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thp1细胞权威发布_thp1细胞培养(2024年11月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-27

thp1细胞

单核/巨噬细胞流式分析：新手必读指南 𐟑‹大家好，今天我们来聊聊单核/巨噬细胞流式分析的基础知识，适合新手小白哦！单核细胞的基本知识 𐟧 单核细胞在人体内可是个勤奋的小家伙，它们在脉管系统、骨髓和脾脏中不停地循环。在正常情况下，它们不会增殖，但一旦迁移到外周组织，就会分化成树突状细胞或巨噬细胞。单核细胞的特性是它们具有可塑性和异质性，能够快速调整功能表型来适应环境的变化。单核细胞的培养 𐟧늊想要研究单核细胞，首先得把它们从血液或其他组织中分离出来。你可以用阴选试剂盒从 PBMC 中分离出有活性的单核细胞，也可以用 CD14、CD64 和 CD192 作为标志物进行流式分选。原代人单核细胞可以在体外培养，但在 5 天内会在血清或 M-CSF 存在下开始分化为巨噬细胞。单核细胞以粘附和非粘附细胞混合形式生长，比例取决于培养基和刺激因子。除了原代单核细胞，THP-1 细胞系也常用于研究。它们特别依赖细胞浓度，ATCC 建议的浓度是 10E5~10E6/mL。状态不好的 THP-1 培养 3 天后数量不多，继续培养 1~2 天，培养基会严重泛黄。THP-1 适合在 pH 偏酸性环境生长，对培养基很敏感，不宜频繁换液，尽量用相同酸碱度的 1640 培养基。复苏 THP-1 细胞有难度，建议冻存时密度大些，复苏时用小培养瓶。流式分析巨噬细胞的注意事项 𐟎在分析巨噬细胞时，首先要处理组织，比如解剖、研磨、剪碎等，然后酶消化制备单细胞悬液。在上机检测前建议将样本过滤，保证准确性，还能避免堵管。单核细胞可以用特殊分化培养基分化为巨噬细胞，用 GM-CSF 和 M-CSF 能让单核细胞分化。在 1640 培养基中刺激单核细胞，添加相应物质能导致 M1 或 M2 极化。还可以用不同细胞因子先后刺激单核细胞来获得 M1 和 M2 极化。用 PMA 刺激 6 小时能诱导 THP-1 来源的巨噬细胞，然后继续培养能让其向 M1 或 M2 极化。希望这些基础知识能帮到你们，赶紧动手试试吧！𐟒ꀀ

𐟔解决P65磷酸化无条带难题！ 𐟤”你是否在WB实验中遇到了P65磷酸化无条带的困扰？别担心，这里有一些实用的血泪经验分享给你！ 𐟔짻†胞模型选择很重要 RAW264.7小鼠单核巨噬细胞白血病细胞是常用的炎症细胞模型，与NF和炎症密切相关。此外，BMM/BMDM、THP-1等人单核细胞白血病细胞也是不错的选择。 𐟒‰合适的刺激物是关键 LPS（脂多糖）是激活NF信号通路的有效刺激物，其次是TNF€IL-1퉧‚Ž性因子。这些刺激物能诱导巨噬细胞分化，进而激活P65磷酸化。 𐟒ᥢž加M1阳性对照为了确保刺激方式合适，可以增加一个M1促炎巨噬细胞阳性对照。这样，当结果出现异常时，可以迅速排查问题所在。 𐟓LPS刺激条件参考实验室常用的LPS浓度和刺激时间多种多样，但可以通过查阅文献来找到适合自己实验条件的最佳参数。 𐟒᥮ž验细节不容忽视在制样过程中，务必添加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂，并全程低温操作以保持磷酸化的稳定性。此外，封闭液和一抗稀释液的选择也至关重要。希望这些经验能助你顺利解决P65磷酸化无条带的问题！𐟎‰

巨噬细胞M1/M2极化实验详解巨噬细胞是一类位于外周血和炎症组织中的白细胞，属于免疫细胞中的单核细胞类群。它们主要通过吞噬细菌、死亡细胞或细胞残片来参与非特异性免疫调节。巨噬细胞将信号传递给其他淋巴细胞及其他免疫细胞，从而参与特异性免疫调节。巨噬细胞通常以单核细胞前体的形式进入血液中，当单核细胞浸润到组织中时，会分化成巨噬细胞。巨噬细胞主要存在于淋巴结、肺泡壁、骨髓、肝脏以及脾脏等组织中。根据功能以及炎症分泌水平，巨噬细胞分为M1型和M2型两种亚群。 M1巨噬细胞主要由LPS（脂多糖）及IFN𜈥𙲦‰𐧴 𜉦🀦𔻯𜌥ˆ†泌IFN-𜈥𙲦‰𐧴 𜉣€TNF-𜈨‚🧘䥝死因子𜉧퉤🃧‚Ž症因子。M2巨噬细胞主要由IL4（白细胞介素4）、IL13（白细胞介素13）、M-CSF（巨噬细胞集落刺激因子）等激活，主要分泌IL10（白细胞介素10）等抗炎症因子。巨噬细胞的鉴定方式主要有流式细胞术和免疫荧光实验，通过一些巨噬细胞标志物进行鉴定。常见的人和小鼠M1巨噬细胞标志物有CD68、CD80、CD86、CD32等；常见人和小鼠M2巨噬细胞标志物有CD206、CD204、CD163等。 M1和M2巨噬细胞的作用包括：①作为抗原提呈细胞；②杀伤肿瘤效应细胞；③通过释放溶解细胞酶直接杀伤肿瘤细胞；④处理和呈递肿瘤抗原，激活T细胞以产生特异性抗肿瘤细胞免疫应答；⑤通过特异性抗体介导ADCC效应杀伤肿瘤细胞；⑥分泌肿瘤坏死因子（TNF）等细胞毒性因子和产生超氧化代谢产物间接杀伤肿瘤细胞。在基础科学实验中，常用的细胞模型有小鼠RAW264.7巨噬细胞、人THP1单核细胞、小鼠BMDM骨髓细胞等。动物实验研究巨噬细胞的造模更多是偏向于炎症模型，例如急性肺损伤模型。 THP-1（人单核细胞） THP-1是来自急性单核细胞白血病患者血液分离而来，在基础科研实验中，常常诱导分化为巨噬细胞来进行机制研究。THP-1通常受PMA（佛波酯）150nmol/L诱导24h即可分化为巨噬细胞，然后在PMA持续存在的情况下，LPS（100ng/ml）、IFN𜈲0ng/ml）诱导48h，产生M1巨噬细胞；IL4（20ng/ml）、IL13（20ng/ml）诱导48h，产生M2巨噬细胞。 RAW264.7细胞（小鼠单核巨噬细胞） RAW264.7细胞是主要炎症模型、巨噬细胞极化等体外研究细胞，广泛用于急性肺损伤、风湿性关节炎等模型中。LPS（200ng/ml），12h可以诱导此细胞向M1分化，产生炎症因子，10ng/ml IL-4诱导RAW264.7细胞12h可以产生M2细胞。通过这些实验方法，可以更好地研究巨噬细胞的功能和作用，为免疫学和疾病治疗提供更多依据。

B16-F10细胞培养全攻略 𐟔젧𛆨ƒž基本信息英文名称：B16-F10 中文名称：小鼠皮肤黑色素瘤细胞种属：鼠源组织来源：皮肤品系：C57BL/6J 疾病：黑色素瘤 𐟌𑠧”Ÿ长特性与细胞形态生长特性：贴壁生长细胞形态：梭形细胞样；上皮细胞样 𐟔„ 传代与换液传代比例：1:2 ~ 1:4 换液频率：2~3次/周倍增时间：48-72h 𐟧ꠥŸ𙥅𛤽“系与条件培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S 培养条件：5%CO2；37 ℃ ❄️ 冻存条件冻存液：Biochannel细胞冻存液程序降温：液氮长期保存 𐟌Ÿ 细胞培养特点 DMEM（含1.5g/L NaHCO3）培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。推荐的基础培养基是DMEM（高糖）培养基。 DMEM培养的B16-F10细胞会分泌较多黑色素，而1640培养基则较少。可根据实验需求尝试更换培养体系，更换时建议留种。更换为DMEM培养液时，请确保血清和培养液质量，否则可能导致细胞不长、生长缓慢以及黑色素大量分泌。 𐟤” 常见问题解答收货时细胞出现伪足或碎片较多怎么办？受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。培养过程中细胞发生贴壁怎么办？少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。培养过程中细胞发生聚团怎么办？少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。培养基里一定要加巯基乙醇吗？ 巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

脆皮防晒指南：氧化锌纳米颗粒的利与弊防晒霜中常见的无机成分氧化锌（ZnO）及其纳米颗粒（ZnONPs）因其美白和强紫外线吸收特性，在皮肤护理产品中广泛应用。然而，使用这些成分时需要注意，特别是对于皮肤有破损或敏感的人群。 𐟔研究表明，单独使用ZnONPs不会对皮肤屏障造成影响，也不会增加经皮水分流失（TEWL）。然而，当ZnONPs应用于受损皮肤时，可能会加重炎症反应，延长恢复期。ZnONPs可以通过受损表皮渗透到真皮层，导致表皮层增厚3~5倍，甚至比单独使用UVB组更严重。即使在72小时后，其TEWL值仍有增加趋势。 𐟐🯸动物实验结果显示，UVB和ZnONPs联合暴露对皮肤表皮层的损伤更为严重。ZnONPs破坏溶酶体活性，促进角化细胞和巨噬细胞的外泌体分泌。这些外泌体刺激M1巨噬细胞活化，进一步暴露于ZnONPs会上调NF信号通路和NLRP3炎症小体-自噬-外泌体通路。巨噬细胞释放的细胞因子和外泌体进一步加速了角质形成细胞的炎症反应，影响了UVB诱导的皮肤损伤。 𐟓Š具体来说，ZnONPs联合UVB暴露导致HaCaT细胞自噬阻塞和溶酶体功能障碍。ZnONPs被细胞摄取后，导致溶酶体储存功能失调，通过干扰溶酶体稳定性干扰自噬通量，加重了UV诱导的角质细胞损伤。此外，HaCaT细胞分泌的外泌体可募集THP-1来源的巨噬细胞，加速M1巨噬细胞的极化。ZnONPs还通过调节自噬介导的NLRP3炎性体和巨噬细胞外泌体分泌，诱导M1巨噬细胞持续炎症反应。 𐟚릀𛧻“来说，当皮肤有破损或皮损时，不建议使用含有氧化锌纳米颗粒（ZnONPs）的防晒产品。这些成分可能会破坏皮肤屏障，加重炎症反应，延长恢复期。在选择防晒产品时，应根据自己的皮肤状况选择合适的产品，避免使用可能对皮肤造成伤害的成分。

紫杉醇脂质体vs白蛋白紫杉醇 8个周期的化疗已经来到了下半程（AC-THP），T代表紫杉类的药物，HP分别代表两个靶向药。医生说我的情况可以选择紫杉醇脂质体或者白紫，我最后选择了脂质体介绍一下目前的感受：紫杉醇脂质体 1.胃肠道反应和红药水不同的是，白药水的胃肠道反应真的算是轻微很多，基本上都是轻微腹泻而不是呕吐。 2.骨髓抑制白细胞降低和轻微贫血，不过抑制得没有红药水严重。 3.脱发很轻微，而且是可逆的。另外，从其他病友那里得到白紫的使用感受如下白蛋白紫杉醇 1.胃肠道反应基本上都是轻微腹泻而不是呕吐。 2.骨髓抑制白细胞降低和轻微贫血，不过抑制得没有红药水严重。 3.脱发较脂质体来说会严重，脱毛神器，不过是可逆的。 4.手足麻痹这个药比较大的特点就是手脚会发麻，同时身体会疲惫感增加。

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