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coip实验权威发布_coip实验原理(2024年11月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-28

coip实验

如有泛素相关问题，欢迎留言探讨。 #泛素化修饰#⠂ #科研#⠂ #研究生#⠂ #coip实验#⠂ #chip实验#⠂ #wb实验#

CoIP实验方法详细步骤分享，希望能够帮到有需要的您。如有相关实验问题，欢迎留言探讨。 #科研#⠣实验⠣coip实验#⠂ #实验外包#⠂ #研究生#

SOC细胞中MYH10与MYH9结合 Biogrid分析发现MYH9是MYH10的候选互作蛋白。早期研究已证实MYH9通过调节Wnt/catenin通路和EMT信号促进浆液性卵巢癌（ SOC ）的增殖和转移。外源和内源Co‐IP实验显示MYH10功能域与MYH9互作（图1a-d）。GST pull-down分析也表明MYH10可与MYH9直接结合（图1b）。临床样本分析发现MYH10和MYH9水平正相关，MYH10+/MYH9+共表达是一个独立的预后因素（图1e）。结果表明MYH10与MYH9直接结合。全文分享请查阅：【《Adv Sci》解读：泛素化机制还可以这样做！MYH10招募去泛素化酶USP45，抑制SNAIL泛素化降解，促进卵巢癌顺铂耐药】。 #科研#⠂ #coip实验#⠂ #泛素化修饰#⠂ #实验室日常#

分子互作蛋白筛选探索1：调控水平确认。研究发现ITPKB蛋白（不是mRNA水平）在复发性组织和TMZ耐药细胞中显著上调（图1a-b），表明ITPKB蛋白的升高是转录后调控的结果。探索2：互作泛素酶筛选。CoIP-MS分析发现泛素连接酶Trim25可能为候选互作蛋白（图1c）。调控蛋白积累的互作蛋白，优选泛素连接酶，读者朋友们可以借鉴。验证1：CoIP验证。内源anti-Trim25 Co-IP实验证实Trim25与ITPKB的结合，与敏感细胞相比，在耐药细胞中相互作用更弱（图1d）。同时内源anti-Trim25 Co-IP实验还发现敏感细胞经TMZ处理后，ITPKB与Trim25结合能力下降（图1e）。外源Co-IP实验也证实TMZ处理减少Trim25与ITPKB相互作用（图1f）。这是环境条件下互作机制研究的既定动作，读者朋友们可以参考。验证2：关键结构域互作验证。ITPKB蛋白是一种激酶，TRIM25和IPTKB的互作是否通过调控激酶结构域发挥功能，需要进一步探究。作者通过构建系列ITPKB截短突变体，进行Co-IP检测分析，结果表明ITPKB激酶结构域是其与Trim25结合所必需的(图1g-h)。表明Trim25与ITPKB的这种相互作用，是通过ITPKB的激酶结构域进行相互作用的。这些实验进一步证明了TRIM25可能是调控IPTKB蛋白积累的关键上游调控蛋白。全文分享请查阅：【国刊之光《STTT》：磷酸化与泛素化碰撞！Trim25靶向降解ITPKB 的能力，被磷酸化水平拿捏，从而触发胶质瘤TMZ耐药】。 #科研#⠣文献阅读#⠂ #coip实验#

MHC如何加重小鼠的心力衰竭？ MHC K1897R突变减少了MHC与Titin的结合，加重了小鼠的心力衰竭为了确认MHC K1897乳酸化对MHC与Titin的结合的影响，构建MHC K1897R突变体，进行Co-IP分析，发现与WT相比，MHC K1897R与Titin相互作用在生理和病理条件下均显著降低（图1a-b）。MHC K1897乳酸化的下调直接导致心力衰竭（图1c-d）。文献解读全文分享可查阅：【《Cell Res》解读：“乳酸化修饰”调控心力衰竭新机制】。如有相关科研问题，欢迎随时留言探讨。 #科研日常#⠣研究生#⠂ #乳酸化修饰#⠂ #coip实验#

ABHD11-AS1如何介导CD44v6上调？ IP实验表明，过表达ABHD11-AS1增加核PRPF19水平(图1a)，而SART3或USP15敲低或过表达ABHD11-AS1反义或SART3结合位点突变体降低核PRPF19水平(图1b-e)。结果表明，ABHD11-AS1、SART3或USP15可改变细胞核PRPF19的构象和激活状态。为了研究RNA剪接的潜在变化，敲减PRPF19或USP15进行RNA-seq，分析剪切事件。既往研究表明，CD44变异体6 (CD44v6)的表达在癌症干性中发挥重要作用。敲低USP15或PRPF19显著降低CD44v6水平(图1-g)。沉默USP15或PRPF19可逆转ABHD11-AS1过表达对CD44v6水平的影响(图1f)。表明USP15核定位增加及与PRPF19互作在ABHD11-AS1介导的CD44v6上调中起关键作用。通路检测发现，ABHD11-AS1上调CD44v6可激活Wnt/catenin通路，促进肿瘤发生(图1i)。全文分享可查阅：【《Environ Int》解读：lncRNA调控剪切！ABHD11-AS1与SART3互作并调控CD44 RNA剪接促进肺癌发生】。如有相关科研问题，欢迎留言探讨。 #coip实验#⠂ #wb实验#⠂ #pulldown#⠂ #文献阅读#

科研干货|ChIP-Seq/qPCR，CoIP-Mass/WB CoIP-Mass和CoIP-WB检测方案； CoIP-Mass和CoIP-WB应用案例。 ChIP-Seq检测和ChIP-qPCR验证方案； ChIP-Seq检测和ChIP-qPCR验证案例。广州基云，在IP互作组检测和关键机制分子筛选验证领域，具有丰富的经验，助力互作机制研究。如有相关科研问题，欢迎留言探讨。 #科研#⠣研究生#⠂ #coip实验#⠂ #chip实验#⠂ #实验外包#

HECTD3与TRAF3-TBK1复合物相互作用为了研究病理内源性的HECTD3和TRAF3相互作用的调控效应，利用F. novicida和对照分别处理BMDMs细胞，进行Co-IP实验检测，结果发现：只有在F. novicida感染情况下，HECTD3的缺失，显著抑制TRAF3和TBK1的互作(图2a)。这些结果表明HECTD3是介导F. novicida感染诱导TRAF3-TBK1相互作用的关键调控因子。进一步Co-IP实验还发现HECTD3缺失导致F. novicida感染诱导的内源性TRAF3的泛素化降低(图2b)，表明HECTD3介导的TRAF3多泛素化修饰是F. novicida感染诱发激活TBK1的重要机制。全文分享可查阅：【《J Clin Invest》解读：蛋白互作泛素化修饰机制经典案例！泛素连接酶HECTD3调控病原菌感染诱导IFN-I产生的机制】。如有相关科研问题，欢迎随时留言探讨。 #科研#⠂ ⠣coip实验#⠂ ⠣研究生日常#⠂ ⠣泛素化#

懒人必备：磁珠版COIP实验全攻略嘿，大家好！今天咱们来聊聊COIP（免疫共沉淀），特别是那种懒人也能搞定的磁珠版COIP。简单来说，COIP就是通过抗体把蛋白质A拉下来，然后用另一种抗体检测是否拉到了蛋白质B。如果检测到了，那就说明A和B是有相互作用的，至于这种作用是间接的还是直接的，咱们就不知道了，只能确定它们有联系。实验步骤：养细胞：先用10cm的培养皿养细胞，处理完后尽量让细胞长满，细胞越多越好。裂解细胞：裂解液我推荐用不含去污剂的，比如碧云天的NP40，加入250ul裂解液（含蛋白酶抑制剂），冰上裂解10-15分钟，期间记得涡旋振荡几次。然后12600g，4Ⱗ滥🃱0-15分钟。分份：离心的上清液分成三份，每份40ul加5㗬oading buffer，95Ⱕ˜性10分钟，-20Ⱔ🝥혥䇧”诼Œ这就是Input组。剩下的上清液分成两份，一份为IgG组，一份为IP组，每组加裂解液补足至1ml。拉蛋白：如果用A蛋白的抗体去拉，接下来，在IP组的管子里加2ugA的一抗（一般为4-5ul），在IgG组的管子里加和A同种属来源的IgG蛋白（市面上有卖），然后每个管子加40ul磁珠。我习惯白天冰上摇6-8小时。清洗磁珠：时间到了后，用磁力架吸附磁珠，取走裂解液，加PBS清洗，吸附磁珠，弃PBS，重复4-5遍。变性：清洗完后，加入1㗬oading buffer 40-50ul，95ⰱ0分钟变性，让蛋白从磁珠上脱离下来。磁力架吸附磁珠，将变性的蛋白转移至新的EP管，-20Ⱕ䇧”裀‚ WB：第二天将所有组一起跑WB，用B的抗体检测B是否存在。小贴士细胞处理：尽量让细胞长满，这样蛋白含量高。裂解液选择：不含去污剂的裂解液效果更好。清洗磁珠：一定要彻底清洗，不然会影响实验结果。有问题随时私聊我哦！希望这篇攻略能帮到你们，祝大家实验顺利！𐟒ꀀ

MYH10去泛素化SNAIL蛋白为了明确MYH10在SOC细胞中的作用机制，利用Biogrid分析发现SNAIL是MYH10的候选作用蛋白。检测发现MYH10敲减仅下调SNAIL的蛋白水平（图1a-b）。CoIP实验发现MYH10与SNAIL互作（图1c）。MYH10是否通过抑制SNAIL的泛素化减少其降解呢？使用anti-SNAIL进行IP实验，使用anti-UBC进行WB检测，结果发现MYH10显著降低SNAIL的泛素化水平（图1d）。并且MYH10敲低能减少CHX和MG132处理的SOC细胞中SNAIL的稳定性（图1e）。表明MYH10与SNAIL互作，影响SNAIL蛋白的稳定性。全文分享请查阅：【《Adv Sci》解读：泛素化机制还可以这样做！MYH10招募去泛素化酶USP45，抑制SNAIL泛素化降解，促进卵巢癌顺铂耐药】。如有泛素相关科研问题，欢迎来询探讨。 #泛素化修饰#⠂ #WB#⠂ #coip实验#⠂ #文献#⠂ #实验代做#

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