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原代细胞培养权威发布_原代细胞培养的概念(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-30

原代细胞培养

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细胞培养基常见问题解答（二） 9. 为什么有些培养基不含酚红？酚红在培养基中起到模拟固醇类激素（如雌激素）的作用。为了避免这些反应，特别是在培养哺乳类细胞时，使用不含酚红的培养基更为合适。此外，酚红会干扰流式细胞检测，因此有些研究人员在进行流式细胞检测时也会选择不加酚红的培养基。 10. 培养液渗透压如何影响细胞生长？渗透压是指细胞内外环境的分子浓度差异。当渗透压发生变化时，水分会通过渗透作用流入或流出细胞，从而改变细胞的内环境。高渗透压会使水分从细胞中流出，导致细胞收缩，可能会破坏DNA和蛋白质，使细胞周期停滞甚至死亡；而低渗透压则会使水分流入细胞内，导致细胞肿胀破裂。 11. 培养液pH如何影响细胞生长？大多数细胞的适宜pH值为7.2-7.4，偏离这个范围会对细胞造成有害影响。不同细胞对pH值的耐受性不同，原代细胞培养对pH值变动较为敏感，而无限细胞系则耐受性较强。总体来说，细胞在酸性环境中比碱性环境中生长得更好，因此配制培养液时可以将pH值稍微调低一些。需要注意的是，液体在经过0.1um或0.2um滤膜过滤时，pH值会上升约0.2。 12. 干粉培养基中是否含有NaHCO3？所有的干粉培养基中都不含NaHCO3。在使用干粉培养基时，需要根据说明书或包装袋上的标注，在完全溶解后添加NaHCO3。 13. 酚红的作用是什么？酚红在培养基中作为pH值指示剂，中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。 14. NaHCO3的作用是什么？ NaHCO3与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基pH值稳定。 15. 实验室培养箱CO2浓度一直为5%可以吗？不可以。不同的培养基要求添加NaHCO3的量不同，如DMEM要求添加3.7g/L，为了保持pH值稳定，必须用高浓度的CO2平衡，一般不低于8%；而1640等要求添加NaHCO3 2.2g/L，还有一些培养基要求添加更少，那么这些培养基就要求较低的浓度平衡，一般是5%。

干细胞技术全球差异：美国、日本、澳洲对比 𐟌 干细胞技术在全球范围内的发展和应用呈现出多样化的趋势。根据技术类型，干细胞可以分为两大类：原代细胞培养技术和人工修饰干细胞。原代细胞培养技术主要从人体不同组织中提取、分离并培养干细胞，来源包括自体脂肪、骨髓、子宫内膜、牙髓等，异体来源则有脐带、脐带血、羊膜、胚胎等。而人工修饰干细胞，如诱导性多能干细胞（iPS cells），是通过特定转录因子将终末分化的体细胞重编程为多能性干细胞。目前，iPS cells在全球范围内主要用于临床研究，尚未应用于临床治疗。 𐟌 在美国、澳洲和日本，干细胞的临床研究和应用主要集中在间充质干细胞上，这些技术都基于原代细胞培养技术。尽管技术本质相同，但不同国家和地区的具体应用和监管标准存在差异。例如，在美国，部分州允许使用胎盘来源的干细胞，而日本和澳洲则主要使用自体来源的干细胞。在政策监管方面，澳洲的监管要求更为严格，需要医院和实验室紧密合作，并在申报备案后才能开展相关研究。 𐟔 这些差异不仅反映了各国在干细胞技术研究和应用上的不同发展阶段，也体现了对干细胞安全和有效性的不同重视程度。随着科技的进步和全球合作的不断深化，干细胞技术的发展和应用有望在全球范围内实现更加统一和规范的标准。

小鼠肺组织单细胞悬液制备全攻略 𐟔젥ꌧ›„：从实验室模型小鼠的肺组织中提取单细胞悬液，用于类器官培养和药物筛选研究。 𐟔砥ꌤ𛪥™诼š单细胞悬液制备仪JX-CKSM-6WK 𐟐�ꌦ 𗥓：模型小鼠一只 𐟧𔠥ꌨ€—材：消化酶、终止液、移液枪枪头、台盼蓝染料 𐟓 实验步骤： 1️⃣ 打开仪器电源，启动管架加热和模块加热功能；将消化酶和终止液在冷水中解冻。 2️⃣ 麻醉小鼠后进行解剖，取出肺组织，并用预冷的PBS冲洗血水。 3️⃣ 用眼科剪剪取组织样本，放入装有消化液的消化管中。 4️⃣ 将消化管放入管架中预热4分钟，然后转移至运行模块中，关闭仪器盖子，选择对应程序，运行结束后取出消化管。 5️⃣ 消化后的组织块变为浑浊的细胞悬液，通过70的滤网过滤细胞，加入终止液终止消化，离心后重悬，后续可进行类器官培养。 𐟓Š 实验结果：肺组织单细胞悬液的活率为93%。 𐟒᠔ips：单细胞制备仪是一种集成了金属浴消化与温和剪切组织的新一代单细胞细胞悬液制备设备，适用于流式细胞术、单细胞测序和原代细胞培养等实验。它具有起始组织量小、时间短、细胞得率高、细胞活性高的特点。采用国际DIN方法设计，低噪音，使用方便，性能稳定，对样品的消化处理过程始终处在恒温状态。

细胞培养入门指南：从零开始到大师刚接触细胞培养的小伙伴们，理论知识可能已经堆成山了，但一到实际操作就手忙脚乱，各种“黑话”听得一头雾水，不知道从哪儿下手。别担心，今天我就来带你从零开始，系统地介绍细胞培养的各种知识，帮你快速上手，成为细胞培养的大神！细胞培养基本概念 𐟧슧𛆨ƒž培养是什么？简单来说，细胞培养就是把活细胞（尤其是分散的细胞）在体外进行培养。狭义的细胞培养主要是指分离（散）细胞培养，而广义的还包括单（个）细胞培养，也就是克隆。这个克隆是通过单个细胞的有丝分裂形成的细胞群体。原代细胞原代细胞就是初次培养的细胞。简单来说，就是把培养物接种到培养皿中，任其生长繁殖而不更换生长器皿。传代培养随着培养时间的延长，细胞不断分裂繁殖，细胞之间相互接触会发生接触性抑制，生长速度逐渐减慢甚至停止。同时，培养皿中的营养物逐渐不足，代谢产物不断累积，不利于细胞继续生长。这时候就需要将培养物分割成小的部分，重新接到新的培养器皿中进行再培养。细胞系原代细胞培养物经过首次传代培养后所繁殖的细胞群体称为细胞系。狭义的细胞系是指可连续传代的细胞，广义的则是指可传代的细胞。正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后就会丧失增殖的能力，这个过程被称为衰老。这种细胞系被称为有限细胞系。而一些细胞系通过转化过程变为永生性细胞系，这一过程可自然发生，也可经化学或病毒诱导发生。有限细胞系发生转化获得无限分裂能力后就成为连续细胞系。细胞培养的环境 𐟌쯸 无菌操作是关键细胞培养实验室的主要要求是时时维持无菌状态。获得无菌条件最简单、经济的方式就是使用细胞培养超净台。超净台应足够一人使用，内外部均采用易清洁设计，具有充足的照明，使用舒适。超净台物品摆放使用过程中需保持超净台内工作空间整洁有序，将所有物品放在直视范围内，便于取用。使用前向放入超净台内的物品喷洒70%的乙醇，擦拭清洁，进行消毒。物品摆放习惯超净台中部：摆放细胞培养类耗材。超净台右前方：摆放移液耗材及器械，便于取用。超净台右后方：摆放生物试剂和培养基，便于吸取。超净台中后部：摆放试管架等，用于固定其他试剂。超净台左后方：摆放小型容器，用于盛放废液。总结 𐟓 细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。希望这篇指南能帮你从零开始，逐步掌握细胞培养的各项技能，成为细胞培养的大神！加油吧，新手小白们！

如何安全地将多肽溶解在DMSO中？二甲基亚砜（DMSO）是一种含硫有机化合物，分子式为（CH3)2SO，常温下为无色无臭的透明液体。DMSO作为冷冻保护剂，在细胞库中应用广泛。它在细胞冷冻过程中能防止胞内/胞外晶体的形成，通常使用的工作浓度为10%。DMSO常与盐或血清白蛋白结合。疏水性多肽可以很容易地溶解在DMSO中，但DMSO会增加细胞的通透性，对细胞有毒性作用。高浓度的DMSO绝不可用于细胞培养。浓度为5%的DMSO即可让细胞膜溶解。大多数细胞株可以容忍0.5% DMSO，少数可以容忍1%的浓度，而不表现出严重的细胞毒性。然而，原代细胞培养对其更敏感。所以如果是用原代细胞做剂量/反应曲线，其浓度应低于0.1%。对于某些疏水性非常高的多肽，可以尝试先将其溶解在少量的DMSO（30-50ul, 100%）中，然后慢慢（一滴一滴地）将其添加到不断搅拌的水溶液如PBS或其他想要的缓冲液中，直至理想浓度。如果滴加过程中，肽溶液开始变浑浊，说明已经达到了溶解极限。另外，超声波有助于多肽溶解。经验总结：几乎所有的细胞都能安全地耐受0.1% DMSO。广泛用于细胞培养的DMSO终浓度为0.5%，不会引起细胞毒性。虽然对部分细胞来说，1% DMSO也不会产生细胞毒性，但我们推荐0.5%。也有5% DMSO成功地应用于某些细胞的案例。始终保持终浓度在0.5%，但储存时可200倍高浓度溶于100%的DMSO中。

生物试剂百人计划试用，快来申请！各位学长学弟们，大家好！今天给大家带来一个超棒的机会——生物试剂百人计划试用！无论你是实验室小白还是资深科研达人，都可以来试试哦！特级胎牛血清：细胞培养的秘密武器 𐟐‚ 首先推荐的是我们的特级胎牛血清。这可是细胞培养的黄金标准，选它准没错！无论是部分原代细胞、干细胞还是肿瘤细胞系，都能轻松搞定。进口的来自乌拉圭，血源地纯净，质控严格，可追溯性超强。国产的也有，适合增殖旺盛的常规细胞系。 ProGroTM无血清培养基：干细胞的摇篮 𐟌𑊊接下来是ProGroTM无血清培养基，特别是为干细胞培养量身定做的。比如ProGroTM MSC KIT，专为间充质干细胞设计，用于人脐带间充质干细胞的原代分离和传代培养。还有ProGroTM CIK KIT和ProGroTM NK KIT，分别适用于免疫细胞的体外扩增和NK细胞的刺激活化。工程细胞培养：抗体生产的得力助手 𐟒‰ 如果你是做工程细胞培养的，那ProGroTM HybriSFM和ProGroTM 293SFM绝对是你的好帮手。前者用于杂交瘤细胞抗体生产，后者则适合293细胞的高密度无血清培养和蛋白表达。还有CHO无血清培养基和CHO-CD3 SFM，分别适用于CHO细胞的培养和转染。昆虫细胞培养：重组蛋白表达的好选择 𐟐› 昆虫细胞培养也是科研中的一大领域。ProGroTM InsectSFM适合Sf9及Sf21细胞的高密度悬浮培养及重组蛋白表达。还有TC-100昆虫培养基，适用于大部分鳞翅目昆虫细胞系。辅助试剂：让实验更高效 𐟧ꊊ最后推荐的是ProGroTM辅助试剂，特别是重组胰蛋白酶。这可是通过基因工程技术生产的非动物源性重组丝氨酸蛋白酶，纯度高、分子稳定、活性优异，而且生物安全性极高。还有普通的胰蛋白酶，适用于细胞解离、细胞传代和原代组织的解离。让我们一起在科学的道路上探索未知的领域！𐟚€

细胞培养技术：从基础到实践细胞培养是生物学和医学研究中的一项关键技术。根据实验需求，我们会选择不同类型的细胞进行实验。同一组织的细胞由于其来源、培养方式和建系方法的不同，可能有多种不同的名称，并且具有不同的应用场景。细胞培养是指将细胞从动物或植物体内取出，并在适宜的人工环境中使其生长的过程。细胞可以通过直接从组织中取出并通过酶或机械方法进行解离，或者来源于已建立的细胞系或细胞株。正常细胞通常只能分裂有限的次数，随后会丧失增殖能力，这是由遗传基因决定的，也被称为衰老。此类细胞系被称为有限细胞系。然而，一些细胞系可以通过特殊过程变为永生化细胞系，这个过程可以自发发生，也可以通过化学或病毒诱导发生。当一个有限的细胞系经历转化并获得无限分裂的能力时，它就成为了一个连续细胞系。细胞培养主要分为原代培养和细胞系培养。原代培养是直接从生物体获取组织或器官的一部分进行培养，并在适宜条件下增殖。严格地说，从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段即为原代培养，但实际上，通常把第一代至第十代以内的培养细胞统称为原代细胞培养。一般持续1-4周。此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛。第一次传代培养后，原代培养物即被称为细胞系。来自于原代培养的细胞系寿命有限，随着细胞的传代，生长能力最强的细胞会占据优势，最终导致细胞群体在基因型和表型上达到一定程度的均一性。如果通过克隆或其他方法从培养物中阳性筛选出了细胞系的亚群，则该细胞系成为一个细胞株。与亲代细胞系起始时相比，细胞株通常会获得一些其他的遗传学改变。各种细胞的培养条件相差很大，但培养细胞的人工环境必须包括合适的容器，其中含有一定的基质或培养基，为细胞提供必需的营养物质（氨基酸、碳水化合物、维生素、矿物质）、生长因子、激素和气体（O2、CO2），并调节生理化学环境（pH、渗透压、温度）。大多数细胞为贴壁依赖性细胞，必须附着于固体或半固体基质上培养（贴壁培养或单层培养），而另一些细胞则可在培养基中漂浮生长（悬浮培养）。一些特殊的难以贴壁的细胞可以在培养瓶/皿内添加细胞外基质(ECM)进行培养，以促进细胞粘附。

#胎牛血清# HAKATA血清——上海慧颖生物科技有限公司(简称“慧颖生物”)成立于2012年，是一批由美国留学归来的致力于服务中国生物领域的青年创办的一家集生产、研发和技术服务的生物公司。慧颖生物一直致力于生物细胞培养领域，坚持助力细胞培养和酶免ELISA试剂盒的研发生产。2018年成立自主品牌“HAKATA”，有胎牛血清和其它种属血清、无外泌体血清、传代细胞、耐药株、原代细胞、完全培养基及细胞培养辅助试剂，ELISA试剂盒和生化试剂。

大鼠原代巨噬细胞（BMDM）培养全攻略大家好！之前有朋友问我关于大鼠原代巨噬细胞（BMDM）的培养方法，今天终于有时间来分享一下我的经验啦！希望这些小建议能帮到那些和我一样曾经被这些小家伙们折腾得头大的同学们。首先，先说一下我的培养方法吧。我用的是M-CSF法，浓度大概在25-100ng/ml之间，这个区间都可以，浓度越高越好，当然也要看你的钱包厚度啦。血清浓度我用的是10%。选鼠和准备工作 𐟐튊我用的是4-8周的雄性SD大鼠，个人感觉4-5周的比较好用，质量上没啥太大差别，但数量上年龄大的会多一些。具体步骤如下：脱颈、摘腿、取骨：先把大鼠脱颈处死，然后摘掉腿，取出骨髓。剪两头、冲、过滤：把骨髓细胞剪成两段，用L-DMEM冲洗，200目过滤，离心重悬。培养和分离 𐟧ꊊ把骨髓细胞培养12-16小时后，取上清离心重悬，用含M-CSF的1640继续培养。这时剩下的贴壁细胞是间充质干细胞（MSC），如果不需要可以弃掉，需要的话可以用L-DMEM继续养。换液和保养 𐟌€ 第三天半换液（含M-CSF），第五天全换液（含M-CSF），第七天用PBS洗后换不含M-CSF的培养液。据说保养好的话，这些细胞最多可以活3周哦～常见问题解答 𐟤” 一只鼠能获得多少巨噬细胞？一只鼠可以获得一六孔板的量。 protocol严格吗？并不严格，除了最开始贴壁要足够，后续主要看因子浓度和细胞状态。贴得不多别着急换液，都贴了就没必要继续诱导了。有时候细胞急需用，我甚至会第四天全换液、第五天直接收。为什么我的BMDM会长角？这个问题真的困扰了我好久。后来发现长角不是状态不好，而是M2极化了。至少我后续诱导极化时获得的M2形态就是这些“长角M0”。避免这个问题有几种措施：换培养基：如果是H-DMEM，换成1640。贴壁步骤：这个步骤很重要，目的是分离出MSC，有大量研究表明MSC会促进巨噬细胞M2极化。这也是我建议用小鼠不用大鼠的原因，小鼠的MSC远没大鼠好活。先用rMSC喜欢的L-DMEM给人伺候贴舒服了，这时我们要的单核细胞全悬浮着，再取来诱导。检查M-CSF：我用的是国产某岸蛋白，分装冻-80后7个月效果就不好了。 PBS泡：试试PBS泡5-10分钟（适用于角没长很厉害的细胞）。小结 𐟓 接触这些细胞一年多，从啥都不会到用它毕业，对它们真是又爱又恨。总之希望能为科研界尽点微薄之力吧！祝大家顺利！

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