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培养箱最新娱乐体验_培养箱的使用方法和注意事项(2024年12月深度解析)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：话题更新日期：2024-12-03

培养箱

二氧化碳培养箱的这些方面需要定期检测与维护

细胞克隆实验全攻略：从准备到结果解读细胞的消化 𐟧슥–对数生长期的细胞，分别加入0.5mL 0.25%的胰蛋白酶，放入细胞培养箱中消化2分钟。从培养箱中取出细胞，加入1mL完全培养基，吹打成单个细胞。常温下1000rpm离心5分钟收集细胞。离心后去除上清液，加入1mL完全培养基，吹打成单个细胞悬浮液备用。活细胞计数 𐟔⊥–10细胞悬浮液，加入90台盼蓝溶液，涡旋振荡混匀。用酒精清洁血细胞计数器的小室和盖玻片，然后用脱脂棉擦干。用微量移液器吸取10稀释的样本充满两个小室。计数4个大方格中的细胞总数，活细胞透明有折光（未染色），死细胞则染成蓝色。细胞密度计算方法：每个方格中活细胞总数平均值 x 稀释倍数 x104=活细胞数/mL。细胞接种与培养 𐟌𑊥𐆧𛆨ƒž悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每孔500个细胞梯度密度接种于含2mL 37℃预温培养液六孔板中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。每隔3~4天换一次新鲜培养基。细胞克隆固定与染色 𐟎芧𛏥𘸨炥𜌥𝓥Ÿ𙥅𛥭”中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加5mL 4%多聚甲醛固定细胞15分钟。除去固定液，加适量0.4%结晶紫染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。细胞克隆计数与拍照 𐟓𘊥𐆥𙳧š🥀’置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）㗱00%。实验关键 𐟔动ꌦˆ功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响。一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

细胞培养防污染全攻略，科研必备！在生物医学研究和药物开发中，细胞培养是关键技术之一。然而，细胞污染不仅影响实验结果，还可能危害科研人员和患者的健康。掌握以下防污染技巧，有助于维护实验室环境，保障科研质量。 𐟧𜠤𘥦 𜩁𕥮ˆ无菌操作规范穿戴防护装备：进行细胞操作前，务必穿戴实验室专用防护服、手套、口罩和帽子，减少皮肤、头发等携带的微生物对细胞的污染。定期消毒：工作台面、移液器、离心机等常用设备需定期使用70%乙醇或其他合适消毒剂擦拭消毒，确保表面无菌。无菌操作：所有与细胞直接接触的物品，如培养基、移液管、培养皿等，均应在无菌条件下准备和使用，避免在空气中暴露过久。 𐟌᯸ 优化细胞培养环境控制温湿度：维持培养箱内的适宜温度和湿度，通常细胞培养的温度为37Ⰳ，CO₂浓度为5%，湿度饱和，以减少微生物的生长机会。定期校准设备：确保培养箱、水浴锅等设备的温度和CO₂浓度控制准确，避免因设备故障导致培养条件偏离。避免交叉污染：不同细胞系或菌株应使用独立的培养箱或至少分隔区域培养，防止相互污染。 𐟧꠩€‰用高质量的培养基与试剂正规渠道采购：选择来自可靠供应商的培养基、血清和试剂，确保其无菌、无毒素且符合实验要求。质量检测：对新批次的培养基和试剂进行质量检查，如观察颜色、透明度，必要时进行微生物污染测试。储存条件：严格按照说明书推荐的储存条件保存培养基和试剂，避免过期使用或储存不当导致的污染。 𐟓ˆ 合理的细胞传代与管理适度传代：避免过度传代导致细胞状态下降，增加污染风险。根据细胞生长特性和实验需求制定合理的传代计划。细胞监测：定期观察细胞形态和生长状况，及时发现并处理污染迹象，如细菌、真菌污染或细胞形态异常。记录与追踪：建立完善的细胞库管理系统，记录每批细胞的来源、传代次数、培养条件及任何异常情况，便于追踪和溯源。掌握这些技巧，可以有效避免细胞污染，保障实验结果的准确性。

CCK8实验详解𐟔 CCK8是一种广泛用于细胞生物学研究的试剂，主要用于细胞增殖和毒性的测定。以下是使用CCK8进行实验的详细步骤和注意事项： 𐟌🠥ꌦ�꤯𜚊种板：根据文献或实验经验确定细胞浓度，将细胞悬液稀释至适当浓度。对于细胞增殖实验，每孔加入约1000-2000个细胞；对于细胞毒性实验，每孔加入约5000～10000个细胞。每组设置4-6个复孔，同时设置对照组及空白组。边缘孔加入PBS以减少蒸发影响。将细胞置于37℃ 5%CO2细胞培养箱中培养12-24小时。加药及孵育：观察细胞贴壁良好后，吸出各孔培养基，实验组加入不同浓度的药物培养基，空白组加入不含药物的培养基。然后将96孔板在37℃ 5% CO2空气的细胞培养箱中孵育适当时间（6h，18h，24h，48h）。加入CCK-8：配制含10%CCK-8溶液的培养基，每孔加入10ul CCK8和100ul完全培养基。注意加入过程中避免产生气泡。孵育：将加完CCK-8的培养板放入37℃ 5%CO2培养箱中孵育1-4小时（时间自行摸索），随着时间的增加，OD值会增大。分别在0.5h、1.0h、2.0h测量OD值，将OD值控制在1.0左右。测OD值：将96孔板取出，使用酶标仪检测各孔在450nm波长处的OD值，分析处理数据，绘制增殖曲线。结果分析：细胞存活率：细胞存活率% = (实验孔OD - 空白孔OD) / (对照细胞OD - 空白孔OD) 㗠100%。细胞抑制率：细胞抑制率% = (对照细胞OD - 实验孔OD) / (对照细胞OD - 空白孔OD) 㗠100%。 𐟔 注意事项：待测物质有氧化性或还原性时，可在加CCK8之前更换新鲜培养基，以去掉药物影响。培养箱内培养时，培养板最外一圈的孔容易干燥挥发，增加误差。一般情况下，最外一圈的孔加培养基或PBS，不作为测定孔用。通过以上步骤和注意事项，您可以更准确地使用CCK8进行细胞增殖和毒性测定实验。

全封闭智能集菌仪使用全攻略集菌仪通过定向蠕动加压原理，使供试品中的微生物截留在滤器中的微孔滤膜（0.22⵭*47mm或0.45⵭*47mm）上。通过冲洗滤膜除去抑菌成分，然后将所需的培养基通过进样管道直接引入全封闭过滤集菌培养器中，放置在培养箱内进行无菌培养。以下是详细步骤：检查包装：取出配套使用的一次性培养器，检查包装是否完好无损，在无菌室内打开包装。放置培养器：将一次性培养器逐个插放在不锈钢排液槽上（仪器上的几个小孔，每个孔安放一个培养皿即可）。连接软管：将一次性培养器的弹性软管装入集菌仪的蠕动泵头，集菌仪要求定位准确，软管走势顺畅。消毒样品瓶：打开待检供试品瓶（袋）的插针孔并做环形消毒（若检测安瓶样品，先将安瓶颈部做环形消毒，然后再打开）。消毒针头：拔去进样针管护套，针头和供试品瓶口过酒精灯火焰消毒，插入样品瓶中，开启智能集菌仪，将供试品瓶倒置，实施过滤集菌（应避免双芯针管进气滤膜被药液浸湿，影响进气；若样品为袋装不存在该问题）。抑菌处理：完成集菌后，若样品具有抑菌作用或含防腐剂，按抑菌性样品的操作步骤进行操作。培养基处理：启开已灭菌好的培养基瓶，将针头和培养基瓶口过酒精灯火焰消毒，针头插入培养基瓶中。注入培养基：摘下一次性培养器顶部空气滤器开口的胶塞，套在一次性培养器的底口上，用软管夹子依次开闭软管，开启集菌仪，将培养基泵注入培养器内。（先取两个夹子夹住弹性软管定位处的两根管子，先加入改良马丁培养基；再取另外一个夹子夹住另外一根管子，并用夹子夹闭与一次性培养器连接部的软管，留出5-6cm软管，剪除其余部分，并将开口端插在空气滤器的开口上）。培养：分别按照药典规定的培养时间进行培养。观察培养情况：若需取样分离培养，可将软管消毒，用无菌注射器插入软管抽取所需量做进一步检查。通过以上步骤，就可以使用全封闭智能集菌仪进行无菌培养了。

常见细菌培养及标本处理全攻略 𐟎‰今天为大家带来常见细菌培养及标本处理的全攻略𐟎‰ 𐟒饤社🥟𙥅𛊦œ€常用的平板：SS、麦康凯、中国蓝接种方法：分区划线培养基：血平板、巧克力平板注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室 𐟒Š中段尿培养培养基：血平板接种方法：分区划线注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室 𐟑…咽拭子、痰、肺泡灌洗液培养培养基：血平板、巧克力平板接种方法：分区划线注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室 𐟒‰血培养瓶培养阳性培养基：血平板、巧克力平板接种方法：分区划线注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室 𐟔즛𔥤š类型细菌培养及标本处理，详见上图𐟔슊𐟓š暗养基及暗养目的致病性大肠杆菌、贺氏、沙门氏菌：中国蓝、S-S、麦康凯接种方法：分区划线注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室暗养箱培养 𐟓š真菌培养培养基：沙保罗氏培养基接种方法：分区划线注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室 𐟓š厌氧菌培养培养基：厌氧血平板接种方法：分区划线注意事项：标本接种后应半小时内置细菌室CO2培养箱培养 𐟓š支原体培养+药敏试验专用培养基（灰色标签）接种方法：分区划线注意事项：标本已床边接种，将送来的培养基分装至药敏板，100/孔，再加1滴矿物油/孔，然后将原标本管插入药敏板上，放培养箱培养。 𐟓š淋球菌培养淋球菌平板接种方法：床边接种，将送来的培养板直接放CO2培养箱培养。注意事项：标本已床边接种，将送来的培养板直接放CO2培养箱培养。 𐟓š结核杆菌培养罗氏培养基接种方法：痰液标本先以4%NaOH消化后划线接种，其他标本直接划线接种。注意事项：置大便培养箱培养。

CCK8实验攻略，轻松掌握！ CCK8实验其实并不复杂，只需掌握一些关键步骤。以下是详细的操作指南： 𐟓ˆ 制作标准曲线计数细胞，按比例用培养基等比稀释成不同细胞浓度梯度，一般需要5-7个梯度，每组4-6个复孔。接种细胞后培养2-4小时，使细胞贴壁。然后每100培养基中加入10 CCK-8试剂（注意不要产生气泡），继续培养1-4小时。用酶标仪测定450nm处的吸光度。 𐟧‰€需培养液可以先转染再种板。在10cm盘中转染，6小时后消化并重悬细胞，调整细胞密度至20000个/ml，种在96孔板中，每孔1000。种板时，用枪头吹吸细胞，彻底重悬并均匀分散。也可以同时进行转染和种板，转染6小时后换液，每孔100新鲜DMEM。 𐟒Š 细胞增殖-毒性检测在96孔板中接种细胞悬液（100/孔，每孔细胞数至少1000），预培养24小时。向培养板加入不同浓度的待测药物。将培养板在培养箱中孵育一段时间后，加入培养基（完全培养基或基础培养基均可），孵育6小时（具体时间根据实验决定），空白孔加入培养基。向每孔加入10的CCK-8溶液（注意不要产生气泡），不用更换培养基。将培养板置于培养箱内孵育1-4小时，用酶标仪测定450nm处的吸光度。 𐟓Š 计算公式细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]x100% 抑制率=[(Ac-As)/(Ac-Ab)]x100% As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液） Ac：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物） Ab：空白孔吸光度（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物）以上就是CCK8实验的详细操作过程，希望对你有所帮助！

冻存细胞处理与复苏全攻略，轻松上手！ 𐟓栦”𖥈𐥆𛥭˜细胞后，首先检查包装箱内的干冰是否充足，冻存管是否融化。如果发现冻存管已经融化，请拍照留存，并在24小时内联系客服。如果一切正常，请及时将冻存管放入超低温冰箱内保存。如果长时间不使用，必须先在超低温冰箱内过夜，然后转移到液氮中保存。 𐟔„ 冻存细胞复苏步骤：准备好100mm培养皿，并进行标记。加入预热好的12ml完全培养基。将冻存管放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃，待细胞悬液完全溶解后，转移至安全柜中进行操作。用无菌吸管吸取溶解液至培养皿中，顺时针摇匀。在显微镜下观察细胞状态并记录。将培养皿放入二氧化碳细胞培养箱中培养，18小时后更换完全培养基。

实验室新手必看：3步掌握细胞培养技巧 𐟌Ÿ𐟌Ÿ如果你是实验室新手，对细胞实验感到无从下手，别担心！这里有三招帮你快速掌握细胞培养技巧。 𐟑‰𐟑‰首先，准备好所有必要的材料。以下是材料清单：试剂：完全培养基、血清、胰蛋白酶、PBS缓冲液（建议除PBS缓冲液外，其他试剂选择进口的）耗材：巴氏管、培养瓶、15ml离心管、1ml移液枪 ✨✨✨无菌操作是细胞培养的关键。实验开始前，将耗材放入超净台中进行30分钟的紫外灭菌。 𐟌𛰟Œ𛰟Œ𛥮ž验操作分为三步：观察细胞、消化细胞和再培养。贴壁细胞培养步骤 1⃣ 从培养箱中取出细胞，在显微镜下观察细胞的贴壁和生长情况，确保基本无漂浮细胞，生长密度达到85%以上。然后配制培养基：10%FBS+1%双抗+完全培养基。 2⃣ 将细胞放入超净台中，倾倒瓶中液体。用巴氏管吸取PBS缓冲液轻柔冲洗3次，每次3ml，吸除培养瓶中残余液体。 3⃣ 加入500ul胰蛋白酶，放入培养箱中进行消化30-60秒后，加入3ml培养基终止消化。用巴氏管吸取培养瓶中的细胞混悬液放入15ml离心管中，以1000rpm/5min进行离心。 4⃣ 离心后倾倒液体，用1ml移液枪吸取1ml培养基进行吹打，使细胞悬液均匀。将细胞悬液加入新的培养瓶中，再用巴氏管吸取4ml培养基放入培养瓶中，放入培养箱中进行培养。 𐟑𐟑𐟑实验过程中，注意查看说明书，不明白的地方可以在评论区提问哦。

巨噬细胞趋化实验，一文搞定！最近刚刚完成了一次Transwell实验，验证了巨噬细胞的趋化功能，感觉收获颇丰，决定分享一下我的经验，希望能帮到大家。 PMA诱导THP1极化 𐟧ꊩ斥…ˆ，用DMSO溶解PMA，稀释到100ug/ml，然后直接加到培养基里，使PMA的终浓度为100ng/ml。接着，将THP1细胞离心后用含有PMA的培养基重悬并计数。在24孔板的上室加入含有20w THP1的细胞悬液300ul，下室加入含有PMA的培养基600ul，诱导24小时直到细胞贴壁。肿瘤细胞点板 𐟏 将肿瘤细胞消化重悬后进行计数，24孔板每孔加入含有2w细胞的细胞悬液，摇匀后放置在培养箱24小时再进行后续处理。 Transwell实验 𐟚犥𘥼ƒ肿瘤细胞培养基，更换为THP1培养用的完全培养基600ul。将诱导好的THP1小室轻轻放入，上室加入无血清1640培养基300ul，培养箱中放置24小时后固定染色。注意事项 ⚠️ PMA用DMSO而不是培养基溶解，否则会导致PMA析出而影响诱导效果。如果下室的肿瘤细胞需要进行其他处理（比如敲低或过表），最好在六孔板中处理之后再点板，因为肿瘤细胞本身的数量和活力会对实验结果产生很大影响。具体细胞数需要根据自己的细胞状态进行调整，这里仅供参考。以上就是我的实验流程和一些小贴士，欢迎大家补充和讨论！希望我的经验能帮到你们，祝大家实验顺利！

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