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dab染色前沿信息_特殊染色(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-02

dab染色

原位杂交实验全攻略：从准备到显色 𐟧ꠥꌥ‰准备在进行原位杂交实验之前，你需要准备一系列试剂和耗材。试剂包括2㗣€0.5㗣€0.2㗧š„SSC缓冲液、DAB试剂盒和原位杂交试剂盒（包含蛋白酶K、预杂交液、杂交液、封闭液、兔抗地高辛抗体、HRP-山羊抗兔IgG）。仪器和耗材则有赛默飞F1单道移液器、QSP盒装吸头、湿盒、切片缸、温箱、硅化盖玻片等。 𐟔젦 𗥓玻片制备首先，你需要制备细胞涂片。将2-3滴PBS重悬的细胞液滴在涂有多聚赖氨酸的载玻片上，然后在培养箱中干燥5分钟。 𐟌🠦‚交前处理接下来，进行杂交前处理。滴加1/mL的蛋白酶K稀释液，37Ⰳ下细胞通透30分钟，然后用0.1mol/L的甘氨酸溶液终止消化。 𐟌€ 预杂交用吸水纸轻轻吸去多余的液体，滴加20的预杂交液，盖上硅化盖玻片，37Ⰳ湿盒孵育30分钟。然后用0.2㗓SC缓冲液室温洗3次，每次洗涤5分钟。 𐟌᯸ 杂交擦去周围多余的液体，滴加20的杂交液，盖上硅化盖玻片，将切片置于90Ⰳ环境下孵育10分钟。接着将切片置于盛有2㗓SC缓冲液的湿盒中，37Ⰳ孵育过夜。 𐟌Š 杂交后处理轻轻揭去盖玻片，42Ⰳ预热的2㗓SC缓冲液洗2次，每次5分钟；37Ⰳ预热的0.5㗓SC缓冲液洗1次，每次15分钟；0.2㗓SC缓冲液洗1次，每次15分钟。然后滴加封闭液37Ⰳ孵育30分钟，去除多余的液体。接着滴加兔抗地高辛IgG，湿盒37Ⰳ孵育30分钟。轻轻去除多余的液体，浸泡在PBS中5分钟。最后滴加HRP-山羊抗兔IgG，将切片放入湿盒中37Ⰳ孵育30分钟。 𐟎蠦˜𞨉𒊥Ž𛩙䥤š余的液体，滴加新鲜的DAB工作液显色20分钟，用蒸馏水终止显色。最后在显微镜下观察结果。 𐟓Š 结果分析经过DAB染色后，实验组阳性信号呈棕黄色，位于胞浆中。

病理切片染色技术服务全解析病理染色在医学诊断中扮演着至关重要的角色。通过染色，医生可以观察到细胞和组织的微观结构，从而诊断出各种疾病。不同的染色方法可以揭示组织中的不同成分，以下是部分常见的病理染色方法： 𐟔 HE染色 𐟔 Masson染色 𐟔 PAS染色 𐟔 阿利新蓝染色 𐟔 AB-PAS染色 𐟔 天狼猩红染色 𐟔 甲苯胺蓝染色 𐟔 尼氏染色 𐟔 肥大细胞染色 𐟔 油红O染色 𐟔 番红固绿染色（骨组织） 𐟔 LFB髓鞘染色 𐟔 茜素红染色 𐟔 EVG染色 𐟔 Trap破骨细胞染色 𐟔 抗酸染色 𐟔 ALP碱性磷酸酶染色 𐟔 瑞士姬姆萨染色 𐟔 Von Kossa染色 𐟔 高尔基染色（全景扫描） 𐟔 普鲁士蓝染色 𐟔 DAB加强法普鲁士蓝染色 𐟔 苯胺蓝染色 𐟔 黑色素染色 𐟔 网状纤维染色 𐟔 刚果红染色 𐟔 Glodner三色法染色 𐟔 维多利亚蓝染色 𐟔 Š乳糖苷酶染色 𐟔 ATP染色 𐟔 甘氨酸银染色（镀银）通过这些染色方法，医生可以更准确地诊断疾病，制定治疗方案。

免疫组化定量分析：从零开始到高手指南免疫组化（IHC）是病理学中常用的一种技术，用于检测组织中的特定蛋白质。在进行免疫组化分析时，定量是一个关键步骤，因为它可以帮助我们了解蛋白质的分布和表达水平。今天，我将带你一步步完成免疫组化的定量分析，特别是使用ImageJ和Fiji软件。第一步：图像去卷积 𐟓𘊩斥…ˆ，我们需要对图像进行去卷积，以分离出不同的染色层。在ImageJ中，选择“Image”菜单下的“Color”选项，然后选择“Colour Deconvolution”。这一步的目的是将细胞核染色（通常是蓝紫色）从总染色中扣除，留下DAB显色信号（通常是红棕色）。第二步：选择窗口 𐟪Ÿ 在去卷积后，你会看到多个窗口，选择第二个窗口，通常是红棕色的那个。这个窗口将包含我们感兴趣的DAB信号。第三步：转换灰度为光密度值 𐟌ˆ 接下来，我们需要将灰度信号值转换为光密度值（OD）。这可以通过“Analyze”菜单下的“Calibrate”功能来实现。在弹出的窗口中，选择“Uncalibrated OD”，然后点击OK。这一步非常关键，因为它将灰度值转换为光密度值，这是定量分析的基础。第四步：调整阈值 ⚙️ 调整阈值是定量分析的关键步骤。通过“Image”菜单下的“Adjust”选项，选择“Threshold”。手动调整阈值上下限，使其覆盖我们感兴趣的区域。注意不要点击Apply，因为这样会将图像转换为二值信号图，失去灰度信息。第五步：定量分析 𐟓Š 最后，通过“Analyze”菜单下的“Measure”功能进行定量分析。在弹出的窗口中，可以看到Area（阈值区域覆盖的面积）、Mean（阈值区域的平均OD值）、Min（阈值区域的最小OD值）、Max（阈值区域的最大OD值）以及IntDen（阈值区域的总OD值）等参数。这些参数将为我们提供关于蛋白质表达的重要信息。注意事项 ⚠️ 确保使用Fiji版本：Color Deconvolution功能在Fiji（ImageJ的高版本）中才有，旧版ImageJ不支持此功能。批量处理：可以使用宏功能进行批量分析，提高效率。 Calibrate步骤：这一步非常关键，如果不进行Calibrate，统计得到的是灰度值，而不是OD值。检查结果：通过检查Min和Max值，可以自我验证信号值的准确性。灰度值的范围在[0,255]，而OD值一般不会超过5。通过以上步骤，我们可以使用ImageJ和Fiji软件进行免疫组化定量分析，深入了解组织中特定蛋白质的分布和表达水平。希望这篇指南能帮助你更好地理解和掌握免疫组化定量分析的技术。

免疫组化实验全解，必看！ 𐟔젦Š€术原理：免疫组化是利用免疫学基本原理——抗原抗体反应，通过化学反应使标记抗体的显色剂（如荧光素、酶、金属离子、同位素）显色，从而确定组织细胞内的抗原（多肽和蛋白质），进行定位、定性和定量研究。 𐟓 实验步骤：切片脱蜡至水抗原修复 3%双氧水处理，画圈，血清封闭一抗4Ⰳ过夜孵育二抗室温孵育显色苏木素染核，脱水，透明封片，显微镜观察 𐟓栩€样运输要求：石蜡切片制片：组织取样后应立即放入固定液中，避免冻存。冰冻切片制片：应取用新鲜组织，以免抗原丢失。组织蜡块可长期保存，但石蜡切片理论上不超过半年，冰冻切片不超过3个月。 𐟓 注意事项：苏木素复染时间需摸索，尤其是阳性染色在细胞核上。 DAB显色时间需优化，镜下观察达到阳性染色明显但背景不深。抗体孵育时间和浓度需摸索，尤其一抗孵育最好在4度过夜。切片脱蜡和水化要充分，加反应液时要覆盖组织充分，每次加液前甩干洗涤液，防止干片。用组化笔画圈时尽量画大一点，否则墨水排斥液体，引起片周边干片。 𐟤” 常见问题：片子着色不均匀？脱蜡不充分：可以60℃烤20分钟，立即放入新鲜的xylene。水化不全：应经常配制新鲜的梯度乙醇。抗体没混匀：用移液器充分混匀一抗/二抗等试剂。抗体孵育时，切片放倾斜。抗体孵育后PBS冲洗不充分。制片厚薄不均匀：染片盒不平，切片倾斜。 𐟌᯸ 一抗从4℃拿出后，为什么有人说要37℃复温？防止切片从4℃直接放入PBS易脱片。使抗原抗体结合更稳定。一般不需要，但对表达较弱的抗原可能有用。4℃和37℃时分子运动方式不同，前者分子碰撞机率和运动速度小于后者，后者结合更快，但敏感性也提高了并易造成非特异染色。 𐟌미 切片染色后背景太深，不易区分特异性与非特异性着色？抗体孵育时间过长、抗体浓度高易增加背景着色。这可通过缩短一抗/二抗孵育时间、稀释抗体来控制。一抗用多克隆抗体易出现非特异性着色，建议试用单克隆抗体。

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