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细胞毒性实验权威发布_细胞毒性实验cck8(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-30

细胞毒性实验

CCK-8实验全解，一文搞定！在进行细胞增殖和毒性实验时，合理的实验分组至关重要。以下是详细的实验分组和操作步骤： 𐟓Š 实验分组实验组：经过药物处理或基因过表达的细胞，加入CCK-8试剂。对照组：未经过任何处理的对照细胞，加入CCK-8试剂。空白组：不含细胞的空白培养基，加入CCK-8试剂。 PBS孔：灰色区域，用于防止液体过度蒸发。 𐟔젥ꌦ–𙦡ˆ 细胞增殖实验：每孔加入约1000-2000个细胞，100培养基。分别在0、24、48、72小时检测细胞的OD值。细胞毒性实验：每孔加入约5000～10000个细胞，100培养基（具体细胞数根据细胞大小和增殖速度决定）。孔板周围加100 PBS防止过度蒸发。 𐟓 检测方法在对应的检测时间点，从培养箱取出细胞。每孔加入10的CCK-8试剂，避光反应1-4小时（具体孵育时间根据细胞数决定，一般OD值在0.8-1.5时线性最佳）。在酶标仪上450nm下检测OD值，检测前需震荡混匀。 𐟒ᠦ𓨦„事项换液或不换液均可。若检测完以后第二天还需要再次检测，则全部吸出黄色反应液，再加入新鲜培养基培养细胞。通过这些步骤，你可以更好地理解实验组和对照组的区别，并顺利进行CCK-8实验。

CCK-8实验怎么做？时间点控制很重要！最近在做细胞毒性实验，用CoCl2作为造模药物。实验步骤是这样的：每孔种1万个细胞，培养24小时后给药，再经过24小时后加入CCK-8，然后等待2小时测量吸光度。我的问题是，吸光度值怎么这么高？是不是细胞数量给多了？朋友建议我调整药物浓度，但我看了一些文章，发现时间点控制很重要。时间太短了会不会影响实验结果？之前试过给5千个细胞，结果太少。到底该怎么调整药物浓度和时间点呢？真的很迷茫，求指导！

CCK8细胞毒性实验详细步骤指南 1. 细胞种板：首先，用胰酶消化细胞，然后加入10台盼蓝和10细胞悬液，充分混匀后用细胞计数板计数。将活细胞重悬，按照每孔200的体积加入48孔板中，细胞数量根据细胞系不同而有所差异，例如SNU-387和SK-Hep1使用4万细胞，PLC/PRF/5使用2万细胞。加细胞悬液时，先在15ml管中吹匀，然后吸取到1.5ml EP管中，从9点钟方向每孔加200细胞悬液，速度均匀，不用摇晃即可均匀分布。每加3个孔（每个处理设置3个重复）后吹打均匀剩余细胞悬液，再继续加，不要使用排枪，一个孔一个孔加。培养箱过夜培养：将培养板放入培养箱中过夜培养12小时，使细胞贴壁。药物处理：弃去旧的培养基，向培养板中加入配置好的相应浓度的药物200。基线组加入200完全培养基，溶剂对照组加入200含相应浓度DMSO的完全培养基。弃去旧的培养基时，注意使用200枪头套10枪头与培养板接触吸干净，接触面积小，避免细胞丢失。再次培养：将培养板放入培养箱中继续培养48小时。 PBS清洗：弃去旧的培养基，用PBS洗2遍。使用200枪头套10枪头与培养板接触吸干净。加入CCK8：避光加入充分混匀的CCK8-完全培养基（每孔：20CCK8 + 180完全培养基），此时加3个空白孔。孵育：将培养板放入培养箱中孵育0.5-4小时。注意观察液体颜色深浅，若此时颜色尚浅，适当延长孵育时间，每半个小时看一下液体颜色，至出现明显趋势即可进行吸光度测定。吸光度测定：每孔吸取100到96孔板中，用酶标仪测定在450nm处的吸光度。空白孔OD值约为0.3，OD值在0.8-1.2较好，小于2的数据可用。数据处理：计算细胞活率，绘制图表。【摸索经验】铺板数量的摸索：根据细胞加药前的细胞密度、细胞大小、细胞生长速率与培养时间来确定铺板数量。一般来说，加药前细胞密度在50-70%较为合适。 OD值的调整：根据实验具体情况调整OD值，确保数据准确可靠。

CCK-8实验详解，必看！ CCK-8，全称为Cell Counting Kit-8，是一种广泛用于细胞增殖和毒性检测的试剂。它具有高灵敏度、无毒性、操作简便和性能稳定等优点。以下是使用CCK-8进行细胞实验的详细步骤： 𐟔젧𛆨ƒž消化与离心将处于对数期的贴壁细胞用胰酶消化，待细胞大部分脱落时，加入两倍胰酶体积的含血清培养基终止消化。将消化后的细胞转移至离心管，用PBS缓冲液冲洗细胞培养瓶，将残留细胞冲洗下来并转移至离心管。以1000r/min的速度离心3-5分钟，弃去上清液，用1ml含血清培养基重悬细胞。 𐟧𛆨ƒž计数与稀释使用细胞计数仪或牛鲍计数板对细胞悬液进行计数，根据计数结果对细胞进行稀释，推荐浓度为5～10*10^5细胞/ml。 𐟧ꠦŽ姧细胞选择96孔板，设置一个空白对照和7个实验组，每组设置3-5个复孔。每孔加入100ul稀释好的细胞悬液。在边缘孔加入2滴PBS缓冲液或100-200ul培养基，以减少蒸发带来的影响。 𐟕’ 细胞培养与药物处理将接种好的96孔板放入孵箱，培养12-24小时，待细胞贴壁良好后，吸出各孔培养基。空白组加入不含药物的培养基，实验组加入含不同浓度药物的培养基。根据药物作用时间，放入孵箱培养4小时、12小时或24小时。 𐟌ˆ CCK-8孵育与检测药物处理相应时间后，再次吸出各孔培养基，加入含CCK-8的培养基，CCK-8占细胞培养基体积的1/10。放入孵箱培养0.5-4小时，待颜色变为橙色即可检测。注意随时观察颜色变化，不宜时间过长。 𐟓Š 数据处理将96孔板取出，放入酶标仪检测，波长设为450nm。处理分析数据，得出实验结果。通过以上步骤，您可以使用CCK-8进行细胞增殖和毒性检测，希望这些信息对您有所帮助！

𐟧젃CK-8细胞实验全流程详解 𐟔슃CK-8细胞实验是一种高灵敏度、无放射性的比色检测法，用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞的数量。以下是该实验的原理和步骤： 𐟔젥ꌥŽŸ理 CCK-8细胞活力检测试剂盒含有WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2，4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐），在电子载体存在的情况下，WST-8（粉色）在电子载体（1-MethoxyPMS）的作用下被细胞内线粒体中的脱氢酶还原为黄色甲膦类染料（Formazan），并释放到细胞外溶解在培养基中，生成的甲膦物的数量与活细胞的数量成正比。 𐟧ꠥꌦ料及试剂细胞 96孔细胞培养板 CO2培养箱酒精灯移液器酶标仪 CCK-8试剂盒 𐟓 实验步骤制备细胞悬液：取生长状态良好的细胞，制备成一定浓度的细胞悬液，每孔加入100到96孔细胞培养板中。通常细胞增殖实验每孔加入2㗱0ⳤ𘪯100细胞，细胞毒性实验每孔加入5㗱0ⳤ𘪧𛆨ƒž/100（具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定）。加入待测样本：根据实验需求，在培养孔中加入0-10待测样本，继续培养适当时间。如果是做细胞毒性试验，加入毒性物质后的培养时间需要摸索。例如，可以在每孔铺40水凝胶，成胶后，再种细胞，看24h、48h等常规增殖时间。细胞铺板：根据实验目的不同需要种板块数不同，如测24h、48h、72h三个时间点数，我们则需要准备3块板。96孔板的外圈需要加上PBS，防止液体在烘箱干掉。不要在孔中生成气泡，它们会影响OD值的读数。加入CCK-8：取10CCK-8溶液加入96孔细胞培养板，在37℃培养箱中继续孵育0.5-4小时。测定吸光度。最好用双波长检测，检测波长450nm，参比波长600nm。参比波长可以过滤掉因为液体浑浊、孔板底部不干净带来的测量误差（OD450-OD600即可）。计算方法细胞存活率=[(As-Ab)/(Ac-Ab)]㗱00% 细胞抑制率=(AC-AS)/(Ac-Ab)]㗱00% As：实验孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液和药物溶液） AC：对照孔吸光度（含细胞、培养基、CCK-8溶液，不含药物） Ab：空白孔吸光度（含培养基、CCK-8溶液，不含细胞、药物）每天定点测量，孵育CCK8的时间也都保持一致。通过以上步骤，您可以准确地测定细胞增殖或毒性实验中活细胞的数量，为科学研究提供有力支持。

𐟧젃CK-8实验注意事项全解析！ 𐟔젧𛆨ƒž接种量：在96孔板中，贴壁细胞的最小接种量为1000个/孔（100培养基）。对于白细胞，接种量应不低于2500个/孔（100培养基）。若使用24孔板或6孔板，需提前计算每孔的接种量，并按培养基总体积的10%加入CCK-8溶液。 𐟒Š 药物吸收考虑：在细胞毒性实验中，药物的吸收是一个关键因素。可以在加入药物的培养基中加入CCK-8，测定450nm的吸光度作为空白对照。 𐟌᯸ 培养条件：在培养箱中孵育时，培养板最外一圈的孔容易干燥挥发，造成体积不准确，增加误差。建议最外一圈的孔只加PBS，不作为测定孔用。 ⏱️ 培养时间：加入待测物后，培养的具体时间取决于待测物质的性质和细胞的敏感性，如6、12、24、48h。实验时可以选择不同作用时间进行细胞毒性检测。 𐟌€ 培养基更换：如果待检测物质有氧化性或还原性，在加入CCK-8之前应更换新鲜培养基，以去掉待测物质的影响。如果影响较小或没有影响，可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收。 𐟕’ 显色时间：正常显色时间为1-4h，可以每半小时测定一次OD值，使其OD值保持在1-2之间后固定显色时间重复实验。 𐟔„ 延长显色时间：如果显色不够，可以延长培养时间，特别是血液细胞需要较长的显色时间（5-6h）。 𐟓 测定波长：对于高浑浊度的细胞悬液，建议采用双波长进行测定，检测波长450-490nm，参比波长600-650nm，推荐使用650nm。 𐟧Š 保存方法：若暂时不测定OD值，可以在各孔中加入10 0.1 M的HCL溶液或1% w/v SDS溶液，室温避光保存，24h内测定OD值不会发生变化。 𐟓… CCK-8保存：新鲜的CCK-8试剂为粉红色，储存时间过长则颜色加深、效率变低，最好不使用。通常情况下CCK-8试剂在0-5℃避光条件下可保存至少6个月，在-20℃下避光可以保存1年。

电子烟 vs 卷烟：谁更健康？大家好！今天我们来聊聊一个备受关注的话题——电子烟和传统卷烟，到底哪个对身体的伤害更小呢？作为一名控烟报道多年的记者，我有幸参观了RELX悦刻生命科学实验室，今天就带大家一起深入了解一下。𐟔 细胞实验结果𐟑€ 中山大学药学院的研究团队在全球毒理学权威期刊《毒理学快报》上发表了论文，指出在相同尼古丁剂量下，电子烟对多种细胞的毒性显著低于卷烟。研究还发现，电子烟导致的细胞ROS远低于卷烟，且没有启动基因层面的炎症信号通路。这证明了电子烟的细胞毒性显著低于卷烟。动物实验结果𐟐튥œ襏椸€项研究中，研究人员选用了RELX悦刻西瓜味电子烟及某款市售卷烟作为样品，将32只小鼠随机分为4组，分别暴露于洁净空气、低剂量电子烟气溶胶、高剂量电子烟气溶胶、卷烟烟雾中10周。结果显示，接触卷烟的小鼠肺系数显著升高，气管形态发生变化，而接触电子烟的小鼠肺系数无显著变化，气管形态正常。此外，卷烟暴露导致小鼠多项肺功能指标异常，但电子烟组仅有一个指标下降。病理学结果显示，卷烟和电子烟均可能导致小鼠肺部异常，但卷烟导致的损害更为明显。人体临床研究𐟧슦‚楈𛥏‘起了国内首个聚焦“电子烟安全性”的临床研究，由中山大学-雾芯科技雾化产品评价实验室承接。该研究拟招募36名有吸烟习惯的健康受试者，随机分组，观察不同产品对受试者呼吸功能、心血管功能的短期影响。虽然目前具体结果尚未发布，但这一举措无疑为电子烟的安全性提供了更多科学依据。总结𐟌Ÿ 综合以上研究结果，我们可以得出结论：在相同尼古丁剂量下，电子烟对身体的伤害显著小于传统卷烟。然而，这并不意味着电子烟完全无害，它仍然含有尼古丁等成瘾物质。因此，对于想要戒烟的朋友来说，最好的选择是完全远离任何形式的烟草制品。𐟒ꊥ𘌦œ›今天的分享能给大家带来一些有用的信息。如果你有任何疑问或想法，欢迎留言讨论哦！𐟒쀀

cck8实验步骤 𐟔즎⧴⤸同药物浓度对中性粒细胞活性的影响，我们利用CCK8试剂进行了一项实验。首先，我们准备好了原代小鼠骨髓中性粒细胞、熬制过的中药、1640培养基以及CCK8试剂。 𐟒Š在进行细胞毒性实验时，我们需要排除药物本身颜色对吸光度的影响。对于贴壁细胞，可以直接通过洗涤来去除药物，但对于悬浮的中性粒细胞，我们采用了离心的方法，以减少细胞在清洗过程中的损失。 𐟔„具体操作如下：在孵育完成后，取出96孔板，以260rcf的速度离心5-10分钟，然后抽出药物，加入100-120微升的PBS进行清洗，重复两次。最后，加入CCK8试剂继续孵育4小时，之后测量OD值。 𐟓Š通过这项实验，我们可以清晰地看到不同药物浓度对中性粒细胞活性的影响，为药物研发和评价提供有力的数据支持。

药理学细胞实验必学10大技术！细胞实验是许多实验室新手接触的第一类实验。掌握细胞培养后，接下来就是进行各种细胞实验了。以下是10个药理学细胞实验技术，助你轻松上手！基础篇 𐟔슧𛆨ƒž划痕实验细胞划痕实验（wound healing）是一种简单的方法，用于测定细胞的迁移和修复能力。它类似于体外伤口愈合模型。细胞毒性分析细胞毒性是指由细胞或化学物质引起的单纯细胞杀伤事件，不依赖于凋亡或坏死的细胞死亡机理。常用的检测方法有CCK-8法、MMT法和LDH法。细胞增殖分析 Cell Counting Kit-8（CCK-8）试剂可以方便准确地用于细胞增殖和毒性分析。细胞RNA提取实验 Trizol是一种单相溶液，由苯酚和异硫氰酸胍等组成。通过加入Trizol，能破坏细胞并溶解细胞成分，利用氯仿的萃取得到上层水相（含RNA）、界面层和下层的红色有机相（含DNA和蛋白）。得到的水层用异丙醇沉淀并经过酒精的洗涤去除杂质，能分离大小不一的各种RNA。用途包括RT-PCR、分子克隆、Northern-Blot、RNA体外转录与翻译等。细胞蛋白质提取实验细胞蛋白的提取是生物学实验中一种常见的实验方法，是很多其他生物学实验的前提。通过加入裂解缓冲溶液以及相应的蛋白酶抑制剂，能较好的保持细胞内生物大分子的天然状态。在透膜剂以及超声破碎仪的辅助下，细胞将发生破裂，内容物释放出来。用途包括蛋白免疫印迹、蛋白免疫沉淀、核浆分离等制备型和分析型实验。进阶篇 𐟚€ 细胞ROS实验活性氧（Reactive oxygen species, ROS）是超氧自由基、过氧化氢及其下游产物过氧化物和羟化物等的总称。参与细胞生长增殖、发育分化、衰老和凋亡以及许多生理和病理过程，与多种神经退行性疾病相关，如阿兹海默症、帕金森症等。通过检测ROS水平，可以评估疾病模型是否建立成功，亦可作为药效评价指标。细胞免疫化学 & 细胞免疫荧光免疫细胞化学与免疫细胞荧光两者实现的实验目的相似，但各有优缺点。细胞免疫蛋白共沉淀免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation，Co-IP）是一种利用抗原与抗体之间的专一性为基础，广泛应用于研究蛋白质与蛋白质相互作用的经典研究方法。细胞转染和分析（稳转；瞬转）细胞转染是指将外源分子如DNA、RNA等导入真核细胞的技术。这些实验技术是药理学研究中不可或缺的一部分，掌握它们将为你未来的实验室工作打下坚实的基础！

𐟔찟窠物理实验的常用仪器与软件一览在基础物理实验室中，有许多常用的实验仪器和软件，帮助科学家们进行各种实验。以下是一些常见的实验方法和仪器：基因鉴定：包括DNA提取、PCR体系、电泳技术等，用于研究基因敲除鼠、基因敲入鼠和点突变鼠等。石蜡切片/冰冻切片：通过HE染色、免疫荧光和免疫组化等技术，观察细胞和组织结构。 qPCR：包括引物设计、RNA提取、逆转录和qPCR体系配置，用于定量分析基因表达。 Western blot (WB)：从组织样本中提取蛋白质，通过制胶、电泳、转膜、孵抗体和曝光等步骤，检测蛋白质表达。 Elisa：用于微量蛋白或物质的定量分析。细胞实验：包括细胞复苏、培养、传代、冻存、计数、转染以及细胞增殖/毒性实验、迁移实验、成管实验、免疫荧光染色、流式细胞术、细胞能量代谢实验、细胞周期检测实验和细胞凋亡实验等。常用仪器：如离心机、涡旋混匀仪、普通显微镜、荧光显微镜、共聚焦显微镜、酶标仪、PCR仪、荧光定量PCR仪、流式细胞仪和海马仪等。常用软件：包括统计软件如ImageJ、GraphPad Prism和SPSS，文献管理软件如EndNote和Zotero，绘图软件如Draw.io和PS，以及引物设计软件如Primer Premier 5和SnapGene。通过这些仪器和软件，科学家们可以进行各种物理实验，探索自然界的奥秘。

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