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tris缓冲液在线播放_trishcl缓冲液配制 ph8.0(2024年11月免费观看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-11-27

tris缓冲液

「首个全脑mRNA成像技术」首个分析整个大脑mRNA的技术——TRISCO（Tris buffer–mediated retention of isHCR signal in cleared organs），它结合了Tris缓冲液和有机溶剂组织清除技术，能够在单细胞分辨率下对全脑mRNA进行成像。单细胞分辨率指的是研究人员能够精确定位每个细胞，从而深入了解神经元连接及神经回路间的复杂相互作用。在此之前，大多数空间转录组学方法常局限于薄切片或小体积样本，难以覆盖整个大脑。而来自于瑞典Karolinska医学院的研究团队，不仅克服了上述难题，还实现了全脑范围内mRNA分子的空间分布绘制。该文章的实验流程概述如下： 1. 样本固定：使用多聚甲醛固定小鼠大脑，以保持组织结构及RNA的完整性。 2. 脱脂处理：去除大脑中的脂质，提高组织透明度。 3. 漂白：去除内源性荧光，减少背景信号，增强成像对比度。 4. 封闭：使用封闭缓冲液阻断非特异性结合，降低背景噪音。 5. 原位杂交：设计并加入特异性DNA探针，与目标mRNA结合。 6. 信号放大（isHCR）：通过杂交链反应放大mRNA信号，在低温下进行以确保均匀渗透。 7. 洗涤与缓冲：使用Tris-HCl缓冲液和RNase抑制剂（PVSA）保护RNA，保持信号稳定。 8. 组织清除：采用有机溶剂逐步脱水，进一步透明化组织。 9. 荧光染色：使用核染料标记细胞核，辅助定位。 10. 三维成像：利用光片显微镜对处理后的透明大脑进行高分辨率3D成像。实验结果表明，该方法不仅在小鼠中表现出色，还适用于大鼠、豚鼠及人类胎儿大脑等多种物种和器官，如脊髓、心脏、肾脏和肺部。此外，TRISCO能够有效监测药物处理后基因表达的变化，如在抗肥胖药物Semaglutide处理的小鼠大脑中检测到c-Fos基因表达的显著增加。与传统的原位杂交和蛋白质免疫标记方法相比，TRISCO显示出高度一致性和可靠性，验证了其在空间转录组学研究中的应用潜力。感兴趣的小伙伴可以点击：网页链接

𐟧엥stern blot转膜全攻略✨ 𐟔探索Western blot的奥秘，今天我们来揭秘转膜的原理与步骤！𐟔 𐟒ᨽ쨆œ原理𐟒እˆ駔觔𕥜𚥊›，凝胶中的蛋白质在电流作用下被释放，并通过与转印膜的相互作用，被牢牢吸附和固定在膜上。这样，蛋白质就成功地从凝胶转移到了转印膜上，且保持了其在凝胶中的相对位置哦！𐟒ꊊ𐟓转膜步骤大揭秘𐟓 1️⃣ 准备转印装置：有半干法、全干法和全湿法三种选择。半干法快速方便但可能损失高分子量蛋白；全干法损失少但速度慢；全湿法则适合大面积转印，但速度最慢。 2️⃣ 调制转印缓冲液：甘氨酸缓冲液通用但可能导致蛋白迁移不均；Tris缓冲液稳定但可能导致低分子量蛋白迁移不完全。 3️⃣ 处理凝胶和转印膜：根据方法不同，有平衡、活化等处理方式。活化是让PVDF膜在无水甲醇中浸泡，增加吸附能力哦！ 4️⃣ 组装转印夹层：顺序很重要！电极-滤纸-凝胶-转印膜-滤纸-电极（半干法）；电极-垫片-滤纸-凝胶-转印膜-滤纸-垫片-电极（全干法）；海绵-滤纸-凝胶-转印膜-滤纸-海绵（全湿法）。确保紧密贴合，无气泡和干燥哦！ 5️⃣ 进行转印：选择合适的转印条件，如电压、电流、时间。电压高、时间长则转印效率高，但可能导致低分子量蛋白过度迁移；电压低、时间短则效率低，可能导致高分子量蛋白不完全迁移。 𐟎‰完成以上步骤，你的Western blot转膜就成功啦！快去检测吧！𐟎‰

SDS-PAGE电泳：操作指南 𐟔찟”찟”젒IPA裂解缓冲液：25 mM Tris-HCl pH 7.6；150 mM NaCl；5 mM EDTA；1% Triton X-100；1% 十二烷基硫酸钠（SDS）；0.1% 脱氧胆酸钠；1 mM PMSF 𐟧𙠦“作注意事项： 1️⃣ 玻璃板清洗：先用自来水彻底清洗两面，再用蒸馏水冲洗干净，确保玻璃板中没有杂质。清洗后立在筐里晾干或烘箱中烘干。 2️⃣ 配胶操作：必须在通风橱中进行。 3️⃣ 封胶与吸水：加入水或无水乙醇后建议关闭通风，吸水或无水乙醇后，建议通风吹10分钟左右。 4️⃣ 灌胶技巧：避免胶板内出现气泡。 5️⃣ 上样过程：避免样品溢出或进入其他泳道。 6️⃣ 空泳道处理：可以加入5上样缓冲液，防止相邻泳道扩散至空泳道。 7️⃣ 毒性提示：丙烯酰胺（Acrylamide）有毒性，TEMED有腐蚀性和挥发性，APS对皮肤黏膜有刺激性和腐蚀性，SDS对黏膜、上呼吸道、眼和皮肤有刺激作用，蛋白loading buffer也有毒性。 8️⃣ 加入顺序：30%Acr和TEMED建议放在倒数第二和第一的位置加入。 𐟓 操作步骤：清洗玻璃板在通风橱中配胶灌胶并避免气泡上样并防止样品溢出处理空泳道 𐟚렦𓨦„事项：丙烯酰胺（Acrylamide）有毒性 TEMED有腐蚀性和挥发性 APS对皮肤黏膜有刺激性和腐蚀性 SDS对黏膜、上呼吸道、眼和皮肤有刺激作用蛋白loading buffer有毒性 𐟓‹ 操作技巧：清洗玻璃板时要彻底，确保没有杂质。配胶时要在通风橱中进行，注意安全。灌胶时要小心，避免气泡产生。上样时要避免样品溢出，确保样品均匀分布。处理空泳道时可以加入上样缓冲液，防止扩散。 𐟔찟”찟”젥ꌦ“作时，请务必注意安全，遵守实验室规定，确保实验顺利进行。

实验室常见缓冲液配制指南 𐟍 实验室常用缓冲液的配制方法 10 mM ATP缓冲液组份浓度：10 mM ATP 配制量：20 ml 配制方法：称取121 mg Na2ATPⷳH2O，加入到50 ml塑料离心管内。加入20 ml的25 mM Tris-HCl（pH 8.0），搅拌溶解。适量分成小份后，-20℃保存。 1M DTT缓冲液组份浓度：1M DTT 配制量：20 ml 配制方法：称取3.09 g DTT，加入到50 ml塑料离心管内。加入20 ml的0.01 M NaOAc（pH 5.2），溶解后使用。通过0.22 um滤器过滤除菌。适量分成小份后，-20℃保存。这些缓冲液的配制方法简单易懂，适用于各种实验室实验。希望这些信息对你有所帮助！

Dot blot实验：鉴定分泌蛋白 Dot blot是一种半定量的蛋白质或核酸检测方法，其原理是将待测物直接滴于固相载体上，然后通过特异性抗体或探针与待测物结合，最终通过可视化方法来检测目标分子的存在与否。以下是详细的实验步骤和注意事项：实验原理 𐟧슄ot blot法主要用于鉴定分泌型蛋白的表达。通过将样品直接点样在PVDF膜上，然后与特异性抗体结合，最终通过显色反应来检测目标蛋白的存在。溶液配置 𐟧𜊔BST缓冲液：称取8.8g NaCl，加入20ml 1M Tris-HCl（pH 8.8），再加入0.5ml吐温20，充分溶解后定容至1L，4℃保存。 5%脱脂奶粉：称取5g脱脂奶粉，加入100ml TBST缓冲液，充分搅拌摇匀后放置4℃保存。操作步骤 𐟛 ️ 处理PVDF膜：剪取适当大小的PVDF膜，于甲醇中活化1分钟。然后将活化后的PVDF膜在ddH2O中清洗15分钟。样品处理：将样品在4℃低温条件下8000rpm离心15分钟，取上清作为样品（分泌型蛋白）。点样：取出活化后的PVDF膜在室温晾至半干，将收集的上清、空白对照、阳性对照分别取5ul点样至PVDF膜上，风干。封闭：待PVDF膜上样品完全干燥后，于含5%脱脂奶粉的TBST溶液中封闭，37℃孵育2小时或4℃过夜孵育。清洗：用TBST清洗PVDF膜5次，每次5分钟。一抗孵育：用含5%脱脂奶粉的TBST溶液以1:10000的稀释比稀释一抗，37℃孵育2小时或4℃过夜孵育。再次清洗：用TBST清洗PVDF膜5次，每次5分钟。二抗孵育：用含5%脱脂奶粉的TBST溶液以1:10000的稀释比稀释二抗，37℃孵育1.5小时。最终清洗：用TBST清洗PVDF膜5次，每次5分钟。曝光：用滤纸吸干PVDF膜上的TBST溶液，滴加ECL超敏显色剂（A液：B液=1:1），提前将化学曝光仪预冷，进行曝光，观察并记录结果。注意事项 ⚠️ 操作过程中，手不能直接接触PVDF膜，以免蛋白污染或造成蛋白降解。脱脂奶粉封闭一定要充分，否则容易造成膜与蛋白的非特异性结合，膜上会出现杂点或假阳性，干扰试验结果。一抗浓度与二抗浓度不宜过高，否则容易造成高背景或者杂点。适宜浓度的选择，可以通过不同浓度组合的预试验进行确定。曝光时，时间的确定应该具体情况具体分析，需要一定的实践经验积累。 ECL超敏发光液需要现配现用。通过以上步骤，你可以成功鉴定分泌型蛋白的表达情况。希望这篇攻略对你有所帮助！

WB实验注意事项：从样品准备到加样技巧 ### 蛋白样品准备 𐟧ꊦ 𗥓质量首先，确保你抽取的蛋白样品质量过关。蛋白含量要足够，变性要充分，PH值最好在7~8之间。这些都会直接影响样品浓缩的效果。此外，还要注意蛋白样品是否降解，目的蛋白是否已经充分抽取。细胞水平WB 如果你需要在细胞水平做WB，通常5㗱06个细胞提取的蛋白就足够用了。小分子量蛋白（10KD）选择孔径0.22um的PVDF膜或NC膜，转膜时间可以缩短。你也可以选择Tricine-SDS-PAGE体系。选择PSQ膜，同时缩短转移时间。或者将两张膜叠在一起再转移。其他步骤按常规操作即可。大分子量蛋白（200KD）做200KD蛋白的WB时，分离胶最好选择>7%的。剥胶时要特别小心。转移时间需要相应延长，并且最好做分子量参照，否则出现杂带不好分析。转膜液中甲醇含量可以适当降低，推荐使用湿装转膜，效率更高。制胶 𐟧𔊥‡胶质量不连续SDS-PAGE对凝胶的要求较高。分离胶的PH值应在8.8左右，浓缩胶的PH值应在6.8左右，最好不要差过0.5个PH单位。这是因为这个PH条件是保证电泳液中的甘氨酸不电离的必要条件，也是保证能充分压缩样品的前提。因此，制备凝胶时所用Tris-HCl缓冲液的PH值是否稳定是很重要的。加水压胶时的问题加水时要沿着玻璃板缓慢流，不能对着胶冲。加水满后一定要保证上方水平面是平齐的。加胶时要避免气泡，也要避免加胶太慢而提前凝固。有人用异丙醇封胶后左右晃一下，效果更好。加样 𐟒‰ 点样技巧样品尽量不要与电泳液混合，这样能提高浓缩效果。因为电泳液PH值为8.3，而样品为7.5，混合后会影响到样品的PH值，进而影响浓缩效果。建议用长枪头或加样器，轻轻将样品加到孔的底部。增加上样量如果上样量超载，可以浓缩样品，或者根据目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般超载30%是不会有问题的。如果已经超了不少，而且小分子量的也要，可以考虑加大胶的厚度，试试1.5mm的。希望这些小贴士能帮到你，让你的WB实验更加顺利！𐟔쀀

实验室用水大揭秘：不同水的用途与区别 𐟚𐠨’𘩦水 (Distilled Water)：通过蒸馏过程制备，去除水中的大部分溶解固体和杂质，适用于需要高纯度水的实验。 𐟒砥Ž𛧦𛥭水 (Deionized Water, DI Water)：通过离子交换树脂去除水中的离子，如钙、镁、钠等，纯度高于蒸馏水，常用于更精细的化学和生物实验。 𐟌€ ddH2O (Double-Distilled Water)：经过两次蒸馏过程，去除更多杂质和挥发性物质，适用于敏感的化学反应或光谱分析。 𐟧ꠦ— 菌水 (Sterile Water)：经过特殊处理，如过滤或高压灭菌，确保水中不含有任何微生物，常用于细胞培养和微生物学实验。 𐟌Š 反渗透水 (Reverse Osmosis Water, RO Water)：通过单级反渗透系统制备，去除水中95%以上的溶解固体和大部分有机物质，适用于需要较高纯度水的实验室和工业过程。 𐟔 双级反渗透水 (Double RO Water)：通过两级反渗透系统制备，进一步提高水的纯度，去除更多溶解固体和有机物质，通常用于需要极高纯度水的实验室应用。 𐟧ꠄEPC水 (Diethylpyrocarbonate Water)：含有二乙基焦碳酸酯的水溶液，用于防止RNA降解，常用于分子生物学实验中的RNA提取和处理。 𐟧ꠔE缓冲液：由Tris和EDTA配制而成，主要用于溶解核酸，能稳定储存DNA和RNA，是一种能在加入少量酸或碱时抵抗pH改变的溶液。

游离DNA保存管，DNA的守护神！你有没有想过，DNA样本在存储和运输过程中可能会遇到哪些挑战？比如，长时间放置会不会让DNA降解？或者在运输过程中，微生物会不会干扰到DNA的完整性？别担心，今天我就来给你介绍一下一个非常实用的工具——游离DNA保存管。什么是游离DNA保存管？简单来说，游离DNA保存管就是为了保护你的DNA样本而设计的。它的主要作用是防止DNA在长时间存储或运输过程中被损坏或降解。这种保存管通常含有一种特殊的溶液，这种溶液具有以下几种功能：稳定化作用 𐟌€ 一些添加剂，比如DNAzol或TE缓冲液（Tris-EDTA buffer），能帮助稳定DNA分子，防止它们在存储过程中发生化学或生物性的降解。防止污染 𐟚늠 保存管中的某些化学物质可以防止微生物、酶（如核酸酶）或其他化学物质的干扰，这些因素可能会降解或损坏DNA。方便存储和运输 𐟚š 使用游离DNA保存管，你可以在室温或较高温度下稳定保存DNA样品，也方便样品的运输，特别是当你没有冷链运输条件时。为什么选择合适的保存管很重要？选择合适的游离DNA保存管可以节省样品处理的时间、金钱和劳动，并提高DNA检测和分析的成功率。毕竟，DNA样本的完整性和稳定性是实验成功的关键。国盛医学的独特设计国盛医学研发的游离DNA保存管采用了独特的抗凝剂和保鲜剂，不仅能常温下保存血浆中的游离DNA（cfDNA, ctDNA），还能稳定有核细胞，防止它们释放细胞基因组DNA，从而稀释目标游离DNA。总结总之，选择合适的游离DNA保存管是确保你的DNA样本在存储和运输过程中安全、稳定的关键。希望这篇文章能帮你更好地了解这个重要的工具！𐟔좜耀

𐟧ꥰ分子蛋白转膜不再难！ 𐟑‹科研小伙伴们，是不是对小分子蛋白的转膜感到头疼呢？别担心，这里有超实用的技巧帮你轻松搞定！ 1️⃣ 𐟎‰选对膜材是关键！对于小分子蛋白，0.2 PVDF膜或NC膜可能是更好的选择，因为它们的孔径更小，更易捕捉小分子蛋白。 2️⃣ 𐟓ˆ精细调整转移条件也很重要。如果条带模糊或看不到，可以适当降低转移电压，延长转移时间，让小分子有足够的时间“搬家”。 3️⃣ 𐟧ꧼ“冲液pH要匹配。蛋白质的等电点与缓冲液pH匹配度影响转移效率。试试pH 8.3-9.0的Tris-Glycine缓冲液或pH 10.5的CAPS缓冲液，更适合小分子蛋白。 4️⃣ 𐟒–温柔对待膜和凝胶。使用湿式转移避免机械损伤，确保膜与凝胶紧密接触，无气泡干扰。 5️⃣ 𐟔检测系统也要灵敏。选择灵敏度高的化学发光检测系统，并适当延长曝光时间，让条带更清晰。 6️⃣ 𐟌Ÿ做好每一步细节把控。从SDS-PAGE到转膜，再到封闭、孵育抗体，每一步都要细心操作，确保实验条件一致。 𐟒ꨀ心和细致是关键！先做预实验摸条件，如果第一次不成功，不要灰心，调整参数后再次尝试。希望这些小技巧能帮你攻克小分子蛋白转膜难关！加油！𐟒ꀀ

琼脂糖凝胶电泳检测dna实验报告 𐟧 琼脂糖凝胶电泳（Agarose gel electrophoresis, AE）是一种利用琼脂糖作为支持物的电泳技术，主要用于分离、鉴定和提纯核酸（DNA或RNA）。琼脂糖是一种从琼脂中提取的多糖，具有良好的亲水性，但不带电荷，是理想的电泳介质。 𐟔𕠧𜨄‚糖浓度的影响琼脂糖的百分比越高，凝胶的孔径越小，能够通过的分子也就越小，因此迁移速度会减慢。标准琼脂糖浓度为1.0%，适用于DNA凝胶电泳。高浓度琼脂糖有利于小条带的分辨率，而低浓度则有助于大分子量条带的分离。 𐟔𕠧𜓥†𒦶𒧚„选择 TAE缓冲液（Tris-acetate-EDTA buffer）：常用于DNA或RNA的凝胶电泳，提供一定的导电性，促进DNA分子的迁移。 TBE缓冲液（Tris-borate-EDTA buffer）：主要用于DNA电泳，适用于PAGE胶和琼脂糖凝胶。 𐟌™ 缓冲液的选择较低浓度的胶适用于提高大分子量核酸的分辨率，推荐使用TAE缓冲液。较高浓度的胶有助于提高小分子量核酸的分辨率，推荐使用TBE缓冲液。 𐟔𕠧”𕥎‹的选择推荐在凝胶电泳装置内使用4–10 V/cm的电压（正极和负极之间的距离，不是凝胶长度）。过低的电压会导致迁移率降低，条带因扩散而变宽；过高的电压则可能降低条带分辨率，因为凝胶过热。

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