍贵成分。除了泌尿道感染，它对经期骨盆充血疼痛也有作用，并能处理肾炎问题。檀香精油还能促进细胞再生，改善神经系统问题（如老年痴呆症），有助于修复软骨组织，舒缓腰痛和坐骨神经痛。它还是优良的肺部杀菌剂和镇静剂，适合用于持续性干咳、刺激性过敏性干咳和喉咙疼痛。对于慢性支气管炎患者来说，它是最佳的精油之一。最佳的使用方法是香薰嗅吸的同时在胸部和喉咙涂抹，这样“里应外合”，效果最佳。檀香的知名度高且普及全世界，可能是因为它是著名的催情壮阳剂。它能刺激生殖系统，改善性冷感和性能力低下的问题。檀香精油不仅是一种香氛，更是一种心灵的慰藉。它的香气让人心旷神怡，仿佛置身于宁静致远的境界。