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银染最新娱乐体验_池吟银染《狐狸的陷阱》(2024年12月深度解析)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：话题更新日期：2024-11-29

「容器」玻璃瓶残片，出土于俄罗斯，不过是一件拜占庭器物，可能是在科林斯地区的工坊制作的，时代为公元11世纪到公元12世纪。

出一期池吟和银染，两个也是超甜的好吧[吃鲸][吃鲸]

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#动态连更挑战# 漫画《狐狸的陷阱》，银染、白烟、池吟、萧寻。#漫画#

Pulldown-Mass和Pulldown-WB检测要点：（1）试验设计：尽量进行试验组别设计和生物学重复检测，提高后续验证的阳性率。常规过表达单组（对照组 vs 实验组），根据目的设计适当的生物学重复。如果后续以Pulldown-Mass数据进行互作组标准分析，则需要3-4组生物学重复；如果后续以寻找关键互作蛋白，进行深入的机制研究，则建议1-2次生物学重复。经验显示单次重复假阳性率达90%。（2）细胞量：细胞用量要求不少于5E7（金标准：320g离心细胞量50，保障项目用量）。（3）银染质控：Pulldown产物考染/银染质控。（4）Pulldown送样建议：Pulldown后需用PBS清洗后，产物直接送样。不建议对蛋白进行洗脱处理送样，避免丢失互作蛋白信息。（5）互作蛋白筛选和验证：数据分析以非标定量信号强度（LFQ intensity和FC>10）作为强阳筛选，以文献查阅，功能匹配，批量Pulldown-WB验证，提高验证成功率。理想Pulldown-MS结果的蛋白定量都到超过1000种蛋白。其中绝大部分蛋白为非特异结合或背景蛋白。以目的蛋白的富集信号强度和差异倍数作为参考（相对强信号和差异），分析实验组中明显定量较高且差异较大的蛋白，作为重要候选蛋白。同时对重要候选蛋白进行STRING互作分析、文献分析和目的蛋白功能匹配分析，选择更优的4-5个蛋白进行Pulldown-WB验证，提高Pulldown-WB成功率。如有相关科研问题，欢迎留言探讨。 #科研#⠂ #研究生日常#⠂ #pulldown#⠂ #实验外包#⠂ #实验室日常#

PAGE染色优化，实验大不同！自1959年Raymond和Weintraub首次使用聚丙烯酰胺作为电泳介质以来，聚丙烯酰胺凝胶已成为生化实验中最常用的支持介质。在蛋白质组学试验中，蛋白质经聚丙烯酰胺凝胶电泳后的染色是一个至关重要的环节。以下是一些优化PAGE染色的实验策略：电泳条件优化 𐟌᯸ 高温制胶可能会产生小气泡，因为高温下凝胶聚合反应瞬间完成，导致灌胶时气泡排除不及。而低温制胶则可能导致凝胶混浊且脆性增强。建议选择APS:TEMED配比1:10的条件，这样既能保证凝胶的质量，又能避免气泡的产生。染色条件优化 𐟎芥œ襸𘨧„银染显影体系中，AgNO3、CH2O和Na2CO3的使用量对显带效果有显著影响。通过试验发现，AgNO3使用量0.1%，CH2O使用量1mL，Na2CO3使用量0.2g，上样量1-2uL的体系效果最佳。 PAGE类型选择 𐟏… PAGE分为变性聚丙烯酰胺凝胶（SDS-PAGE）和非变性聚丙烯凝胶电泳（native-PAGE）。SDS-PAGE添加了SDS和疏基乙醇变性剂，并在加热条件下将聚合蛋白质充分变性为亚基进行分离。而非变性电泳不含变性剂，多在低温条件下对天然构象的蛋白质进行分离。非变性电泳分离乳蛋白质的条带虽然较少，但对清蛋白的分离效果良好，更能明显区分乳清蛋白。参考文献 𐟓š The Improvement on the Method of Separating Leaf Proteins in Arabidopsis by SDS Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Investigation of protein staining protocols of SDS-polyacrylamide gel electrophoresis. The study of the differences between cow and goat milk proteins by SDS-PAGE and native-PAGE. Research on Influence Factor of Non Denatured PAGE Technology of Chinese Cabbage. 通过这些优化策略，可以有效提高Western blot中PAGE染色的实验效果，确保数据的准确性和可靠性。

出句：白马无缰谁驾驭【厨娘】对句：绿舟有桨孰划行【柳烟浮梦】出句：寒山落木风萧瑟【厨娘】对句：长涧飞花雨冷清【柳烟浮梦】出句：霞飞碧水金铺路【厨娘】对句：月挂青山银染林【柳烟浮梦】

#动态连更挑战# 漫画《狐狸的陷阱》银染和池吟。(注:银染是蓝毛，池吟是紫毛。银染是男主，池吟是女主。银染才是狐妖哦)

𐟧쐵ll Down实验结果解析𐟔 𐟔젥ꌧ𛓦žœ来啦！让我们一步步解读Pull Down技术的实验结果吧！ 1️⃣ WB预实验验证抗体质量 𐟧 例如：图1展示了WB预实验的结果，可以看出抗体质量棒棒的，可以进行下一步的WB正式实验啦！ 2️⃣ 银染结果揭秘 𐟤銤𞋥悯𜚥›𞲦�𚤺†银染的神秘面纱，目的探针组有差异蛋白被拉出，这意味着我们可以进行后续的质谱分析，探索更多未知哦！ 3️⃣ 质谱结果大放送 𐟚€ 这一步将为我们提供更深入的信息，例如：图3展示了质谱分析的详细数据，帮助我们更准确地了解目的蛋白与候选蛋白的互作关系。 4️⃣ RPd-WB结果出炉 𐟎‰ 例如：图4展示了RPd-WB的结果，通过这一步我们可以进一步验证目的RNA和候选蛋白之间的互作，为研究提供更有力的证据！ 𐟓š 参考文献： "LINC00941 promotes pancreatic cancer malignancy by interacting with ANXA2 and suppressing NEDD4L-mediated degradation of ANXA2." Cell death & disease 2022. 𐟒ᥰ贴士：每一步的结果都是探索生物奥秘的重要一步，不要错过任何细节哦！

WB全流程6：转膜操作指南 1. 𐟔 轻轻撬掉小玻璃板，注意动作要轻柔，避免胶体破裂。 2. 𐟗‘️ 切除加样孔、左右侧及下面多余部分，标记胶左上角，小心取下胶放入ddH2O盒子中，洗掉电泳液。 3. ✂️ 剪裁PVDF膜，确保其大小与胶体一致。 4. 𐟔堦🀦𔻐VDF膜：甲醇浸泡15秒，转膜液中浸泡3分钟。 5. 𐟧頧𛄨ㅨ𝬧绢€œ三明治”： ① 硬质海绵充分浸泡电转液，挤出气泡； ② 转移支架底部为黑色，放置一块硬质海绵； ③ 放置三层滤纸，用玻璃棒滚压去除气泡； ④ 放置凝胶（翻面，切角右上角），靠近组装后的下方，用玻璃棒滚压去除气泡； ⑤ 放置PVDF膜（对应位置切角），用玻璃棒滚压去除气泡； ⑥ 再次放置三层滤纸，用玻璃棒滚压去除气泡； ⑦ 放置硬质海绵，用玻璃棒滚压去除气泡。 6. 𐟔— 将组装好的“三明治”固定在转移支架中，放入转移装置（黑红色），关节朝下，黑对黑，白对红，并放置降温装置，加满电转液，确保覆盖目的蛋白区。 7. ❄️ 将电转装置放入冰盒中，盖上盖子，预估转膜时间： ① 100kD-1.5mm厚胶-10%浓度胶-300mA-60min，根据条件按比例推算； ② 根据蛋白分子量大小确定转膜时间（250mA，1.5kD/min）； ③ 不同转膜装置的转移效率不同，换用转膜装置时需重新摸索条件。 8. 𐟓栨𝬥彧š„膜如果不敷抗体，可放入PBS中4℃保存。涉及磷酸化实验时，需用TBS。也可以37℃烘干10分钟后室温保存。 𐟔 注意：判断转膜效果的方法有两种： ① 对转移后的凝胶进行考马斯亮蓝染色或银染； ② 对转后的PDVF膜进行丽春红染色。

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