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thp1最新视觉报道_thp1细胞诱导分化(2024年11月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-11-28

thp1

巨噬细胞M1/M2极化实验详解巨噬细胞是一类位于外周血和炎症组织中的白细胞，属于免疫细胞中的单核细胞类群。它们主要通过吞噬细菌、死亡细胞或细胞残片来参与非特异性免疫调节。巨噬细胞将信号传递给其他淋巴细胞及其他免疫细胞，从而参与特异性免疫调节。巨噬细胞通常以单核细胞前体的形式进入血液中，当单核细胞浸润到组织中时，会分化成巨噬细胞。巨噬细胞主要存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝脏以及脾脏等组织中。根据功能以及炎症分泌水平，巨噬细胞分为M1型和M2型两种亚群。 M1巨噬细胞主要由LPS（脂多糖）及IFN𜈥𙲦‰𐧴 𜉦🀦𔻯𜌥ˆ†泌IFN-𜈥𙲦‰𐧴 𜉣€TNF-𜈨‚🧘䥝死因子𜉧퉤🃧‚Ž症因子。M2巨噬细胞主要由IL4（白细胞介素4）、IL13（白细胞介素13）、M-CSF（巨噬细胞集落刺激因子）等激活，主要分泌IL10（白细胞介素10）等抗炎症因子。巨噬细胞的鉴定方式主要有流式细胞术和免疫荧光实验，通过一些巨噬细胞标志物进行鉴定。常见的人和小鼠M1巨噬细胞标志物有CD68、CD80、CD86、CD32等；常见人和小鼠M2巨噬细胞标志物有CD206、CD204、CD163等。 M1和M2巨噬细胞的作用包括：①作为抗原提呈细胞；②杀伤肿瘤效应细胞；③通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞；④处理和呈递肿瘤抗原，激活T细胞以产生特异性抗肿瘤细胞免疫应答；⑤通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞；⑥分泌肿瘤坏死因子（TNF）等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。在基础科学实验中，常用的细胞模型有小鼠RAW264.7巨噬细胞、人THP1单核细胞、小鼠BMDM骨髓细胞等。动物实验研究巨噬细胞的造模更多是偏向于炎症模型，例如急性肺损伤模型。 THP-1（人单核细胞） THP-1是来自急性单核细胞白血病患者血液分离而来，在基础科研实验中，常常诱导分化为巨噬细胞来进行机制研究。THP-1通常受PMA（佛波酯）150nmol/L诱导24h即可分化为巨噬细胞，然后在PMA持续存在的情况下，LPS（100ng/ml）、IFN𜈲0ng/ml）诱导48h，产生M1巨噬细胞；IL4（20ng/ml）、IL13（20ng/ml）诱导48h，产生M2巨噬细胞。 RAW264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞） RAW264.7细胞是主要炎症模型、巨噬细胞极化等体外研究细胞，广泛用于急性肺损伤、风湿性关节炎等模型中。LPS（200ng/ml），12h可以诱导此细胞向M1分化，产生炎症因子，10ng/ml IL-4诱导RAW264.7细胞12h可以产生M2细胞。通过这些实验方法，可以更好地研究巨噬细胞的功能和作用，为免疫学和疾病治疗提供更多依据。

单核/巨噬细胞流式分析：新手必读指南 𐟑‹大家好，今天我们来聊聊单核/巨噬细胞流式分析的基础知识，适合新手小白哦！单核细胞的基本知识 𐟧 单核细胞在人体内可是个勤奋的小家伙，它们在脉管系统、骨髓和脾脏中不停地循环。在正常情况下，它们不会增殖，但一旦迁移到外周组织，就会分化成树突状细胞或巨噬细胞。单核细胞的特性是它们具有可塑性和异质性，能够快速调整功能表型来适应环境的变化。单核细胞的培养 𐟧늊想要研究单核细胞，首先得把它们从血液或其他组织中分离出来。你可以用阴选试剂盒从 PBMC 中分离出有活性的单核细胞，也可以用 CD14、CD64 和 CD192 作为标志物进行流式分选。原代人单核细胞可以在体外培养，但在 5 天内会在血清或 M-CSF 存在下开始分化为巨噬细胞。单核细胞以粘附和非粘附细胞混合形式生长，比例取决于培养基和刺激因子。除了原代单核细胞，THP-1 细胞系也常用于研究。它们特别依赖细胞浓度，ATCC 建议的浓度是 10E5~10E6/mL。状态不好的 THP-1 培养 3 天后数量不多，继续培养 1~2 天，培养基会严重泛黄。THP-1 适合在 pH 偏酸性环境生长，对培养基很敏感，不宜频繁换液，尽量用相同酸碱度的 1640 培养基。复苏 THP-1 细胞有难度，建议冻存时密度大些，复苏时用小培养瓶。流式分析巨噬细胞的注意事项 𐟎在分析巨噬细胞时，首先要处理组织，比如解剖、研磨、剪碎等，然后酶消化制备单细胞悬液。在上机检测前建议将样本过滤，保证准确性，还能避免堵管。单核细胞可以用特殊分化培养基分化为巨噬细胞，用 GM-CSF 和 M-CSF 能让单核细胞分化。在 1640 培养基中刺激单核细胞，添加相应物质能导致 M1 或 M2 极化。还可以用不同细胞因子先后刺激单核细胞来获得 M1 和 M2 极化。用 PMA 刺激 6 小时能诱导 THP-1 来源的巨噬细胞，然后继续培养能让其向 M1 或 M2 极化。希望这些基础知识能帮到你们，赶紧动手试试吧！𐟒ꀀ

𐟔解决P65磷酸化无条带难题！ 𐟤”你是否在WB实验中遇到了P65磷酸化无条带的困扰？别担心，这里有一些实用的血泪经验分享给你！ 𐟔짻†胞模型选择很重要 RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞是常用的炎症细胞模型，与NF和炎症密切相关。此外，BMM/BMDM、THP-1等人单核细胞白血病细胞也是不错的选择。 𐟒‰合适的刺激物是关键 LPS（脂多糖）是激活NF信号通路的有效刺激物，其次是TNF€IL-1퉧‚Ž性因子。这些刺激物能诱导巨噬细胞分化，进而激活P65磷酸化。 𐟒ᥢž加M1阳性对照为了确保刺激方式合适，可以增加一个M1促炎巨噬细胞阳性对照。这样，当结果出现异常时，可以迅速排查问题所在。 𐟓LPS刺激条件参考实验室常用的LPS浓度和刺激时间多种多样，但可以通过查阅文献来找到适合自己实验条件的最佳参数。 𐟒᥮ž验细节不容忽视在制样过程中，务必添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，并全程低温操作以保持磷酸化的稳定性。此外，封闭液和一抗稀释液的选择也至关重要。希望这些经验能助你顺利解决P65磷酸化无条带的问题！𐟎‰

B16-F10细胞培养全攻略 𐟔젧𛆨ƒž基本信息英文名称：B16-F10 中文名称：小鼠皮肤黑色素瘤细胞种属：鼠源组织来源：皮肤品系：C57BL/6J 疾病：黑色素瘤 𐟌𑠧”Ÿ长特性与细胞形态生长特性：贴壁生长细胞形态：梭形细胞样；上皮细胞样 𐟔„ 传代与换液传代比例：1:2 ~ 1:4 换液频率：2~3次/周倍增时间：48-72h 𐟧ꠥŸ𙥅𛤽“系与条件培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S 培养条件：5%CO2；37 ℃ ❄️ 冻存条件冻存液：Biochannel细胞冻存液程序降温：液氮长期保存 𐟌Ÿ 细胞培养特点 DMEM（含1.5g/L NaHCO3）培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。推荐的基础培养基是DMEM（高糖）培养基。 DMEM培养的B16-F10细胞会分泌较多黑色素，而1640培养基则较少。可根据实验需求尝试更换培养体系，更换时建议留种。更换为DMEM培养液时，请确保血清和培养液质量，否则可能导致细胞不长、生长缓慢以及黑色素大量分泌。 𐟤” 常见问题解答收货时细胞出现伪足或碎片较多怎么办？受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。培养过程中细胞发生贴壁怎么办？少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。培养过程中细胞发生聚团怎么办？少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。培养基里一定要加巯基乙醇吗？ 巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

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