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trizol试剂新上映_trizol溶液(2024年12月抢先看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-12-02

trizol试剂

科研神器！Trizol试剂 𐟔젔rizol的优势在于其独特的作用机制和强大的效果。它能快速裂解细胞并稳定RNA，防止RNA酶降解。 𐟧ꠦŽ訍理由：这款试剂适用于多种样本类型，能有效提取高质量的RNA，为你的科研工作提供强有力的支持。无论是基因表达研究、差异基因组学分析还是基因功能分析等实验，Trizol都是不可或缺的科研好物。 𐟓– 如果你发现试剂盒提取的RNA浓度较低，可以在最后一步溶解时少加一些水，这样效果会更好哦！

RNA提取秘籍：从细胞到纯净 𐟔 原理简介： RNA提取的过程包括样品的裂解和纯化。裂解是为了让RNA从细胞或组织中释放出来，而纯化则是为了去除RNA之外的杂质，如DNA、蛋白质等。Trizol是一种强大的工具，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。 𐟓 步骤详解： 1️⃣ 细胞清洗：吸去培养液，用PBS清洗细胞2-3次。以6孔板为例，每孔加入1ml Trizol，室温放置5分钟，让细胞充分裂解。 2️⃣ 裂解与分层：将细胞/组织裂解液转移到离心管中，每管加入200ul氯仿，振荡混匀后，室温静置2-3分钟，让Trizol与氯仿分层。 3️⃣ 离心分离：将离心管放入预冷的离心机，4℃下以12000rpm离心15分钟。离心后，溶液分为三层：下层为粉红色的Trizol，中间为蛋白和细胞碎片，上层为清亮的氯仿层。 4️⃣ 提取RNA：取新的离心管，加入500ul异丙醇，将上层RNA转移到含异丙醇的离心管中。用200ul枪头缓慢提取上层RNA溶液，避免吸取到中间层及下层液体。 5️⃣ 离心胶状物：颠倒离心管混匀后，室温静置10分钟，再以4℃ 12000rpm离心10分钟。离心后，RNA会在管底部和侧壁上形成胶状沉淀块。 6️⃣ 清洗RNA：移去上清液，每1ml Trizol试剂裂解的样品中加入至少1ml的75%乙醇（75%乙醇用DEPC水配制），清洗RNA沉淀。混匀后，4℃ 7500rpm离心5分钟，吸去乙醇溶液，再次离心，吸去残留的乙醇。 7️⃣ 干燥RNA：让RNA沉淀在室温空气中干燥5-10分钟，直到从白色变为透明。 8️⃣ 溶解RNA：根据RNA的量加入20-40的无RNA酶水，反复吹打使其完全溶解，保存于-80℃待用。 𐟒ᠦ示：在整个提取过程中，要特别注意避免RNA酶的污染，以确保RNA的完整性和纯度。

Trizol法提RNA，超全攻略！ 𐟌ˆ 实验原理： Trizol试剂的主要成分是苯酚，它能有效裂解细胞，使细胞中的蛋白质和核酸物质解聚。尽管苯酚能使蛋白质变性，但它不能完全抑制RNA酶的活性。因此，Trizol中还加入了8-羟基喹啉、异硫氰酸胍、B-巯基乙醇等来抑制内源和外源RNase（即RNA酶）。存放在Trizol中的样品可以在-80Ⰳ保存半年左右。 𐟔젦 𗦜쥤„理方法：贴壁培养细胞吸出培养液，用预冷的1xPBS清洗细胞两次。吸出PBS洗液，然后每1㗱08-2㗱07的培养细胞中加入1ml的Trizol，轻摇培养皿，确保溶液均匀分布于细胞表面。（可用细胞刮刀剥离细胞）使用移液器反复吹打使细胞脱落，然后将内含细胞的裂解液转移至离心管中，再用移液器吹打直至裂解液中无明显沉淀（溶液清亮）。室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。悬浮培养细胞将悬浮细胞收集至离心管中，12000 rpm 4Ⰳ离心2分钟，弃上清，用预冷的1xPBS清洗两次。向1x106-2㗱07细胞中加入1ml的Trizol。用移液器吹打至裂解液清亮无明显沉淀。室温静置5-10分钟后，再进行后续的RNA提取操作。动物组织、植物材料样品将准确称取的RNA提取样品转移至液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织（研磨过程中需要不断向研钵中补加液氮），直至研磨成粉末状，然后向粉末中加入适量的Trizol并混匀。（针对柔软易裂解的组织样本，可以使用匀浆器加入适量Trizol进行匀浆裂解）将上述混合液转移至离心管中，用移液器反复吹打充分混匀。室温静置5分钟，12000 rpm 4Ⰳ离心5-10分钟。小心吸取上清液，移入新的离心管中，再进行后续的RNA提取操作。通过以上步骤，您可以使用Trizol法成功提取RNA，为后续的实验研究提供可靠的样本。

核糖核酸2 在日常实验和送测序中，我们经常听到mRNA和microRNA这两个词，但它们到底有什么区别呢？更重要的是，它们都能用RNA提取试剂盒提取吗？ mRNA和microRNA的区别 𐟓– 首先，mRNA（信使RNA）是蛋白质合成的直接模板。它的分子通常很长，由数千个核苷酸组成。在核糖体上，mRNA的信息被用来合成特定的蛋白质，这个过程叫做翻译。而microRNA（微小RNA）则是一种小分子非编码RNA，分子较短，通常由约22个核苷酸组成。它可以与mRNA的3'非翻译区（3'UTR）或其他区域结合，从而调控基因表达。换句话说，microRNA通过调控mRNA的稳定性和翻译来间接影响蛋白质的合成。提取mRNA和microRNA的试剂盒 𐟧ꊊ要提取mRNA，你应该使用Trizol或者总RNA提取试剂盒。而要提取microRNA，则需要使用专门的microRNA提取试剂盒。全转录组测序通常选择microRNA提取试剂盒，而普通转录组测序则可以选择总RNA提取试剂盒或者Trizol。小结 𐟓 总的来说，mRNA是蛋白质合成的直接模板，而microRNA则通过调控mRNA的稳定性和翻译来间接影响蛋白质的合成。在提取RNA时，选择合适的试剂盒非常重要，以确保实验结果的准确性。

Trizol法提取RNA的详细步骤和原理 Trizol法，也称为异硫氰酸胍-苯酚法，是最经典且广泛使用的RNA提取方法之一。这个方法的核心是使用强变性剂异硫氰酸胍来裂解细胞，并使核蛋白复合体中的蛋白质变性。在特定的pH条件下，由于DNA和RNA的溶解度不同，它们会被分离。DNA位于中间相，而RNA则位于水相。通过有机溶剂沉淀RNA，可以得到纯度较高的RNA。 RNA提取步骤准备试剂首先，准备好以下试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇和无RNase的水或0.5%SDS（所有溶液都需要用DEPC处理过的水配制）。匀浆处理组织：将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml Trizol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过Trizol体积的10%。单层培养细胞：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10cmⲩ⧧ﯼˆ即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。Trizol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。Trizol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。细胞悬液：离心收集细胞，每5-10㗱0⁶动物、植物、酵母细胞或1㗱0⁷细菌细胞加入1ml Trizol，反复吸打。加Trizol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。分离核酸蛋白复合物将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。可选步骤如果样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或胞外物质（如肌肉、植物结节部分等），可以在2-8℃下以10000㗧离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。氯仿萃取每使用1ml Trizol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。离心分离在2-8℃下以10000㗧离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用Trizol试剂的60%。沉淀RNA 把水相转移到新管中，如要分离DNA和蛋白质可保留有机相，进一步操作见后。用异丙醇沉淀水相中的RNA。每使用1ml Trizol加入0.5ml异丙醇，室温放置10分钟。离心收集RNA 在2-8℃下以10000㗧离心10分钟，离心前看不出RNA沉淀，离心后在管侧和管底出现胶状沉淀。移去上清。洗涤RNA沉淀用75%乙醇洗涤RNA沉淀。每使用1ml Trizol至少加1ml 75%乙醇。在2-8℃下不超过7500㗧离心5分钟，弃上清。干燥RNA沉淀室温放置干燥或真空抽干RNA沉淀，大约晾5-10分钟即可。不要真空离心干燥，过于干燥会导致RNA的溶解性大大降低。加入25-200无RNase的水或0.5%SDS，用枪头吸打几次，55-60℃放置10分钟使RNA溶解。如RNA用于酶切反应，勿使用SDS。

Trizol法提RNA，纯度巅峰！在基因表达量分析或构建cDNA文库时，从组织或细胞中提取纯度高、完整性好的RNA至关重要。Trizol法是最经典且常见的RNA提取方法。以下是其基本原理和详细步骤。基本原理 𐟧슔rizol法，即异硫氰酸胍-苯酚法，利用强变性剂异硫氰酸胍使细胞裂解，并使核蛋白复合体中的蛋白变性。在特定pH条件下，DNA和RNA的溶解度不同，从而分离。DNA位于中间相，RNA位于水相，再通过有机溶剂沉淀RNA，即可获得纯度较高的RNA。 RNA提取步骤 𐟓 准备试剂：氯仿、异丙醇、75%乙醇、无RNase的水或0.5%SDS（溶液均需用DEPC处理过的水配制）。匀浆处理：组织：将组织在液氮中磨碎，每50-100mg组织加入1ml Trizol，用匀浆仪进行匀浆处理。样品体积不应超过Trizol体积的10%。单层培养细胞：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每10cmⲩ⧧ﯼˆ即3.5cm直径的培养板）加1ml，用移液器吸打几次。Trizol的用量应根据培养板面积而定，不取决于细胞数。Trizol加量不足可能导致提取的RNA有DNA污染。细胞悬液：离心收集细胞，每5-10㗱0⁶动物、植物、酵母细胞或1㗱0⁷细菌细胞加入1ml Trizol，反复吸打。加Trizol之前不要洗涤细胞以免mRNA降解。一些酵母和细菌细胞需用匀浆仪处理。分离核酸蛋白复合物：将匀浆样品在室温（15-30℃）放置5分钟，使核酸蛋白复合物完全分离。可选步骤：如样品中含有较多蛋白质、脂肪、多糖或胞外物质（肌肉、植物结节部分等），可于2-8℃10000㗧离心10分钟，取上清。离心得到的沉淀中包括细胞外膜、多糖、高分子量DNA，上清中含有RNA。处理脂肪组织时，上层有大量油脂应去除。取澄清的匀浆液进行下一步操作。氯仿萃取：每使用1ml Trizol加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温放置3分钟。离心分离：2-8℃10000㗧离心15分钟。样品分为三层：底层为黄色有机相，上层为无色水相和一个中间层。RNA主要在水相中，水相体积约为所用Trizol试剂的60%。通过以上步骤，您可以获得纯度高、完整性好的RNA，为后续的实验打下坚实基础。

RNA提取指南：TRIzol法详解 RNA提取是一个重要的实验室步骤，用于获取细胞和组织中的RNA。这里我们将详细介绍使用TRIzol提取法的步骤，这是一种广泛使用的RNA提取方法。取样和研磨 𐟧ꊩ斥…ˆ，迅速取出组织样本，使用电子天平称重约0.3-0.5克（也可以根据经验估算）。将组织放入液氮预冷的研钵中，边研磨边加入液氮，确保组织在整个过程中不会融化。裂解组织 𐟌€ 对于组织：按每100毫克组织加入1毫升TRIzol，继续研磨至较细粉末，将组织裂解液转移到1.5毫升离心管中，每管约1毫升，室温放置15分钟以上。也可以直接将研磨的较细粉末用枪头刮入已取好的含有1毫升TRIzol的1.5毫升离心管中，4℃放置10分钟，或室温放置15分钟以上。对于细胞：悬浮细胞需预处理，4℃，3000rpm离心10分钟，收集细胞沉淀于1.5毫升离心管底。弃去培养液，加入适量1xPBS洗一次，弃去1xPBS，加入1毫升TRIzol试剂（TRIzol加入量基于细胞数（1毫升/0.5-1x107个）或培养瓶的面积（1毫升/10cmⲯ𜉯𜌧”觧𛦶𒥙訽𛥐𙦉“几次，超净台中室温放置15分钟以上，转移1毫升液体到1.5毫升离心管中。抽提 𐟌Š 按0.2毫升氯仿/1毫升TRIzol的比例加入氯仿，vortex 30秒或用手剧烈摇动15秒，室温放置2-3分钟后，4℃，12000rpm离心15分钟。小心转移上清到一新的1.5毫升离心管中，不要吸取中间层。沉淀 𐟌🊦Œ‰异丙醇/上清=1:1的比例加入异丙醇，上下颠倒混匀，-20℃放置30分钟后，4℃，12000rpm离心15分钟。弃上清，异丙醇不要回流过多，可再短暂离心，用移液器将剩余的异丙醇吸出。漂洗 𐟒犥Š 入1毫升75%乙醇，用手指将沉淀块弹起，上下颠倒几次，4℃，12000rpm离心5分钟。弃上清，75%乙醇不要回流过多，可再短暂离心，用移液器将剩余的75%乙醇吸出。风干和溶解 𐟌쯸 在超净台中自然干燥5-10分钟，不要真空离心干燥。RNA不要完全干透，以防不能完全溶解。用DEPC水溶解RNA，60-65℃助溶5-10分钟。定量 𐟓 进行Total RNA定量，如果不马上定量，将样品贮存于-80℃。通过以上步骤，你就可以成功提取RNA啦！记得在实验过程中保持无菌操作，以确保RNA的质量。

实验室有毒试剂清单｜珍爱生命，远离实验昨天在实验室搞多聚甲醛的时候，没在通风橱里操作，结果今早起来头巨痛！真是教训啊，大家做实验一定要戴好口罩，做好防护！立马整理了一下实验室里的有毒试剂，绝不做实验室的牺牲品！ DMSO（二甲基亚砜）𐟧ꊨ🙤𘪤𘜨忧”褺Ž冻存液的配置，还有作为常见粉剂的溶剂。但它有血管毒性和肝肾毒性，小心为上！ EB（溴化乙锭）𐟒€ EB用于琼脂糖凝胶电泳的核酸染料，剧毒！我们学校仪器平台都不让用EB显影，致癌性很强，大家一定要小心。 PCR实验𐟧슥šPCR实验的时候，苯、二甲苯、酚、trizol、氯仿这些有机溶剂都是致癌的。还有DEPC（焦炭酸二乙酯），用于溶解RNA，但它是潜在的蛋白质变质剂。做PCR一定要戴好口罩！ WB实验𐟓Š WB实验中，PMSF用于蛋白提取，高强度毒性；SDS（十二烷基硫酸钠）用于SDS-PAGE电泳凝胶配置，有刺激作用，可能引起呼吸系统过敏性反应；丙烯酰胺（未聚合）是蛋白电泳凝胶原料，有潜在神经毒性；TEMED（四甲基乙二胺）用于SDS-PAGE凝胶配置，催化凝胶凝固，但易挥发，强神经毒性。 Triton x-100𐟧𔊨🙤𘪤𘜨忦œ‰刺激性，可以因吸入或皮肤吸收受害，大家要小心。多聚甲醛𐟕𕯸‍♂️ 多聚甲醛用于组织固定灌流，易挥发且剧毒。昨天我就是因为这个倒霉东西头才这么痛的。 DTT (二硫苏糖醇)𐟧ꊥ𐏥ˆ†子有机还原剂，散发出难闻的气味。可以因吸入、咽下或皮肤吸收而危害健康。吉姆萨 Giemsa𐟦 吉姆萨染料有极强的毒性，可致命或引起眼睛失明。可以通过吸入和皮肤吸收，其可能的危险是不可逆的效应。过硫酸铵 APS𐟒动🇧᫩…𘩓𕥯𙩻膜和上呼吸道组织、眼睛和皮肤有极大危害性。吸入可致命。甲醇𐟍𖊧”𒩆‡有毒，致命剂量大约是70毫升。甲醇的毒性对人体的神经系统和血液系统影响最大。它经消化道、呼吸道或皮肤摄入都会产生毒性反应，甲醇蒸汽能损害人的呼吸道粘膜和视力。佩戴好防毒面具和护目镜，避免接触其蒸汽，注意在通风橱内操作。乙醚𐟔劤𙙩†š高度挥发，遇明火、高热极易燃烧爆炸，并有特殊气味。化学性质不稳定，日光下去空气接触，易形成爆炸性过氧化物过氧化乙醚。应小心使用。广泛用作麻醉剂。希望大家在做实验的时候一定要注意安全，珍爱生命！

circRNA实验全解 𐟔 实验原理在组织或细胞中提取的total RNA通常包含多种RNA。为了准确分析circRNA，首先需要去除样本中的核糖体RNA和poly-A RNA干扰，然后用RNase酶消化掉线性RNA，从而使circRNA富集。 𐟓Š 实验目的从总RNA中富集circRNA，采用Northern blot和特异的PCR进行验证，并对circRNA的成环特性进行评估。 𐟧ꠥꌦ料 RNA提取试剂盒核糖体RNA去除试剂盒 PolyA结合磁珠 RNAaseR试剂盒放线菌素D Northern blot试剂盒发散引物RT-PCR 𐟓 实验步骤 4.1 RNA提取样品处理组织样品：加入400ul Trizol溶液到装有绿豆大小组织块的EP管中，利用电动组织匀浆器在冰上充分匀浆1-2min，后放置室温充分裂解10min。细胞样品：12孔板细胞弃去上清，每孔加入600ul Trizol溶液。先在冰上裂解15-20min，再用1ml移液枪吹打液体充分裂解贴壁细胞，后将液体转移到RNasefree EP管中。 RNA提取按1:5比例，在Trizol溶液中加入氯仿，手动充分摇匀混合液20-30s，室温放置10min。 4度1200g离心10min，小心转移上层透明液体到EP管中。按异丙醇与Trizol溶液比例为1:2加入异丙醇，上下颠倒混匀液体，室温放置10-15min。 4度1200g离心10min，弃去上清，可见羽毛状RNA沉淀于管侧底部。按等比例加入75%乙醇，温和地悬浮RNA沉淀。 4度7500g离心5min，尽量吸除上清，室温晾干5-10min。用20ul RNase free dH20溶解RNA，测浓度后-80度保存。总RNA定量 RNA在260nm波长处有最大吸收峰，可通过测定RNA样品的OD260和OD280估算出RNA的含量和纯度。OD260值为1相当于40ug/ml单链RNA，该方法提取的RNA OD260/280值在0.8-2之间。 circRNA的预处理去除核糖体RNA和poly-A RNA 使用Invitrogen的核糖体RNA去除试剂盒RiboMinusTM Human/Mouse Transcriptome Isolation Kit（货号K1550-01）。通过磁珠法结合Poly(A)的RNA后剩余的RNA即为Poly(A)-RNA样品。 RNAaseR酶消化 RNase R是一类核糖核酸外切酶，能降解大部分线性RNA，但circRNA不易被RNase R酶消化降解。因此可以通过该实验鉴别circRNA和线性RNA。准备总RNA样品：提取细胞或组织的总RNA，测浓度后备用。 RNaseR反应体系：取5ug total RNA样品按下面体系准备消化。短暂旋转试管，添加5xFirst-StrandBuffer, 0.1MDTT, RNasin和SuperScriptM RT，轻轻移液并将反应液在25℃下孵育5分钟。在50℃下孵育60分钟，然后通过灭活反应在70℃加热15分钟。发散引物可以扩增circRNA，而不能扩增线性RNA。 𐟓š 参考文献 Chen et al. (2015). Isolation of non-polyadenylated and ribosomal-free RNAs from mammalian cells. Methods Mol Biol 1206, 69-80. Yang et al. (2016). Characterization of Circular RNA. Methods Mol Biol 1402, 215-227.

不跑电泳就谈RNA质量？那都是瞎扯！有些人啊，真是让人无语，不跑电泳就敢谈RNA质量的好坏，简直是耍流氓！𐟘䠤𘺤𛀤𙈨🙤𙈨ﴥ‘⯼Ÿ因为很多仪器，比如NarnoDorp2000，根本没法区分DNA和RNA。换句话说，就算你的RNA完全降解了，这种仪器也能读出高纯的OD比值和高浓度数据。所以啊，仪器数据在RNA电泳图合格的前提下才有参考意义！ Trizol沉淀法：看28:18s比例首先，咱们来说说Trizol沉淀法。这种方法提取的RNA，28:18s的比例至少得是1.5:1。为啥呢？因为用异丙醇或乙醇沉淀的时候，5s的小片段也会一起沉淀下来。所以，如果看到明显的5s条带，那其实是正常的，不提示降解。 RNA吸附柱法：两个标准接下来是RNA吸附柱法。这个方法有两个判断标准： 28s:18s=2:1 这个标准的意思是，28s和18s的条带要清晰，尤其是亮度。28S比18s越亮越好。为啥呢？因为降解总是从大片段开始，从28s降解到18s，最后降解到5s。如果最容易降解的28s都没有降解，那就可以推理出mRNA是完好的。 5s带不出现第二个标准是5s带不出现。总RNA包括mRNA、tRNA和rRNA。虽然现在大家都默认总RNA提取试剂盒只对mRNA、tRNA、rRNA负责，但实际情况是，这些试剂盒只提出来的是这三种RNA的混合物，重点是对mRNA负责。所以，各大公司的总RNA提取试剂盒案例所配的RNA电泳图，只有代表“总RNA”的2条带——28s和18s；代表microRNA的5s带，要不没有，要不很弱。电泳图解析看看这几个电泳图吧：泳道2：完全正常的RNA——28s:18s比例大约是2:1，5s位置也基本见不到带。这就说明完全正常，无降解。泳道3,4：完全降解了——28s和18s已经基本降解光了。两条带都看不见了。最后降解成的小片段正好和5s大小一致，所以在5s位置看到了大量的一条浓浓的降解小片段。泳道1,5,6,7,8,9：部分降解了——28s是RNA大片段，更容易降解，所以28s首先降解，表现为28s条带变淡，18s条带明显变粗，造成28s：18s的比例竟然小于1了。然后在不该看到条带或者应该是很弱的5s位置，出现了较明显的5s大小的降解带。总之，不跑电泳就谈RNA质量好坏，那都是瞎扯！𐟘䠥𘌦œ›大家都能通过正规的电泳图来判断RNA的质量，别被那些不靠谱的说法忽悠了！

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