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giemsa权威发布_giemsa染色(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-12-04

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瑞氏-吉姆萨染色法：细胞染色全攻略 𐟌ˆ 瑞氏-吉姆萨染色（Wright-Giemsa Staining）的原理：瑞氏染料由酸性染料伊红和碱性染料亚甲蓝组成。血红蛋白和嗜酸性颗粒为碱性蛋白质，与酸性染料伊红结合呈红色；细胞核蛋白和淋巴细胞胞浆为酸性蛋白质，与碱性染料美蓝或天青结合，呈紫蓝色；中性颗粒呈等电状态，与伊红和美蓝均可结合，呈淡紫色。吉姆萨染料由伊红和天青组成，染色原理与瑞氏染色法基本相同。瑞氏染色法对细胞浆内的颗粒染色效果好，但对细胞核的染色不如吉姆萨染色法。吉姆萨染色法对细胞核着色好，但对胞浆颗粒着色较差，且有时对细胞核着色较深，核结构显示不佳。为兼顾二者之长，常用瑞氏-吉姆萨复合染色法。 𐟌ˆ 用途和目的：常用于血液涂片、肺泡灌洗液涂片、骨髓细胞涂片、细菌、染色体、组织切片等的染色。标本染色后，相应各类细胞呈现不同的着色，从而达到辨别其形态特征的目的。 𐟌ˆ 染色步骤：自来水流水缓慢冲洗晾干后的载玻片洗去杂质，注意流水从涂片上方流下，避免直接冲洗细胞；将载玻片晾干后置于瑞氏染液中染色10分钟；尽量沥干载玻片，再置于吉姆萨染液中染色4分钟。染色完毕后流水缓慢冲洗载玻片，将多余染液洗去；载玻片晾干后显微镜下观察。此法常用于小鼠肺泡灌洗液涂片的染色，其他标本可以根据染色结果适当调整染色时间。 𐟌ˆ 显微镜下细胞的辨别：红细胞：平均直径7，细胞呈粉红至红色，中央因双凹圆盘结构而呈现空白。单核细胞：胞体圆至椭圆形，直径12-20，胞浆灰蓝色且稍有粗糙感，半透明似毛玻璃，胞质中常有小空泡。成熟的单核细胞胞核呈肾形、马蹄形、不规则形等，细胞核常有扭曲和折叠感。淋巴细胞：分大（直径12-15）、小（直径6-9）两大类，圆形或椭圆形，胞质淡蓝色透明，无颗粒或偶有数颗紫红色的嗜天青颗粒。核圆形，直径接近细胞直径80%，染色质呈浓集的团块状。中性粒细胞：胞体圆形至椭圆形，直径10-15。胞质呈无色或极浅的淡粉红色，弥散分布许多浅红或浅紫的细小颗粒。细胞核形态多样，可呈长杆状，也可为分叶状核，2-5叶不等，叶与叶间有细丝相连。嗜酸性粒细胞：细胞直径13-15，胞浆中充满嗜酸性颗粒，颗粒粗大整齐，排列均匀紧密，为砖或鲜红色。在染色较深的涂片中，颗粒呈现深橙、棕至咖啡色。细胞核分叶，多为两叶呈眼镜状，颜色为深紫色，偶见3叶。

细胞周期的测定方法与步骤详解一、原理细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间。它反映了细胞的增殖速度。单个细胞的周期可以通过缩时摄影来测定，但这种方法不能代表细胞群体的周期。因此，目前多采用其他方法测定群体周期。测定细胞周期的方法有很多，如同位素标记法和细胞计数法等。这里介绍一种利用BrdU渗入法测定细胞周期的方法。BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可作为细胞DNA复制的原料。经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占1/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如果经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。如果细胞仅经历了一个周期，则两条单体均深染。通过计算分裂相中各期的比例，即可算出细胞周期的值。二、仪器、用品与试剂仪器、用品：同常规细胞培养试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2㗓SC液三、操作步骤细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使终浓度为10/ml。 44小时后加秋水仙素，使每ml中含0.1。 48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。常规染色体制片（见第三部分：染色体技术）。染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2㗓SC液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。弃去2㗓SC液，流水冲洗。 Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。镜检100个分裂相，计、二、三、四细胞期分裂指数。计算：细胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小时）附：（1）BrdU配制：BrdU 10mg+双蒸水10ml，4℃下避光保存。（2）2㗓SC配制：NaCl 1.75克，柠檬酸三钠ⷲH2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存。

𐟔젧𛆨ƒž增殖力揭秘：平板克隆实验全解析 𐟌𑠧𛆨ƒž克隆形成实验是生物学研究中的经典方法，它能够直观地反映细胞群体的依赖性和增殖能力。通过这个实验，我们可以了解到细胞在体外环境下的增殖情况，以及各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。 𐟔 实验目的 1️⃣ 评估细胞在处理后的增殖能力，通过克隆形成来观察细胞在培养板上的生长情况。 2️⃣ 探索不同杀伤因素（如药物、基因等）对肿瘤细胞增殖能力或群体依赖性的影响。 3️⃣ 预测细胞在体内的成瘤性，体外克隆能力越强，体内成瘤性越强，为体内实验提供参考。 𐟧ꠥꌨ所需材料：基础培养基（根据细胞类型选择）胎牛血清胰蛋白酶 PBS 青霉素-链霉素溶液（100X）多聚甲醛固定液结晶紫染液 Giemsa染液基本步骤： 1️⃣ 取对数生长期的细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中。 2️⃣ 将细胞悬液进行梯度倍数稀释，分别以每皿50、100、200个细胞的密度接种到含10mL预温培养液的皿中，轻轻转动使细胞均匀分布。 3️⃣ 将培养皿放入37℃、5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周，经常观察，当出现肉眼可见的克隆时终止培养。 4️⃣ 弃去上清液，用PBS小心浸洗2次，加入4%多聚甲醛固定细胞15分钟。然后去固定液，加入Giemsa染色液染色10～30分钟，用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。 5️⃣ 将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼或显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数，最后计算克隆形成率。 𐟓Š 数据分析克隆形成率 = (克隆数 / 接种细胞数) 㗠100% 通过这个实验，我们可以深入了解细胞的增殖特性，为后续的实验研究提供有力的数据支持。

𐟔젥𙳦🥅‹隆形成实验全攻略：步骤与技巧 𐟓 实验步骤（以6孔板为例） 1️⃣ 制备细胞悬液：将处于对数生长期的单层细胞进行常规消化离心，收集细胞沉淀。重悬细胞沉淀并计数，可倍比稀释至1㗱0ⳤ𘪯mL。 2️⃣ 接种细胞：以每孔50、100、200个细胞的梯度密度接种六孔板中（根据细胞生长情况确定），补加3mL培液，置于培养箱中培养，静置2-3周。若需加药处理，可于第二天贴壁后加药。 - 注意事项：计数要准确，最好计3遍取平均值；接种细胞时要晃匀；培养过程中注意培液颜色，必要时更换培液并观察污染情况。 3️⃣ 染色：当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，停止培养，弃掉培液，用PBS小心洗涤2-3次，弃掉PBS。每孔加入1ml甲醇固定15min，弃固定液。每孔加入1ml 0.1%结晶紫或Giemsa染色液染色10-30min，流水缓缓洗去染液，空气干燥。 - 注意事项：培养过程中可隔两三天在显微镜下观察，若大多数克隆含50个以上细胞，即可终止培养。 4️⃣ 计数：镜下计数含50个细胞以上的克隆数并拍照，取3个复孔的克隆平均值进行计算。实验至少重复2次。 𐟔 常见问题解答细胞密度为多少合适？细胞接种密度与实验结果密切相关。若细胞太多，形成克隆数目太多，难以拍到单独的克隆团；若细胞太少，可能无法形成克隆，影响增殖能力判断。一般来说，正常增殖速度为1:5-1:10传代，3天长满细胞，可以接种500个细胞，其余增殖缓慢细胞，可以接种800-1000。细胞接种后培养的时间如何确定？通常情况下，单个细胞在体外增殖6代以上所组成的细胞群称为一个阳性克隆，时间约为一周；但具体时间因细胞增殖能力而异，因此应密切关注细胞生长情况，隔天在显微镜下观察克隆情况，若单个克隆细胞数到达50个左右即可固定细胞。细胞铺板均匀的重要性若铺板不均匀，细胞稀的地方形成的克隆少，而密的地方克隆多，一方面影响统计结果，并且拍出的图片不美观。细胞未形成克隆的原因？并非每种细胞都可以形成克隆，克隆形成率与细胞本身增殖能力有关。还与接种细胞密度、加入培养液的体积、血清浓度有关。因该实验处理时间较长，应给细胞多加培养基，如每孔4ml，或者3天更换一次培养基，以供给细胞充足的营养。

如何测定细胞周期：详细步骤与注意事项一、原理细胞周期是指细胞从一次分裂结束到下一次分裂结束所经历的时间。它反映了细胞的增殖速度。测定细胞周期的方法有很多，其中一种是利用BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）渗入法。BrdU加入培养基后，可以作为细胞DNA复制的原料。经过两个细胞周期后，细胞中两条单链均含BrdU的DNA将占1/2，反映在染色体上应表现为一条单体浅染。如果经历了三个周期，则染色体中约一半为两条单体均浅染，另一半为一深一浅。如果细胞仅经历了一个周期，则两条单体均深染。通过计算分裂相中各期比例，就可以算出细胞周期的值。二、仪器、用品与试剂仪器、用品：同常规细胞培养试剂：BrdU（1.0mg/ml），甲醇、冰醋酸，Giemsa染液，秋水仙素，2㗓SC液三、操作步骤细胞生长至指数期时，向培养液中加入BrdU，使终浓度为10/ml。 44小时后加秋水仙素，使每ml中含0.1。 48小时后常规消化细胞至离心管中，注意培养上清的漂浮细胞也要收集到离心管中。常规染色体制片（见第三部分：染色体技术）。染色体玻片置56℃水浴锅盖上，铺上2㗓SC液，距紫外灯管6cm处紫外照射30分钟。弃去2㗓SC液，流水冲洗。 Giemsa液染色10分钟，流水冲洗，晾干。镜检100个分裂相，计、二、三、四细胞期分裂指数。计算：细胞周期（Tc）=48/{（M1+2M2+3M3+4M4）/100}（小时）注意事项 BrdU配制：BrdU 10mg+双蒸水10ml，4℃下避光保存。 2㗓SC配制：NaCl 1.75克，柠檬酸三钠ⷲH2O 0.88克，加水至100ml，4℃保存

实验室有毒试剂清单｜珍爱生命，远离实验昨天在实验室搞多聚甲醛的时候，没在通风橱里操作，结果今早起来头巨痛！真是教训啊，大家做实验一定要戴好口罩，做好防护！立马整理了一下实验室里的有毒试剂，绝不做实验室的牺牲品！ DMSO（二甲基亚砜）𐟧ꊨ🙤𘪤𘜨忧”褺Ž冻存液的配置，还有作为常见粉剂的溶剂。但它有血管毒性和肝肾毒性，小心为上！ EB（溴化乙锭）𐟒€ EB用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料，剧毒！我们学校仪器平台都不让用EB显影，致癌性很强，大家一定要小心。 PCR实验𐟧슥šPCR实验的时候，苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿这些有机溶剂都是致癌的。还有DEPC（焦炭酸二乙酯），用于溶解RNA，但它是潜在的蛋白质变质剂。做PCR一定要戴好口罩！ WB实验𐟓Š WB实验中，PMSF用于蛋白提取，高强度毒性；SDS（十二烷基硫酸钠）用于SDS-PAGE电泳凝胶配置，有刺激作用，可能引起呼吸系统过敏性反应；丙烯酰胺（未聚合）是蛋白电泳凝胶原料，有潜在神经毒性；TEMED（四甲基乙二胺）用于SDS-PAGE凝胶配置，催化凝胶凝固，但易挥发，强神经毒性。 Triton x-100𐟧𔊨🙤𘪤𘜨忦œ‰刺激性，可以因吸入或皮肤吸收受害，大家要小心。多聚甲醛𐟕𕯸‍♂️ 多聚甲醛用于组织固定灌流，易挥发且剧毒。昨天我就是因为这个倒霉东西头才这么痛的。 DTT (二硫苏糖醇)𐟧ꊥ𐏥ˆ†子有机还原剂，散发出难闻的气味。可以因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。吉姆萨 Giemsa𐟦 吉姆萨染料有极强的毒性，可致命或引起眼睛失明。可以通过吸入和皮肤吸收，其可能的危险是不可逆的效应。过硫酸铵 APS𐟒动🇧᫩…𘩓𕥯𙩻膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。甲醇𐟍𖊧”𒩆‡有毒，致命剂量大约是70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大。它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸汽能损害人的呼吸道粘膜和视力。佩戴好防毒面具和护目镜，避免接触其蒸汽，注意在通风橱内操作。乙醚𐟔劤𙙩†š高度挥发，遇明火、高热极易燃烧爆炸，并有特殊气味。化学性质不稳定，日光下去空气接触，易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。应小心使用。广泛用作麻醉剂。希望大家在做实验的时候一定要注意安全，珍爱生命！

急性臭氧暴露对大鼠肺部细胞遗传毒性的影响是什么？ ? 前言 ? 臭氧(O3)是氮氧化物和挥发性有机物的二次污染物。近年来，光化学反应造成的大气O3污染逐渐变得较为严重，其主要来源是光化学烟雾，其次还可来源于消毒过程中紫外灯的使用等。 ? 已有研究表明，臭氧对植物、体外培养的微生物和细胞具有遗传毒性，关于体外培养细胞的研究多集中于对淋巴细胞、 A549细胞系、骨髓细胞等，对体内肺部细胞的遗传毒性研究相对较少，且仅局限于某一个水平探讨引起的遗传毒性。 ?? 将肺组织单细胞悬液涂于干净的载玻片上，自然晾干后，插入含甲醇固定液的槽中固定10 min，取出后放入Giemsa染色液中染色15 min，超纯水冲洗，晾干，油镜下观察计数。 ? 遵循最常用的方法，即 Z字形方法来筛选载玻片。在每张载玻片上计数 1 000个具有完整细胞核和细胞边界的细胞。从1 000个完整的细胞中计数MN的数量。 ? ?DNA-蛋白质交联实验 ? 取0．5 ml肺组织制备好的单细胞悬液，加入 0．5 ml SDS溶液，轻轻摇匀，65℃水浴加热10 min。将100 Tris-HCl-KCl溶液加入到上述溶液中。充分混合后，将液体倒入1 ml聚丙烯移液器吸头中，重复上述步骤7次，使DNA长度一致。 ? 冰上预冷5 min，4℃10 000 r/min离心5 min，将上清液转移到另一个离心管中保存。向沉淀中加入1 ml洗涤缓冲液，65℃水浴加热10 min。冰上预冷5 min。4℃，10 000 r/min离心5 min，收集上清到另一离心管中。 ? 向上述沉淀中加入0．5 ml洗涤缓冲液和0．5 ml 蛋白酶K溶液，充分混匀。60℃水浴中加热3 h，冰上骤冷5 min。4℃，12 000 r/min离心10 min，收集上清。 ? 用洗涤缓冲液制备各浓度的小牛胸腺DNA 溶液1 ml，使其终浓度为0、50、150、250、375、500、 750、1000、1500、2500 ng/ml，分别加入1 ml新鲜制备的Hoechst33258溶液(400 ng/ml)，混合均匀后，测量各组溶液的荧光强度，绘制DNA浓度标准曲线。 ? 取上述第三、四步骤中离心管的上清液并加入 1 ml新鲜制备的Hoechst 33258溶液。混合均匀后，在相同条件下测量荧光值。DNA和蛋白质交联率计算公式:DNA-蛋白质交联率=交联DNA含量/ (交联DNA含量+游离DNA含量)。 ? 实验结果数据采用均数ⱦ ‡准差(xⱳ)表达，采用SPSS 13．0统计软件进行分析，计数数据用卡方检验，计量数据用方差分析(ANVOA)进行比较。 ? 大鼠肺组织内8-OHdG含量的影响 ? 由于臭氧具有强氧化性，8-OHdG是DNA氧化损伤的产物，通常检测8-OHdG的含量可以反映出 DNA氧化损伤程度。随着臭氧浓度的升高，肺组织内8-OHdG的含量逐渐升高，0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm臭氧暴露组与对照组相比均有显著性差异，且在臭氧浓度为4．0 ppm时达到最大值(P＜0．05)。 ? 荧光显微镜下观察，对照组未见拖尾的细胞，只有完整的头部，表明细胞未发生DNA断裂;臭氧暴露组均可观察到拖尾的细胞，断裂的DNA游动移出细胞核外，形成尾部，形似彗星。 ? 采用软件分析图片显示，随着臭氧浓度的增大，0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm暴露组的拖尾数量及拖尾长度均显著升高(P＜0．05)。 ? 大鼠肺部细胞内DNA-蛋白质交联率的变化 ? DNA-蛋白质交联（DNA-protein crosslink，DPC）是指DNA链通过共价键的作用与蛋白质稳定的结合在一起，是一种较为严重的DNA损伤形式。 ? 与对照组相比，0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm臭氧暴露组大鼠肺部细胞内DNA-蛋白质交联率均显著性增加(P＜0．05)，且在2．0 ppm时达到最大值。 ? 急性臭氧暴露对肺部细胞染色体水平的影响 0．12 ppm、0．5 ppm、1．0 ppm、2．0 ppm及4．0 ppm 臭氧暴露组大鼠肺部细胞微核率分别为1．4‰，1． 6‰，2．0‰，2．4‰，3．0‰和3．2‰，微核率的发生与对照组相比均无统计学差异(P＞0．05)，但均随着臭氧浓度的升高，微核的发生率增加。 ? 结论 ? 综上所述，急性臭氧暴露对大鼠遗传毒性的影响，在DNA断裂方面，臭氧浓度越大，断裂损伤越大，而DNA-蛋白质交联方面，随着臭氧浓度的变化，出现先升高后下降的趋势。所以，臭氧致肺细胞遗传毒性方面，不同的水平进行分开检测与描述。

实验室毒物大揭秘！𐟔𐟒€ 实验室里，那些看似神奇的化学试剂，其实隐藏着不小的危险。今天，我们就来聊聊那些让人闻风丧胆的有毒试剂。 DMSO（二甲基亚砜）𐟧ꊄMSO常用于冻存液的配置，也是许多粉剂的溶剂。然而，它具有血管毒性和肝肾毒性，使用时一定要小心。 EB（溴化乙锭）𐟧슅B是琼脂糖凝胶电泳中的核酸染料，具有致癌性。在我们学校的仪器平台，使用EB时甚至不允许显影，因其毒性极强。 PCR实验中的有毒试剂𐟧𜊐CR实验中使用的苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿等有机溶剂都有致癌风险。DEPC（焦炭酸二乙酯）用于溶解RNA，是潜在的蛋白质变质剂。进行PCR实验时一定要戴好口罩。 WB实验中的危险试剂𐟧ꊗB实验中使用的PMSF用于蛋白提取，具有高强度毒性；SDS（十二烷基硫酸钠）用于SDS-PAGE电泳凝胶配置，具有刺激作用，可能引起呼吸系统过敏性反应；丙烯酰胺（未聚合）作为蛋白电泳凝胶原料，具有潜在神经毒性；TEMED（四甲基乙二胺）用于SDS-PAGE凝胶配置，能催化凝胶凝固，易挥发，且具有强神经毒性。 Triton x-100𐟧𔊔riton x-100具有刺激性，可能因吸入或者皮肤吸收而使人受害。多聚甲醛𐟧ꊥ䚨š甲醛应用于组织固定灌流，易挥发且属于剧毒物质。 DTT (二硫苏糖醇)𐟧ꊄTT是一种小分子有机还原剂，会散发出难闻的气味。可能因吸入、咽下或者皮肤吸收而危害健康。吉姆萨 Giemsa𐟧ꊥ‰姆萨染料毒性极强，可能致命或者导致眼睛失明，能够通过吸入和皮肤吸收进入人体，其可能造成的危险具有不可逆的效应。过硫酸铵APS𐟧ꊨ🇧᫩…𘩓𕥯𙤺Ž黏膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤具有极大的危害性。吸入甚至可能致命。甲醇𐟍𗊧”𒩆‡有毒性，致命剂量约为70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最为显著，不论是经消化道、呼吸道还是皮肤摄入，都会产生毒性反应。甲醇蒸汽会损害人的呼吸道粘膜和视力。因此，要佩戴好防毒面具和护目镜，避免接触其蒸汽，并注意在通风橱内进行操作。乙醚𐟧ꊤ𙙩†š是一种高度挥发，遇明火、高热极易燃烧爆炸，并具有特殊气味的液体。其化学性质不稳定，在日光下与空气接触，易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。使用时应倍加小心。乙醚广泛用作麻醉剂。 𐟌Ÿ进入实验室时，一定要严格遵守安全规定，戴好防护用具，手套、护目镜一个都不能少！𐟒–生命只有一次，千万不能掉以轻心！让我们一起远离危险，保护好自己！

𐟔짻†胞生物学实验全攻略𐟧슰Ÿ”探索细胞世界的奥秘，从显微镜的使用开始！𐟔슊𐟒᥮ž验一：普通光学显微镜的构造与使用 - 了解显微镜的原理：光的折射与放大。 - 掌握显微镜的主要部件：目镜、物镜等。 - 学习如何调整焦距，获得清晰的物像。 𐟒᥮ž验二：油镜的使用技巧 - 学会在高倍镜下观察后，如何使用油镜进行更精细的观察。 - 注意油镜使用的注意事项，避免损坏镜头。 𐟒᥮ž验三：染色体形态观察 - 在低倍镜下选择染色体分散良好的细胞。 - 观察染色体的形态、大小及着丝粒的位置。 - 区分不同类型的染色体，如端着丝粒、亚端着丝粒等。 𐟒᥮ž验四：G-显带技术原理 - 了解Giemsa染料如何使染色体出现亮暗相间的带纹。 - 观察DNA上高比例二硫键的氧化态蛋白质区域与还原态蛋白质区域的差异。 𐟒᥮ž验五：银染装片与G带观察 - 学习银染装片的制作方法。 - 观察银染后的染色体带型特征，了解G带的分布与形态。 𐟔쩀š过这些实验，你将更深入地了解细胞生物学的奥秘，掌握显微镜使用与染色体形态观察的关键技能！𐟌Ÿ

铀矿尘对支气管上皮细胞遗传毒性及茶多酚有着怎样的防护作用？ ? 前言 ? 流行病学调查显示：接触铀矿尘职业人群主要见于铀矿的开采、选矿、精铀提取等有关核燃料的生产过程。铀矿尘是铀矿勘探和开采的主要职业性有害因素，铀矿尘的组成除了非放射性的二氧化硅粉尘外，还包括放射性粉尘和凝聚核。 ? 铀矿粉尘可通过呼吸道进入人体后形成内辐射，引发损伤。通过对铀作业人员的健康随访研究表明，长期接触铀矿尘与矽肺、肺癌等多种疾病的发生率增高有关。 ? 细胞分组及其染毒 ? 人支气管上皮细胞（BEAS-2B），购自美国ATCC（American Type Culture Collection）。铀矿尘（南华大学核工业铀矿溶浸采矿重点实验室，铀的含量为 4.52‰）用玛瑙研钵研磨后，经 500 目筛过筛，高温高压消毒后用无血清培养液（LHC-8）配成 5 mg/mL 混悬液。 ? 将指数生长期细胞分为空白对照组、铀矿尘染毒组和茶多酚保护组。铀矿尘染毒组按铀矿尘终浓度 1.0、1.5、2.0 mg/mL 加入细胞中；茶多酚保护组在铀矿尘染毒前 2 h 加入终浓度为 250 mg/L 的茶多酚。 ? 中性单细胞凝胶电泳实验 ? 实验分组与染毒同上，染毒24 h 后，收集细胞制成悬液；取 100  1%正常熔点琼脂糖滴至磨砂玻片上，4℃冷却 10 min；取 10  5㗱05 /mL 细胞悬液与 60  低熔点的琼脂糖混匀滴在第一层琼脂糖上，4℃冷却 10 min；在第二层上再滴上 60  低熔点的琼脂糖，放于 4℃冷却 10 min；将玻片放入 4℃细胞裂解液中裂解 2 h；用 0.5% TBE（pH8.2－ 8.5）漂洗 3 次，每次 1 h。 ? 玻片置于中性缓冲液中， 4℃电泳 30 min（25 V，5 mA）； PI 染色 15 min， OLYMPUS 荧光显微镜绿色激发光下观察并拍照；用 CASP. EXE 软件分析彗星细胞，分析尾长、尾部 DNA 百分含量、尾距。每组分析200 个细胞，重复4 次。 ? HPRT 基因突变检测 ? 细胞分组及染毒同上，铀矿尘染毒 24 h 后，用预温的 D-Hanks液洗涤 3 次，立即换新鲜的培养液继续培养。上述染毒后的细胞培养至第 5 代时，每组细胞分为两组，一组加入含终浓度为 0.1 mmol/L 6-巯基鸟嘌呤（6-TG，Sigma）的 LHC-8 培养液，37℃培养 30 h。 ? 同时向两组加入 6 /mL 的细胞松弛素 B（Cytochalasin B，Calbiochem），继续培养 42 h；胰蛋白酶消化，制备细胞悬液，甲醇/冰醋酸（3∶1）；细胞悬液滴片，Giemsa 染色，干燥后，在光镜下计数5000个细胞，记录在同一胞浆内具有完整核膜的双核或多核细胞（包括相压、相切和分离的双核或多核细胞数）。 ? 含有 6-TG 培养细胞中的 1000 个细胞中双核或多核细胞数除以不含 6-TG 培养的 1 000 个细胞中双核或多核细胞数，所得结果为 HPRT 基因位点突变频率（‰），每组重复4次。 ? 铀矿尘诱发BEAS-2B细胞DNA损伤及茶多酚的抑制作用 ? 经不同剂量的铀矿尘染毒的BEAS-2B细胞彗星测定可以看出，各铀矿尘组拖尾细胞数量、尾部 DNA 百分比、尾长、尾距都较对照组明显增加，并随着铀矿尘浓度的增高，这些指标不断增高，表明铀矿尘可造成细胞的 DNA 损伤。而茶多酚对各剂量铀矿尘诱发的 BEAS-2B 细胞 DNA 损伤都有明显抑制作用（p<0.05）。 ? 随着铀矿尘剂量浓度的增高，BEAS-2B 细胞中的微核细胞、多核细胞增多，表明铀矿尘对细胞染色质损伤加重，茶多酚对铀矿尘所诱发的微核及多核细胞增多有较好的抑制作用。 ? 结论 ? 铀矿尘通过呼吸道进入人体，它对人体造成的危害主要是由于粉尘在肺泡、支气管等表面的沉积以及所含放射性物质的辐射所引起。 ? 放射性粉尘长时间滞留于肺气管、支气管和淋巴结内，可构成潜在的内照射危害。在对湖南某铀矿矿工 655 例死亡原因的调查中，肺癌的标化死亡比为 2.29，且死亡数大于矽肺死亡例数。 ? 铀矿尘中 €射线具有直接损伤 DNA 的能力，也可通过产生包括活性氧（ROS）在内的多种自由基的间接作用造成 DNA 氧化损伤。

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