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蛋白质免疫印迹在线播放_蛋白质免疫印迹实验(2024年12月免费观看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-11-30

蛋白质免疫印迹

吐温20在WB实验中的神奇作用大家好，今天我们来聊聊吐温20在WB（蛋白质免疫印迹）实验中的神奇作用。吐温20是一种非离子型表面活性剂，在WB实验中可是个不可或缺的角色哦！首先，吐温20在洗液中的作用是封闭膜上蛋白的非结合位点。这就像是给蛋白穿上了一层“保护衣”，能够有效降低背景，让我们的抗体检测更加准确、特异性更强。如果你在做WB实验时发现背景总是很高，那很有可能是吐温20没有发挥好它的封闭作用。另外，吐温20还能保护抗原抗体蛋白。在整个实验过程中，它能减少抗体对抗原的非特异性作用，帮助我们洗脱未结合的抗体，让真正特异性结合的抗体留下来。这对于我们最终得到准确的实验结果至关重要。总之，吐温20在WB实验中扮演着非常重要的角色，它的存在能够大大提高实验的准确性和可靠性。大家在做WB实验的时候，可一定要注意吐温20的正确使用哦！𐟒–

western blot中文名 Western Blot（蛋白质免疫印迹）是一种分离和鉴定蛋白质的技术，广泛应用于生物学研究。通过SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）将不同分子量和性质的蛋白质分离，然后利用转膜技术将凝胶上的蛋白质转移到硝酸纤维素或PVDF膜上。接着，使用特异性抗体与膜上的蛋白质进行孵育。孵育完成后，进行洗膜步骤，以去除未结合的抗体，确保检测结果的准确性。最后，通过显影胶片或荧光扫描技术，可以清晰地观察到结合的抗体，从而确定目标蛋白在样品中的表达情况。 Western Blot实验中的抗体与目标蛋白质的结合具有特异性，通常只能观察到一条清晰的条带。条带的粗细与蛋白质的质量成正比，通过分析条带的位置和强度，可以得出目标蛋白在给定细胞或组织匀浆中的表达水平和变化趋势。

WB原理详解，科研新手必看！ Western blot技术，也被大家称为蛋白质免疫印迹试验，是一种非常重要的实验技术。它能帮助我们鉴定并半定量分析细胞或组织中的特定蛋白质。这项技术主要包括七个关键步骤，分别是：从样本中提取蛋白质、对提取的蛋白质进行定量、利用SDS-PAGE电泳技术分离蛋白质、通过电转印将蛋白质转移到膜上、对膜进行封闭处理、让抗原与抗体发生免疫反应，以及最后进行蛋白质的检测。大多数科研新手都会接触到WB实验，今天就为大家详细解释这些步骤的原理，帮助大家更好地理解Western blot技术的运作原理。提取蛋白质 𐟧슩斥…ˆ，我们需要从样本中提取蛋白质。这个过程通常涉及到使用一些化学试剂，如蛋白酶抑制剂和去污剂，以确保蛋白质的完整性和纯度。蛋白质定量 𐟓 接下来，我们对提取的蛋白质进行定量。这一步非常重要，因为我们需要确保每个样品中的蛋白质含量一致，以便进行准确的比较。 SDS-PAGE电泳 𐟚€ 然后，我们利用SDS-PAGE电泳技术分离蛋白质。在这个过程中，蛋白质会根据其大小和电荷在凝胶中移动，从而分离出不同的蛋白质条带。电转印 𐟔„ 接下来，通过电转印将蛋白质转移到膜上。这个过程类似于复印机的工作原理，将蛋白质从凝胶转移到膜上，以便进行后续的免疫反应。封闭处理 𐟚犥œ訆œ上进行封闭处理。这一步是为了减少非特异性结合，提高实验的准确性。封闭剂通常是一些高浓度的蛋白或非特异性抗体。免疫反应 𐟦 然后，让抗原与抗体发生免疫反应。这个过程涉及到将膜与含有特定抗体的溶液孵育，从而形成抗原-抗体复合物。检测蛋白质 𐟔 最后，进行蛋白质的检测。我们通常使用一些显色剂或荧光染料来标记抗原-抗体复合物，从而在膜上形成可见的条带。通过这些步骤，我们就能准确地鉴定并半定量分析细胞或组织中的特定蛋白质了。希望这篇详细的Western blot原理解析能帮助大家更好地理解这项重要的实验技术！

电转液 Western Blot（WB），即蛋白质免疫印迹法，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中的经典实验方法。它基于抗原-抗体的特异性结合，通过SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白，最终通过显色技术检测目的蛋白。在进行WB实验的过程中，我积累了一些心得，分享如下：制胶小贴士 𐟧ꊨ‡ꥷ𑥈𖨃𖦗𖯼Œ玻璃片要完全洗干净，用纯水润洗后烘干。灌胶时不要用手拿灌胶的地方，因为手套上可能有灰尘和指纹。按比例配置下层胶，注意一定要放久一点，让下层胶完全凝固（五十分钟，如果室温低，可以加二倍的APS）。压胶时用纯水，加上层胶要速度快，然后立刻插上梳子。电泳液和电转液的使用 𐟌Š 电泳液和电转液要现配现用，旧的电泳液可以放在电泳槽外侧，内侧用新的。转膜液用新的，最多用两次，并且补无水甲醇（如果用回收的）。不同分子量的蛋白，尤其是大分子和小分子，一般要用不同的电转时间。据说分子量多少，转膜多少分钟（如果你的转膜是恒压95V），转过或者没转完，都会影响后续显色出的条带。一抗的选择 𐟒‰ 一抗不要贪图便宜买差的，CST的真的很好用，虽然贵了但是可以出结果。我们之前用affinity的孵不出来，换CST的就OK。个人经验分享 𐟓– 在进行WB实验时，自己要算好需要配几块胶，不要浪费。如果不确定，多配两毫升也是可以的。希望这些小贴士能帮助你更好地进行Western Blot实验！

蛋白质免疫印迹实验全解析蛋白质免疫印迹（Western blot）是一种在分子生物学中广泛使用的技术，用于检测和分析特定蛋白质的存在和大小。以下是该技术的基本步骤和实验设计示例： 𐟍𝯸 蛋白质样品的准备：从细胞或组织中提取蛋白质，并通过定量方法确定其浓度。 𐟏Š‍♂️ SDS-PAGE：使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）按大小分离蛋白质样品。 𐟔„ 转移：将电泳后的蛋白质从凝胶转移到一个稳定的支持膜（如硝酸纤维素或聚偏氟乙烯膜）上。 𐟛᯸ 阻断和抗体结合：使用阻断剂（如脱脂奶粉溶液）阻断膜上未被蛋白质占据的部分，然后用特异性抗体（一抗）结合目标蛋白。 𐟓𘠤𚌦졦Š—体和信号检测：使用标记有酶或荧光团的二次抗体识别一抗，通过化学发光或荧光方法检测蛋白质的存在和量。实验设计示例： 𐟎›‡：检测细胞应激条件下某特定蛋白（如热休克蛋白70，HSP70）的表达水平。 𐟌𑠧𛆨ƒž培养和处理：培养哺乳动物细胞，在正常和应激（如热冲击）条件下处理细胞。 𐟔젨›‹白质提取和定量：收集并裂解细胞，提取蛋白质，并使用BCA蛋白定量试剂盒等方法定量。 𐟏�DS-PAGE：按蛋白质样品的浓度制备样品，并在SDS-PAGE中进行电泳分离。 𐟔„ 蛋白质转移：将分离的蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素或PVDF膜上。 𐟛᯸ 阻断和抗体结合：用脱脂奶粉溶液阻断膜上非特异性位点，然后用针对HSP70的一抗孵育。 𐟓𘠤𚌦졦Š—体和信号检测：用荧光或化学发光标记的二抗孵育，然后使用适当的成像系统检测信号。 𐟓Š 结果分析：通过比较正常和应激条件下HSP70的表达量，分析应激对蛋白表达的影响。 Western blot技术在蛋白质表达分析、蛋白质修饰研究和疾病诊断中扮演着重要角色，它可以用于定性和定量地分析特定蛋白质的表达水平和变化。

选PVDF膜秘籍𐟔 聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）是蛋白质印迹中常用的一种固相支持物。由于这种膜对蛋白质具有高亲和力，且具有较高的机械强度，因此非常适合于蛋白质转移和蛋白质印迹等应用，是蛋白分离与免疫检测的理想载体。那么，如何选择合适的PVDF膜呢？主要看两个方面：孔径大小和蛋白结合能力。 𐟔 孔径大小用于蛋白质免疫印迹实验（Western Blot，WB）的PVDF膜常用规格有两种：0.22um孔径和0.45um孔径。随着膜孔径的不断减小，膜对低分子量的蛋白结合就越牢固。大于20kDa的蛋白一般选用0.45um的膜，小于20kDa的蛋白则一般用0.22um的膜。由于0.22um的PVDF膜内部表面积大约是0.45的PVDF膜的三倍，因此其吸附能力更高。总之，研究者需要根据所研究蛋白的特性和大小来选择合适的PVDF膜孔径，以获得最佳的结合效果。 𐟒꠨›‹白结合能力 PVDF膜的蛋白结合能力越强，意味着蛋白质通过与膜接触发生的疏水作用而更加牢固地吸附在PVDF膜上。目前，像国外的Millipore、GE等公司都有蛋白结合性能不错的PVDF膜，但进口膜普遍价格偏高，很多实验室经费受限。好在现在很多国产PVDF膜也做得不错，例如BIOG的PVDF膜。近期，我们实验室购入了两款PVDF膜。相同电转实验条件下，对比两个品牌的PVDF膜电转结果显示，蛋白marker的各条带均可被转到两款膜上，BIOG PVDF膜上的条带似乎更为清晰一些；观察膜后滤纸情况发现，左图部分蛋白分子已经透过某厂家的PVDF膜转移到滤纸上，而BIOG的PVDF膜则能更好地结合蛋白分子，使其保留在膜上。以上结果说明，BIOG这款PVDF膜的蛋白结合能力更强。当然，它的机械强度与坚韧度也是比较高的、耐热稳定性也不错。如果经常做WB实验的研究者，可以尝试一下。 ⚠️ 注意事项 PVDF膜具有高度疏水性，因此在浸入转印缓冲液之前必须先用甲醇浸湿来进行预处理。用甲醇处理的目的是活化膜上的正电基团，使其更容易与带负电的蛋白结合。希望这些信息能帮助你选择到合适的PVDF蛋白免疫印迹膜，让你的实验更加顺利！

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选PVDF膜秘籍！𐟤” 聚偏二氟乙烯膜（PVDF膜）是一种在蛋白质印迹实验中常用的固相支持物。由于其高蛋白亲和力，以及出色的机械强度，非常适合用于蛋白质转移和免疫印迹。那么，如何选择合适的PVDF膜呢？主要需要考虑两个方面：孔径大小和蛋白结合能力。 𐟔 孔径大小在蛋白质免疫印迹实验（Western Blot，WB）中，常用的PVDF膜孔径有两种：0.22um和0.45um。孔径越小，膜对低分子量蛋白的结合力越强。一般而言，大于20kDa的蛋白适合使用0.45um的膜，而小于20kDa的蛋白则更适合使用0.22um的膜。由于0.22um的PVDF膜内部表面积大约是0.45um的三倍，因此其吸附能力更高。总之，研究者需要根据所研究蛋白的特性和大小来选择合适的PVDF膜孔径，以获得最佳的结合效果。 𐟒꠨›‹白结合能力 PVDF膜的蛋白结合能力越强，意味着蛋白质通过与膜接触发生的疏水作用而更加牢固地吸附在PVDF膜上。目前，像Millipore、GE等国外公司生产的PVDF膜蛋白结合性能不错，但进口膜价格普遍较高。不过，现在许多国产PVDF膜也表现优异，例如BIOG的PVDF膜等。 𐟌ˆ 选择建议在选择PVDF膜时，建议先了解实验室的具体需求和预算，然后选择适合的规格和品牌。同时，也可以尝试申请试用一些品牌的PVDF膜，以便更好地评估其性能。

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【中山大学/南华大学合作发文：乳腺癌的潜在治疗靶点】本研究中，研究人员利用实时PCR、蛋白质免疫印迹实验和免疫组织化学对BC患者样本中的TBL2表达进行了分析，还采用Kaplan-Meier生存分析评估其预后意义。研究人员采用蛋白质组学分析、免疫沉淀试验和蛋白质免疫印迹法研究TBL2对AKT磷酸化激活的影响。网页链接

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