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荧光素酶报告基因新上映_荧光素酶报告基因检测(2024年12月抢先看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-11-29

荧光素酶报告基因

萤（荧）光素（Luciferase）是自然界中能够产生生物发光的酶的统称，其中最有代表性的是来自萤火虫体内(Fireﬂy)和海肾(Renilla)体内的两类萤光素酶，分别命名为F-Luciferase和R-Luciferase。在荧光素酶的催化下，荧光素底物可以高效的转变成氧萤光素，同时发出强烈的光实验原理：荧光素酶报告基因检测的原理‌是通过检测荧光素酶的活性来反映基因表达的情况，将荧光素酶基因与目的基因或其调控元件（如启动子、增强子、3’UTR等）连接在一起，构建成报告基因载体，转染或转化到目标细胞或生物中。当目的基因或其调控元件受到内外因素的影响而发生表达变化时，相应地也会影响荧光素酶基因的表达水平，通过向样品中加入特定的底物，使荧光素酶催化底物氧化发出生物荧光，并利用专用仪器（如发光仪、微孔板读板仪等）检测荧光信号的强度，从而反映目的基因或其调控元件的活性。荧光素和荧光素酶这一生物发光体系，可以极其灵敏、高效地检测基因的表达。是检测转录因子与目的基因启动子区DNA相互作用的一种检测方法 #汉恒生物##科研##荧光素酶基因检测##荧光素酶#

基因功能研究中的报告基因技术全解析报告基因（reporter gene）是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，其表达产物非常容易被鉴定。通过将报告基因的编码序列与基因表达调节序列融合形成嵌合基因，或与其他目的基因融合，在调控序列的控制下进行表达，从而利用其表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。 𐟌Ÿ GFP报告基因绿色荧光蛋白（GFP）是一种存在于腔肠动物体内的生物发光蛋白，是目前应用最广泛的发光蛋白之一。GFP可作为报告基因用于检测基因表达或调控，或作为融合标签来检测蛋白质分子的定位、迁移、构象变化以及分子间的相互作用，或靶向标记某些细胞器。用395nm的紫外线和475nm的蓝光激发，GFP可在508nm处自行发射绿色荧光，无需辅助因子和底物。 𐟌Ÿ 荧光素酶报告基因系统荧光素酶的种类很多，其中应用较为广泛的是萤火虫荧光素酶（Firefly luciferase，FLUC）和海肾荧光素酶（Renilla luciferase，RLUC）。 𐟌Ÿ GUS报告基因 GUS（葡萄糖醛酸酶）的组织化学法检测：这种酶与5-溴-4-氯-3-吲哚-葡萄糖苷酸（X-Gluc）一起孵育时，会将X-Gluc代谢为蓝色产物。 GUS的分光光度法检测：GUS能与底物4-甲基伞型酮-葡萄糖醛酸苷（MUG）反应并产生荧光物质4-甲基伞型酮（MU），MU的激发波长为365nm、发射波长为456nm，可由分光光度计或酶标仪测出。 𐟌Ÿ LacZ 基因 LacZ基因编码大肠杆菌水解酶半乳糖苷酶（galactosidase，gal），gal可将无色化合物X-gal切割成半乳糖和深蓝色物质5-溴-4-靛蓝，其作为报告系统被广泛应用于细菌、酵母、哺乳动物细胞中。蓝白斑筛选是一种利用此报告系统来筛选重组子的方法。使用可编码gal ‰‡段的菌株作为宿主，使用可编码gal ‰‡段的质粒作为空载，其多克隆位点（MCS）位于编码‚𝩓𞧚„区域内，因而当空载转入宿主菌中，‰‡段和‰‡段互补形成具有酶活性的gal，在加入X-gal的培养基上，菌斑呈蓝色，而由于目的基因的插入会破坏‰‡段，不能形成具有酶活性的gal，因而重组子呈现白色。

吉满优试剂 | 品牌周1周年，温暖你，包裹你又到了一年中四季随机播放的季节换季带来的温差总让人措手不及吉满优试剂本月特别挑选【卡皮巴拉午睡毯二合一】多功能：抱枕+靠垫+空调毯多场景：居家+办公+车载...谁也不能拒绝毛茸茸的包裹感活动时间：10月21日-10月25日活动形式：限量抢购，前20名下单试剂产品获赠好礼活动礼品：卡皮巴拉午睡毯二合一吉满目前有哪些试剂产品呢？ 1、细胞功能检测相关试剂细胞活力检测相关【GMTiterTM 发光法细胞活力检测试剂盒、CCK8检测试剂盒】荧光素酶检测相关【GMOne-Step 萤光素酶报告基因检测试剂盒2.0升级版、GMBrightOne-Step 荧光素酶报告基因检测试剂盒、GMSteadyOne-Step 荧光素酶报告基因检测试剂盒、双荧光素酶（Dual Luciferase）报告基因检测试剂盒、钾盐、钠盐】 2、病毒生产相关试剂慢病毒包装试剂盒、慢病毒浓缩试剂盒 3、细胞培养相关试剂培养基、抗生素、支原体喷雾、转染试剂 4、质控检测试剂 gDNA标准品、ctDNA标准品 5、蛋白、抗体标签抗体、内参抗体、药物靶点阳性抗体、ADC阳性对照抗体、ADC阴性对照抗体、抗毒素抗体

𐟔 升级你的筛选工具！ 𐟎‰ 还在用报告基因做小分子筛选？是时候考虑升级你的工具了！虽然荧光蛋白或荧光素酶的报告基因系统很受欢迎，但它有一些局限性哦。 𐟘” 比如，它不能完美反映基因的真实表达情况，只能检测1-2个基因，而且操作繁琐，不适合高通量筛选。 𐟤” 那怎么办呢？别担心，“昕瑞再生”推出了Drug-seq2技术，它采用3’端测序，无需提取RNA，就能精准定量RNA，而且支持少量细胞和大规模样本的高通量qPCR试剂盒哦！ 𐟎‰ 是不是听起来很心动？现在就开始行动吧，让你的筛选工作更上一层楼！𐟌Ÿ

近日，中国医学科学院系统医学研究院/苏州系统医学研究所马烽研究员团队，联合苏州大学戴建锋教授以及军事医学科学院秦成峰研究员，在Hepatology在线发表了题为Harnessing ZIKV NS2A RNA for alleviating acute hepatitis and cytokine release storm by targeting translation machinery的研究论文。该研究打破病毒编码基因以蛋白形式发挥功能的传统观念，发现黄病毒家族中寨卡病毒（ZIKV）来源的非结构蛋白NS2A能够以RNA的形式抑制蛋白翻译，并进一步在小鼠体内验证了其对急性肝炎和GVHD的控制作用，为CRS的治疗提供了新思路。研究人员借助荧光蛋白和荧光素酶报告基因，分别在无细胞蛋白表达系统和细胞水平上证明了NS2A以RNA分子的形式抑制蛋白的大量表达而对细胞内源蛋白的本底表达没有影响。在分子水平上，研究人员发现NS2A RNA能够结合真核生物翻译相关因子，尤其是翻译起始因子eIF2a，从而阻止鸟苷酸交换因子eIF2B与eIF2a的动态结合及其介导的翻译起始过程。并且，在过表达系统中，研究人员证明NS2A对外源的炎症信号分子激活的NF-kB的转录活性抑制是通过直接下调外源信号的表达水平发挥作用的。研究人员构建了NS2A基因髓系细胞条件性敲入小鼠，并在小鼠体内研究发现，NS2A显著缓解了对乙酰氨基酚(APAP)、脂多糖/D-氨基半乳糖(LPS/D-GalN)、小鼠肝炎病毒MHV-A59诱导的小鼠急性肝炎模型中促炎因子的大量表达及其引发的肝脏损伤。此外，GVHD导致的CRS及小鼠死亡情况也得到了明显的控制。总之，该研究揭示了寨卡病毒来源的非结构蛋白NS2A RNA通过占据细胞翻译机器抑制蛋白翻译的分子机制，并利用该特性在小鼠体内实现了对急性肝炎和CRS发生发展的有效干预，为后续翻译调控的转化研究以及病毒成分的合理利用奠定了坚实的基础。摘译自 ZHU JF，WU RS，YANG T，et al. Harnessing ZIKV NS2A RNA for alleviating acute hepatitis and cytokine release storm by targeting translation machinery [J]. Hepatology, 2024. DOI: 10.1097/HEP.0000000000001101. 中国医学科学院系统医学研究院/苏州系统医学研究所朱婧斐报道

小动物活体成像技术：15个关键问题解答荧光素酶有两种常见的类型：Luciferase和Renilla荧光素酶。它们的底物不同，前者使用D-luciferin，后者使用coelentarizine。这两种酶的发光颜色也不同，Luciferase的光波长在540-600nm，而Renilla荧光素酶的光波长在460-540nm。Luciferase的光更容易穿透组织，而Renilla荧光素酶在体内的代谢速度较快。大多数发表的文章使用Luciferase作为报告基因，但也有一些文章使用两者进行双标记。 11. 组织切片能否观察到生物发光？可以，但荧光酶在体外的活性保持时间较短，大约只有几十分钟。有相关文献支持这一点。 12. 正常成体小鼠能看到体内发光吗？是否需要裸鼠？可以。成体老鼠、裸鼠、幼鼠和胚胎的区别主要在于对可见光的穿透性不同。正常情况下，成体老鼠的体内发光是可以观察到的。可见光的穿透能力大约在3-4cm，因此大鼠也可以作为活体成像的动物，并且有很多关于大鼠的文章。 13. 荧光素酶的发光强度与细胞数量成正比吗？是的，荧光素酶的发光强度与标记的靶点数量成正比，包括细胞、基因、细菌和病毒。密西根大学的Brian Ross发表的一篇文章专门研究了这个问题，确定荧光素酶的发光强度与细胞数成正比关系，并且线性关系到0.9以上。 14. 荧光素酶发光的波长与体内穿透性有何关系？荧光素酶发出的光主要是偏红光，与绿色荧光蛋白（GFP）的绿色荧光不同。荧光素酶的偏红光比GFP的绿光在体内的穿透性要强近一百倍。光在哺乳动物组织内传播时会被散射和吸收，不同类型的细胞和组织吸收光子的特性并不一样。血红蛋白（hemoglobin）是造成体内可见光被吸收的主要因素，其在可见光中蓝绿光波段的大部分吸收作用较强。然而，在可见光大于600纳米的红光波段，血红蛋白的吸收作用却很小。因此，在偏红光区域，大量的光可以穿过组织和皮肤而被检测到。 15. 为什么建议尽量用RFP而不是GFP来检测体内发光？红光比绿光在体内的穿透性要强近一百倍。波长越长的荧光越容易透过组织，因此在条件允许的情况下，建议选择波长较长的荧光染料。

科研之路：如何用技术路线图突破研究难题 𐟌Ÿ作为一名在读硕士，我深知科研之路的艰辛与挑战。每天在实验室里反复试验，面对着成堆的数据和复杂的实验设计，有时候真的是压力山大。然而，每一次的突破与发现，都让我觉得一切的付出都是值得的。今天，我想和大家分享一下我在肺癌细胞耐药机制研究中的经历，希望能给同样奋斗在科研道路上的你一些启发和鼓励。 𐟔我的研究课题是探讨肺癌细胞通过短期快速适应反应和长期增强适应反应，导致DTX获得性耐药的机制。刚开始接手这个课题时，我感到十分迷茫，不知道该从何入手。幸好导师给我提供了一张详细的技术路线图，让我逐步理清了研究思路。 𐟓Š首先，我按照技术路线图设计了实验方案，将肺癌细胞分为低、中、高浓度DTX胁迫组和短、中、长期DTX胁迫组，分别进行耐药性研究。在这些实验中，我密切观察并记录了细胞周期变化和凋亡情况，并详细分析了细胞增殖和凋亡分布。通过不断的实验，我逐渐摸索出了一些规律。 𐟔즎夸‹来，我集中研究了“hsa-miR-4521/1246/耐药基因”调控机制。通过体外过表达和抑制实验，我探讨了这些基因在耐药性中的具体作用。同时，我还进行了体内过表达和抑制实验，以确认这些基因的表达变化对肿瘤细胞的影响。 𐟎樂襮ž验过程中，我发现了一个有趣的现象：短期适应反应中，hsa-miR-4521与ERRFI1基因之间存在显著的调控关系，而在长期增强适应反应中，hsa-miR-1246主要影响THBS1和TGFB2基因的表达。这一发现让我感到非常兴奋，因为它为我的研究提供了新的方向。 𐟔�𚤺†验证这些发现，我还进行了双荧光素酶报告基因分析以及肿瘤细胞学和组织学分析。通过这些实验，我得到了更多有价值的数据，进一步支持了我的假设。 𐟏†经过不懈的努力，我的研究取得了重要的突破，不仅阐明了肺癌细胞在不同胁迫条件下的耐药机制，还发现了新的基因调控路径。这些成果得到了导师的高度评价，也为我的博士论文奠定了坚实的基础。 𐟌ˆ回顾这段科研经历，从最初的迷茫到最终的突破，每一步都充满了挑战与收获。我相信，只要我们坚持不懈，勇于探索，就一定能在科研的道路上走得更远。希望我的经历能为同样在科研路上奋斗的你带来一些启发和动力，一起加油吧！

circRNA如何调控LIG1转录表达？数据库分析筛选：通过FISH和核-细胞质RNA分离实验发现，circRNA主要分布在细胞核中。利用数据库（circAtlas2.0 database， ENCORI database; SPP database）分析发现，circRNA与LIG1启动子的结合蛋白有显著重叠，其中FOXA1是最显著的蛋白。进一步预测与FOXA1共同作用的蛋白，发现TET1与FOXA1结合。调控互作复合体验证：在GEM耐药株中，CoIP验证FOXA1和TET1相互作用；进一步沉默FOXA1和TET1后，LIG1表达降低，证实在耐药株中FOXA1/TET1复合体协同调控LIG1表达。进一步通过ChIRP和RIP实验证实circRNA能够与FOXA1和TET1蛋白结合。调控复合体功能：ChIP试验证实FOXA1和TET1结合在LIG1启动子的甲基化修饰区域，而circRNA的抑制降低了这种结合能力。MS-PCR实验显示，沉默circRNA或TET1增加了LIG1启动子的DNA甲基化水平，而过表达则相反。这些表明circRNA通过影响LIG1启动子甲基化水平，进而影响FOXA1/TET1复合体靶向结合LIG1启动子的能力。荧光素酶报告基因实验表明，沉默circRNA、FOXA1或TET1降低了LIG1启动子的转录活性，而过表达则增强了其转录活性。这些实验进一步表明circRNA/FOXA1/TET1对LIG1的促转录调控功能。结论：circRNA通过结合FOXA1和TET1增强了LIG1的转录。 #chip实验#⠂ #coip#⠂ #科研#⠣研究生#

miRNA列表获取后的6大深度分析方法当你从TargetScan或其他数据库中成功获取miRNA列表后，你可以利用这些数据开展多种后续分析，以深入了解这些miRNA在生物学过程中的作用。以下是一些建议的分析方法：差异表达分析 𐟓Š 利用RNA测序（RNA-seq）或microarray等高通量技术，比较不同样本（如疾病与健康对照、不同处理组等）之间miRNA的表达水平。通过统计方法识别出表达显著差异的miRNA，这些差异表达的miRNA可能与特定的生物学过程或疾病状态相关。靶基因预测与功能分析 𐟎𝿧”襷奅𗥦‚TargetScan、miRDB等，预测差异表达miRNA的潜在靶基因。对预测的靶基因进行功能注释和分类，了解它们参与的生物学途径和过程。结合已有文献和数据库信息，分析这些靶基因在疾病发生、发展中的作用。构建调控网络 𐟌 利用生物信息学方法和工具，构建miRNA与靶基因之间的调控网络。分析网络中的关键节点和调控关系，揭示miRNA在复杂生物学系统中的调控作用。生存分析与相关性研究 ⏳ 在临床研究中，结合患者的生存数据，分析差异表达miRNA与患者生存预后的关系。通过相关性分析，探索miRNA表达水平与临床指标、疾病分期等之间的关联。功能验证实验 𐟧ꊥœ觻†胞或动物模型中，通过转染或敲除特定的miRNA，验证其对细胞功能、增殖、凋亡等方面的影响。利用荧光素酶报告基因系统等实验方法，直接验证miRNA与其靶基因之间的相互作用。整合多组学数据 𐟌𐟧슧𛓥ˆ基因组学、转录组学、蛋白组学等多组学数据，综合分析miRNA在生物学过程中的作用。通过多组学数据的整合，可以更全面地了解miRNA在基因表达调控、信号转导等方面的复杂作用。请注意，以上只是一些基本的分析思路和方法，具体的分析策略可能需要根据你的研究目的、样本类型和数据可用性进行调整和优化。在进行后续分析时，务必注意数据的质量控制和统计分析的严谨性，以确保结果的可靠性和准确性。

小动物活体成像，揭秘𐟐튥𐏥Š觉馴𛤽“成像技术，听起来是不是很酷？其实它在我们科研和医疗领域有着广泛的应用。今天，我们就来聊聊这个技术的原理和一些常见问题。荧光素酶：照亮小动物的关键 𐟒ኊ首先，荧光素酶是这项技术的核心。常见的有两种：Luciferase和Renilla荧光素酶。它们的底物不同，前者用D-luciferin，后者用coelentarizine。发光颜色也不一样，Luciferase发的是红光，波长在540-600nm，而Renilla荧光素酶发的是绿光，波长在460-540nm。红光更容易透过组织，而绿光在体内的代谢速度更快。大部分发表的文章都用Luciferase作为报告基因，但也有些文章会用两者进行双标记。组织切片能观察到生物发光吗？𐟔슊可以！但要注意，荧光酶在体外的活性保持时间很短，大概只有几十分钟。有相关文献支持这一点。裸鼠还是普通小鼠？𐟐튊其实，成体老鼠和裸鼠、幼鼠以及胚胎的区别主要在于对可见光的穿透性不同。成体老鼠的体内发光是可以观察到的，这正是这项技术的价值所在。可见光的穿透能力大约在3-4cm，所以大鼠也可以作为活体成像的动物，并且有很多关于大鼠的文章。荧光素酶的发光强度与细胞数量有关吗？𐟔⊊是的！荧光素酶的发光强度与标记的靶点数量成正比，包括细胞、基因、细菌和病毒的数量。密西根大学的Brian Ross发表的一篇文章专门研究了这个问题，发现荧光素酶的发光强度与细胞数成正比关系，并且线性关系到0.9以上。波长与穿透性的关系 𐟌ˆ 荧光素酶发出的光主要是红光，比绿色荧光蛋白（GFP）的绿光在体内的穿透性要强近一百倍。光在哺乳动物组织内传播时会被散射和吸收，不同类型的细胞和组织吸收光子的特性并不一样。血红蛋白（hemoglobin）是造成体内可见光被吸收的主要因素，其在可见光中蓝绿光波段吸收大部分光子。但在可见光大于600纳米的红光波段，血红蛋白的吸收作用却很小。因此，在偏红光区域，大量的光可以穿过组织和皮肤而被检测到。为什么建议用RFP而不是GFP？𐟌𓊊红光比绿光在体内的穿透性要强近一百倍。波长越长的荧光越容易透过组织，所以在条件允许的情况下，我们建议选择波长较长的荧光染料。希望这些信息能帮你更好地理解小动物活体成像技术！如果你有任何问题或想法，欢迎在评论区留言哦！𐟒쀀