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细胞复苏最新视觉报道_细胞复苏步骤(2024年12月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-12-01

细胞复苏

冻存细胞处理与复苏全攻略，轻松上手！ 𐟓栦”𖥈𐥆𛥭˜细胞后，首先检查包装箱内的干冰是否充足，冻存管是否融化。如果发现冻存管已经融化，请拍照留存，并在24小时内联系客服。如果一切正常，请及时将冻存管放入超低温冰箱内保存。如果长时间不使用，必须先在超低温冰箱内过夜，然后转移到液氮中保存。 𐟔„ 冻存细胞复苏步骤：准备好100mm培养皿，并进行标记。加入预热好的12ml完全培养基。将冻存管放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃，待细胞悬液完全溶解后，转移至安全柜中进行操作。用无菌吸管吸取溶解液至培养皿中，顺时针摇匀。在显微镜下观察细胞状态并记录。将培养皿放入二氧化碳细胞培养箱中培养，18小时后更换完全培养基。

细胞复苏实验全攻略：从准备到培养细胞复苏是实验室中的一项重要技术，以下是详细的实验步骤和所需器材： 𐟧𜠥ꌥ™覝准备 1ml枪头移液枪 15ml离心管培养皿超净台水浴箱离心机 CO2培养箱一次性透明药膜 𐟔젥ꌦ�ꤊ打开超净台，用75%酒精擦拭消毒，将实验器材放入超净台内，打开紫外灯照射消毒30分钟。将水浴锅打开调至37℃，将HepG2完全培养基从-80℃冰箱中取出，放入预热的水浴锅中。从-80℃冰箱中取出HepG2细胞，套上一次性薄膜手套，快速放入预热的水浴锅中，晃动使其迅速解冻，目测无肉眼可见的水晶。用移液器将冻存管中的细胞原液转移到15ml离心管中，缓慢加入4ml的完全培养基。设置离心机1000rpm，离心5分钟，弃上清，吸去液体。加入1ml完全培养基至离心后的5ml离心管中，重新悬浮细胞，来回吸吹打，使细胞充分混合，无团块，吹打约60下。将吹打好的细胞悬液吸至T25培养瓶中，用“8”字法晃匀，使细胞充分混合。标记细胞名称和代数，放入37℃，5%CO2培养箱中培养。 ⚠️ 注意事项细胞复苏时要快，细胞容易成团块状，要吹打混匀。冻存管中的DMSO对细胞有毒，快速解冻可以避免细胞受损。取出细胞后放入常温水中保持温度，迅速将小瓶从水中取出，将水块移到生物安全柜中。用移液器迅速将冻存管中的细胞原液转移到一个15ml离心管中，向试管中小心加入预热的培养基。离心后弃上清，加入完全培养基，重新悬浮细胞，来回吸吹打，使细胞充分混合，无团块。通过以上步骤，你就可以成功复苏细胞并进行后续实验了。记得在实验过程中保持无菌操作，确保实验结果的准确性。

𐟔젧𛆨ƒž实验全攻略：从基础到高级技巧 𐟓š 细胞培养指南 𐟌𑠧𛆨ƒž复苏 𐟧Š 细胞冻存 𐟔„ 细胞传代 𐟒‰ 全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质 𐟏ž️ 组织块贴壁法培养大鼠平滑肌细胞 𐟔젥…疫组化（IHC）实验 𐟧ꠥ…疫组化实验指导 𐟓Š 结果分析.wmv 𐟓Š 如何量化IHC染色 𐟌€ 流式细胞术 𐟌 流式细胞技术 𐟓Š 流式细胞术在生命科学领域的应用 𐟓Š 流式基础原理 𐟓Š BD FACSCalibur流式细胞仪操作手册 𐟓Š BD FACSAria II用户指南 𐟔젗estern blot实验 𐟧𜠗estern blot原理和详细操作步骤 𐟧𜠨𝬨†œ液配方 𐟧𜠥𐁩—�𒩅方 𐟧𜠦˜𞨉𒦶𒩅方 𐟧𜠤𘀦Š—液配方 𐟧𜠤𚌦Š—液配方 𐟧𜠔BST配方 𐟔젱PCR实验 𐟧젱PCR原理和方法 𐟧젨𝬥𝕨š合酶链式反应(RT-PCR) 𐟧젥—𖨍祅‰定量PCR的三种数据分析方法 𐟧젤𛎒NA提取到RT-PCR.WmV 𐟧젹mvkt-PCR技术实验指南 𐟔젧𛆨ƒž克隆形成实验 𐟏�𛆨ƒž克隆形成实验.pdf 𐟏�ˆ†子生物学实验手册.pdf 𐟏�ranswell实验.pdf 𐟏�ˆ’痕实验.pdf 𐟔젥…𖤻–细胞实验技巧 𐟧ꠃCK-8细胞实验 𐟧ꠅLISA实验原理总结

免疫细胞存储全解析：你需要知道的一切 ### 免疫细胞存储是什么？免疫细胞存储其实就是从你身体里抽点血，把里面的免疫细胞分离出来，然后放到零下196℃的超低温环境中保存。等到你需要的时候，再把这些细胞复苏，通过一些生长因子激活和扩增，然后用到你身体里。免疫细胞存储的好处防癌抗癌：高质量的免疫细胞能帮助你体内的免疫系统清除癌细胞，控制癌症的发展。延缓衰老：免疫细胞还能清除那些衰老的细胞，让你保持年轻。提高免疫力：实验证明，定期使用免疫细胞能显著提升你的免疫力。调节亚健康：提升免疫系统的活力，对抗疲劳和各种疾病，改善亚健康状态。谁需要存储免疫细胞？其实，不管你是健康人、亚健康人还是肿瘤高风险人群，都可以通过储存免疫细胞来预防或治疗各种问题。不过，未成年人因为免疫细胞还在“被训练”的状态，所以一般建议18岁之后再进行存储。存储的免疫细胞可以给家人用吗？由于免疫细胞的生物学特性，还是建议自体使用。如果是异体使用，需要经过严格的HLA配型，就像骨髓移植和器官移植一样。为什么要趁年轻时存储？正常情况下，人体免疫力的巅峰是20-25岁左右。之后随着年龄增长，免疫细胞的数量减少，活力降低。到了60-70岁时，免疫细胞基本上就没啥用了。所以，趁年轻储存免疫细胞，预留一份健康保障！存储免疫细胞有什么要求？只需要从你手臂静脉采集50-200毫升血液（相当于一小杯水），然后送到专业机构进行分离、冷冻和储存。建议存储之前进行免疫功能检测，确保在免疫力强的时候储存强壮的免疫细胞。免疫细胞可以存储多久？理论上，免疫细胞可以在-196℃的深低温状态下永久存储。细胞复苏后，仍具有正常的生物学活性。希望这些信息能帮你更好地了解免疫细胞存储，做出最适合自己的决定！𐟒ꀀ

𐟌𑦖𐦉‹必读ⷈK-2细胞培养全攻略𐟌𑊱️⃣ 细胞复苏：首先，将含有1mL细胞悬液的冻存管放入37℃的水浴中快速晃动，然后加入4mL培养基并搅拌均匀。接着，在1000RPM条件下离心4分钟，倒掉上清液，加入1-2mL培养基后吹匀。将所有细胞悬液加入培养瓶中过夜培养（或加入10cm皿中，加入大约8mL培养基，过夜培养）。第二天换液并检查细胞密度。𐟔 2️⃣ 细胞传代：当细胞密度达到80%-90%时，可以进行传代培养。𐟘Š (1️⃣) 直接倒掉培养容器中的培养上清。用PBS洗涤细胞2次，洗涤后的PBS直接倒掉，不需要保留。𐟚🊨2️⃣) 用PBS洗涤培养容器1~2次，把所有细胞悬液收集到离心管中，250g离心4分钟。⏰ (3️⃣) 离心后去除上清液。加入2mL预热的完全培养基，轻轻吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。𐟌꯸ (4️⃣) 把细胞按照(2.5~4.0) 㗱0^4个活细胞/cmⲧš„比例接种到适合的培养容器中。𐟔슦𓨦„：如果没有计数，也可以按照适当的比例进行传代。首次传代建议按照1:2进行，后续可以根据细胞实际生长情况参考说明书自由调整传代比例范围。𐟓 3️⃣ 细胞冻存：当细胞生长到可以传代的密度时，可以准备冻存啦！𐟆’ (1️⃣) 消化细胞，取少量细胞悬液进行计数。细胞悬液经过250g离心4分钟。𐟧ꊨ2️⃣) 离心后倒掉上清液，用适量4℃预冷的冻存液重新悬浮细胞。然后按比例或数量将细胞分装到冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)㗱0^6个/mL。𐟒犦𓨦„：如果用冻存液重悬计数后，细胞长时间放置在非培养条件下会严重影响细胞状态。请把细胞放在4℃的冰箱中以减缓细胞代谢，更好地保持细胞状态。❄️ (3️⃣) 使用海星一步冻存液时，直接把冻存管竖放在-80℃冰箱里就能完成“一步”冻存。如果使用程序冻存液，则需要先把冻存管放入提前预冷的程序降温盒中，然后再放入-80℃冰箱。𐟧ꢝ„️ (4️⃣) 24小时后，可以把冻存管转移到液氮中进行长期保存。⏳❄️ 注意：细胞不能长时间保存在-80℃冰箱中，请尽快在24小时内转移到液氮中保存。❄️𐟒Ž

细胞冻存与复苏指南：让你的细胞保持活力！嘿，科研小伙伴们！𐟑‹ 今天，我们要聊聊细胞的“冻龄”秘籍！是的，你没听错，就是那些在实验室里陪伴我们的小小细胞们。想要它们在冻存和复苏后依旧活力四射？那就跟着我一起来学习细胞保养的正确姿势吧！𐟛᯸❄️ 慢冻快融，细胞的“冻龄”秘诀想象一下，如果你能瞬间冷冻时间，然后再快速回到现实，是不是感觉自己就像拥有了超能力？❄️⏸️ 其实，我们的细胞也需要这样的超能力来保持它们的活力。慢冻快融就是细胞的“冻龄”秘诀。为什么需要慢冻快融？慢冻：避免细胞内形成冰晶，减少机械性损伤。𐟛᯸ 快融：快速升温，避免细胞长时间暴露在高浓度电解质溶液中。⏩𐟌᯸ 细胞冻存，细节决定成败冻存细胞，就像是给细胞穿上一件保护衣。但是，这件衣服要怎么穿，才能既保暖又不束缚呢？𐟧墜芦œ€佳时机：选择细胞处于对数生长期，状态良好时进行冻存。𐟓ˆ 冻存液：新鲜配制，常用配方为培养基：血清：DMSO=7:2:1。𐟧ꊧ𛆨ƒž浓度：建议1x10^6 cells/mL，根据细胞类型可适当调整。𐟓Š 冻存液体积：常规2mL冻存管，1mL冻存体积为佳。𐟒犩™温速度：推荐-1Ⰳ/min的降温速度，可使用程序降温盒或梯度降温。❄️ 标记和记录：清晰标记细胞名称、代数、冻存人和冻存时间。𐟏𗯸 细胞复苏，唤醒沉睡的细胞复苏细胞，就像是唤醒一个沉睡的美人。但是，如果方法不当，美人可能就再也醒不过来了。𐟘𔰟’– 细胞拿取：尽量减少被动升温时间，使用隔热容器临时保存和运送细胞。⏱️𐟧Š 解冻方式： 37℃水浴快速升温，避免室温解冻。𐟛⏩ 稀释：及时稀释DMSO，减少细胞毒性。𐟚𐊦⦶𒯼š 根据细胞状态，适时换液，继续培养。𐟌𑊧픧–‘解惑，让你的细胞保养无忧 Q：复苏的细胞不贴壁怎么办？𐟤” A：选择生长状态良好的细胞进行冻存，操作要快！⏩ Q：复苏后细胞死亡？𐟘𑊁：控制消化时间，避免细胞凋亡。𐟕𐯸 Q：细胞复苏后贴壁数量少？𐟧 A：补加血清和细胞因子，耐心等待细胞增殖。𐟓ˆ Q：冻存液可以留到下次用吗？𐟘• A：最好现配现用，避免反复冻融。𐟚늊最后，记得，细胞保养不仅仅是科学，更是一门艺术。掌握了这些技巧，你的细胞就能在冻存和复苏后依旧活力满满，为你的科研项目助力！𐟌Ÿ𐟚€

4T1小鼠乳腺癌细胞培养与传代全攻略 𐟔젧𛆨ƒž培养指南 𐟔슴T1细胞复苏步骤将含有1mL 4T1细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻。加入4mL培养基，混合均匀。在1000rpm条件下离心3分钟，弃去上清液，加入1-2mL培养基，轻轻吹匀。将所有4T1细胞悬液加入含适量培养基的培养瓶中，培养过夜。第三天换液并检查4T1细胞密度。 4T1细胞传代步骤当4T1细胞密度达到80%-90%时，进行传代培养。弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗4T1细胞1-2次。加入1mL消化液（0.25% Trypsin-0.02% EDTA），使消化液浸润所有细胞。将培养瓶置于37℃培养箱中消化1-3分钟，观察细胞消化情况。若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加2-3ml完全培养基终止消化。轻轻打匀后装入无菌离心管中，1000rpm离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。将4T1细胞悬液按1:2比例分到新的含8mL培养基的新皿中或瓶中，置于培养箱中培养。 4T1细胞冻存步骤待4T1细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。以下以T25瓶为例：收集4T1细胞及细胞培养液，装入无菌离心管中，1000rpm条件下离心4分钟，弃去上清液，用PBS清洗一遍，弃尽PBS，进行细胞计数。根据4T1细胞数量对应加入无血清细胞冻存液，使细胞密度为5㗱06~1㗱07/mL，轻轻混匀，每支冻存管冻存1mL细胞悬液。将冻存管放入-80℃冰箱，24小时后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。培养注意事项 𐟓‹ 该细胞生长速度快，细胞汇合度越高越难消化，建议分次消化。一次消化至有细胞移动漂浮时终止，再进行二次消化剩余的细胞，尽量消化成单颗细胞。细胞传代第二天有少量细胞团贴壁未展开为正常现象，继续培养细胞会展开。若在培养时出现细胞变圆现象，有可能是细胞密度过大，无法展开的原因，可通过降低传代密度来改善。推荐生长培养基为RPMI-1640+10% FBS+1% P/S。收货指南 𐟓抴T1细胞瓶到货后处理方案：验货：检查培养瓶上的标签、培养瓶完好性以及瓶口是否有漏液。处置：用75%酒精对培养瓶消毒后，放入37℃、5% CO2的培养箱静置培养2-4小时后进行显微观察、拍照，作为售后维权依据。注意：贴壁细胞在运输过程中发生细胞脱落是正常的，静置后可恢复贴壁。冻存管到货后处理方案：验货：检查包装的标签、包装内是否有干冰、冻存管完好性。处置：尽快复苏（见培养方法）或程序降温后转移至液氮中保存。

细胞培养基础实验操作指南（上篇）一、细胞复苏准备工作首先，提前准备好完全培养基并将其预热至37℃。可以将培养基放在水浴或培养箱中进行预热，但反复预热可能会导致培养基失活。同时，用清洗洁净的烧杯或其他合适容器装有适量超纯水，然后放入37-38℃水浴锅中预热至37℃（至少需30分钟）。紫外照射灭菌将所需耗材和其他物品放置于超净工作台中，并进行紫外照射灭菌。快速取出冻存管从液氮罐中快速取出冻存管（存储架离开液氮罐的时间不要超过1分钟，否则其余细胞容易复温死亡），立即将其放入装有液氮的保温杯中（必须用洁净镊子取出冻存管，以免冻伤手）。然后立即将存储架放回液氮罐。解冻细胞用镊子将冻存管从保温杯中取出，并立即放入准备好的水浴中（放入之前快速检查盖子是否拧紧，盖子切勿没入水中，以免进水污染）。用镊子夹好冻存管，快速沿着容器内壁转圈。细胞未冻融时（1分钟内）切勿取出观察，细胞冻融时间一般为1-2分钟。如果超过2分钟仍未冻融，应弃用该管细胞。冻融后立即用70%酒精消毒该冻存管，然后立即放入超净工作台中。转移细胞打开冻存管盖，用移液管吹打细胞3次，然后立即把细胞转移至提前准备的装有5-10ml预热的完全培养基的15ml或50离心管中。离心处理离心（具体转速和时间根据细胞类型调整，一般不超过1000RPM, 10分钟，室温），小心移除上清。重悬细胞加入5ml预热完全培养基，吹打重悬细胞，然后把细胞悬液转移至T25培养瓶中，并放入二氧化碳培养箱（5% CO2, 37℃）中培养。观察与换液第二天观察细胞的贴壁情况，并进行换液。注意事项细胞复苏操作要求快速，否则细胞容易在冻融过程中产生冰晶，从而导致细胞死亡。在解冻细胞前，必须把超净工作台准备至工作状态，提前准备装有5-10ml预热的完全培养基的15ml或50离心管。为了降低复温对其它细胞的影响，可把该存储架子放置于装有液氮的泡沫盒中。存储架离开液氮罐的时间一般不要超过1分钟，否则其余细胞容易复温死亡。放入之前快速检查盖子是否拧紧，盖子切勿没入水中，以免进水污染。细胞未冻融时（1分钟内）切勿取出观察。根据复苏细胞的大小选择合适的离心速度和时间，一般不超过1000RPM, 10分钟。复苏后的第二天必须要进行换液（加入培养基的量根据细胞的密度和生长速度），以降低冻存保护剂DMSO的影响。离心速度和时间依据具体细胞决定。上述是以T25培养瓶为例，具体选用何种培养器皿取决于细胞生长密度需求。

HCT-116人结肠癌细胞培养全攻略 ### 细胞复苏指南 𐟧Š➡️𐟔劥‡†备工具：在无菌区准备好15ml离心管和T-25培养瓶，并分别加入5ml完全培养基。解冻细胞：将冻存管放入37℃水浴锅中，不停晃动直到内容物完全融化。然后立即取出，擦干并喷洒75%乙醇，移至无菌区。吸取细胞：小心拆卸盖子，用移液枪吸出细胞悬液，加入离心管中，1000rpm离心5分钟。重悬细胞：弃去上清液，轻弹离心管底部分散细胞沉淀，加入适量完全培养基重悬细胞后转入T-25培养瓶（建议加液量：5~7ml）。培养细胞：轻轻摇动培养瓶使细胞均匀分布，如有必要松开阀盖以便气体交换。将培养瓶放入CO2培养箱中培养。细胞传代步骤 𐟌𑊦𖈦Ÿ𙥅𛧓𖯼š用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到生物操作台内，严格无菌操作。打开细胞培养瓶，若培养瓶上无特殊标注，吸去剩余培养液，只留6-8ml培养液继续培养。传代操作：弃去培养液，用PBS洗涤1-2次。加入1.0ml胰酶消化液，37℃消化约3分钟。显微镜下观察细胞消化情况，若细胞回缩变圆、透亮、轻拍瓶壁呈流沙样脱落，则迅速拿回操作台，加入至少双倍的完全培养液终止消化并轻轻吹打细胞，使其变成单细胞悬液。将细胞收集于离心管中离心1000rpm/5分钟，弃上清，轻弹管底，将细胞弹散。加入新鲜培养基重悬细胞，进行传代。如果没有特别说明，建议第一次传代比例为1:2。注意事项 𐟓‹ 观察密度：最好用4X倍物镜低倍镜观察，以便正确判断细胞密度。观察胞形态请用10X或20X高倍镜。消化液选择：推荐使用0.25%酶/EDTA消化液。培养液更换：瓶中运输的培养液不能重复使用，请换新鲜培养液培养。离心重种：有些细胞贴壁不牢，如发现贴壁细胞有脱落，可离心重后接种到新瓶内。通过以上步骤，你就能成功培养HCT-116人结肠癌细胞啦！𐟎‰

Raw264.7培养，你做对了吗？ 𐟌𑠧𛆨ƒž复苏步骤：预热培养液：将完全培养液放入37℃水浴锅中预热30分钟。准备离心管：在超净台内，吸取7毫升完全培养液至15毫升离心管中。解冻细胞：将细胞从干冰中取出，用镊子夹住盖子放入37℃水浴中快速晃动，使细胞在1分钟左右完全融化。离心处理：将细胞悬液转移至提前准备好的完全培养液中，盖上盖子，以1100 rpm室温离心4分钟。重悬细胞：在超净台内吸弃上清，吸取1毫升完全培养液重悬细胞至单细胞悬液，转移至装有4毫升完全培养液的T25 cmⲥŸ𙥅𛧓𖯼ˆ或6厘米皿）中，标记细胞名称、复苏日期、代次，放置于37℃、5% CO2培养箱中培养。观察细胞：第二天观察细胞状态及贴壁情况。 𐟔‘ 复苏关键点：操作时间：复苏操作时间不宜过长，尽量在15分钟内完成。细胞状态：若复苏后24小时细胞状态不佳或分化较多，建议再次复苏时将细胞接种到六孔板中。避免大容器：请勿直接复苏到T75 cmⲧ“𖦈–10厘米皿。 𐟌𑠧𛆨ƒž传代步骤：汇合度：当细胞汇合度达到70-80%时进行传代，传代比例为1:3-1:6。吸出原液：吸出原培养液，直接吸取新鲜完全培养液轻柔吹打成单个细胞，在显微镜下观察细胞是否为单个细胞。接种传代：按一定比例接种传代，第二天观察细胞状态。 𐟔‘ 传代关键点：胰酶消化：该细胞不可用胰酶消化。血清质量：血清质量差异可能会对细胞生长有影响，建议使用高级血清进行培养，如果没有高级血清，可提高血清浓度进行培养。控制传代间隔：通过传代可以改善细胞分化的比例，由于Raw264.7细胞生长速度很快，一般2-3天即可传代，因此传代间隔不能超过三天，若超过会使细胞更容易分化，分化的细胞贴壁牢固，难于吹下，所以需要控制好每次的接种密度。处理分化细胞：若分化细胞占比很大，待细胞长至70-80%汇合度后用单道移液器将表面未分化的圆形细胞轻柔吹下转移至新的培养板里并吹成单细胞（注意接种密度，不可过稀），只吹一下即可，避免把分化的细胞也一并吹下培养，之后2-3次传代如上述操作可得到正常的细胞。