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离子交换层析权威发布_离子交换层析的原理(2024年12月精准访谈)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：观点更新日期：2024-11-30

离子交换层析

多糖分离纯化指南：避免常见问题的关键步骤多糖分离纯化是多糖研究中的重要步骤，分离出的多糖组分质量直接影响后续表征和活性实验的结果。以下是多糖分离纯化过程中的一些关键事项，希望能帮助你少走弯路。 𐟌𑠧𒗥䚧𓖧š„提取与除杂原料处理：在提取多糖之前，先用80%以上的乙醇处理原料，以去除部分色素和小分子。淀粉去除：如果原料中淀粉含量高，先用酶解法去除淀粉，以免后续分离到过多的淀粉类葡聚糖。提取方法：除了热水浸提，还可以使用碱提法，这样得到的多糖种类更加丰富。脱色脱蛋白：大孔吸附树脂是一种有效的脱色脱蛋白方法，如果避免化学试剂对多糖的影响，可以尝试使用。透析：如果研究的是多糖，需要将粗多糖彻底透析，以去除小分子，避免后续分离到寡糖。冻干：如果有冻干设备，建议使用冻干方法，冻干样品的溶解性会更好。 𐟔젥䚧𓖧š„离子交换层析分离上样量：上样量不能过大，以避免样品流穿。有的客户在水洗组分里分到了酸性多糖，可能是这个原因。氯化钠浓度梯度：如果要分离更多的组分，可以将氯化钠的浓度梯度更加细化，但这样需要更多的次数才能积累足够的样品。透析：盐洗脱的组分应彻底透析，避免最终分离到的样品含有盐及其他小分子，影响后续实验。 𐟒‰ 多糖的凝胶过滤层析纯化选择合适的填料：根据样品分子量的分布，选择合适的凝胶过滤填料，一般目标多糖分子量最好落在填料分离范围的中数附近。进口填料：进口的填料优于国内大宗试剂平台的填料，当然，国内也有几家专业的分离填料公司的产品比较可靠。洗脱液合并：因为苯酚硫酸法做的洗脱曲线对单一组分的分辨要差些，所以合并洗脱液时，应该尽可能缩窄范围，合并位于峰尖那几管。以便尽可能避免，合并冻干后，分子量检测并不均一的情况。通过以上步骤，你可以更好地分离和纯化多糖，为后续的实验提供高质量的多糖样品。

如何选择合适的层析柱？𐟧ꊥ𑂦ž柱是一种用于实验室柱层析（凝胶层析技术）的设备，通常由玻璃或塑料制成，内部填充有固定相，如硅胶、氧化铝等吸附剂。通过样品各组分在固定相和流动相中分配系数的不同，实现分离。选择合适的层析柱需要考虑多个因素：明确分离目标：首先，确定你要分离的物质类型，例如蛋白质、多肽、核酸等。了解目标物质的物理化学特性，如分子量、等电点（pI），有助于选择正确的层析柱和填料类型。选择合适的填料：根据所需进行的层析类型（如亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等）选择相应的填料。例如，离子交换层析需要选择阳离子或阴离子交换树脂。考虑柱尺寸：层析柱的尺寸应该与纯化规模相匹配。对于实验室小规模纯化，可以选择重力层析空柱；而大规模或自动化层析则需要适配液相纯化系统的中压层析空柱，如C型空柱。预算考量：如果预算有限，可以选择自行装柱的方式，购买空柱和填料单独进行装填。预装柱虽然方便且性能通常更优，但成本相对较高。实验设备兼容性：确保所选的层析柱与你的实验设备兼容，例如能够与纯化仪、注射器或蠕动泵等设备连接使用。操作经验：如果是初次进行柱层析，可能需要通过实验来确定最佳的柱长和填料用量，以避免浪费材料。厂商选择：选择信誉良好的厂商购买层析柱和填料，确保产品质量和售后服务。样品性质：根据样品的性质（如疏水性、亲和性等）选择合适的固定相和流动相，以达到最佳的分离效果。实验目的：分析型层析通常用于检测和鉴定样品，而制备型层析则用于大量纯化目标物质。根据实验目的选择相应规格的层析柱。通过以上几点，你可以更好地选择合适的层析柱，实现高效的样品分离纯化。

生物专业纯化技术员：9-18点双休 𐟓Œ 岗位职责：生物专业纯化生产技术员，18-35岁，大专及以上学历。负责溶液配制、亲和层析、离子交换层析、超滤等蛋白纯化操作。掌握仪器设备原理，能处理常见设备问题，对接实验室管理，报修。参与纯化工作，根据SOP规范操作AKTA、超滤仪等设备进行产业化生产。负责车间日常清洁消毒、清场工作，确保环境卫生符合要求。主导设备基本维护及清洁，并输出相关文件记录。完成公司安排的其他任务。 𐟓Œ 任职要求：生物相关专业背景，有设备工作经验者优先，专科及以上学历。具有单抗、重组蛋白、病毒载体疫苗、抗体药物等相关纯化工作经验。具有较强的学习能力和独立思考能力，能够承担一定的工作压力，严谨敬业。具备处理实验过程中设备突发性问题的能力。具有工业化蛋白纯化经验、GMP生产经验者优先。 𐟓Œ 工作时间： 9:00-18:00（能接受加班），双休。 𐟓Œ 工资待遇：前期8小时双休保底3500+补贴+加班费，综合工资4500-6000，有经验的可以和领导申请加工资。 𐟓Œ 工作地点：中德生态园附近。

如何高效备考郑大生物与医药？ 𐟅𐯸生物化学与分子生物学课本预习：首先，花时间快速浏览课本，做笔记。我通常每两三天完成一章，重点章节如蛋白质、酶、代谢可能需要四五天。简单章节大约一天搞定。从九月开始，大约一个月就能看完。虽然有人推荐杨广笑老师的课，但我觉得有点枯燥，后来就没看了（无恶意）。生化中有一部分是分子生物学的知识，我直接看了朱玉贤的《分子生物学》，之前本科学过，相对简单。题库背诵：从学姐那里买了题库，开始背诵。有些知识点自己做过笔记会有印象，一般背到熟悉的会再去看看自己的笔记巩固一下。也可以在某宝上买背诵笔记。重复背诵：题库背了两遍，不断重复巩固。真题练习：十二月开始看真题，找出一些重点再巩固。比如看到离子交换层析，可以回想蛋白质分离这部分。真题里有些答案不太好，我会自己整理。考频高的知识点如Southern、Northern、Western印迹杂交，还有氨基酸缩写都要记得。最后冲刺：有时间就看题库里重点章节，在考试前一直重复记忆。 𐟅𑯸普通生物学课本预习：先看一遍课本，普生挺有意思的。比如树的年轮其实是次生木质部组成的，还有十二指肠是上接胃的幽门，下接小肠。之前就听说过十二指肠，但不知道在哪里。资料背诵：在某宝上买了普生资料和背诵笔记，然后就是一直背。普生可以理解着背，和生活有点相关。普生的资料很薄，我背了大概三四遍。真题练习：一定要看真题！真题重复率高，主要是动物植物这块。这块一定要多背，到后面没时间就背动植物这块，一定要熟。普生第二版的习题册有一些简答题是真题里的，我会参考着看。不过我在拼多多里买的影印版有点看不清楚。 𐟅𞯸时间安排上午：三四个小时看英语和政治，中午午休一下，大概一点到两点睡觉。下午和晚上：看专业课。可以每天写下自己要干的事情，干完就可以玩啦，这样会很轻松。我会给自己定个周末，比如一个礼拜学六天，周日玩一天，但还是会早起，大概七点二十起床。每天都是如此。如果实在学不下去了也可以去休息一下，这样学习就不会很枯燥，感觉每天学的很累，不要有负罪感，该玩就玩，该学习就学习。剩下的就是多背多记忆啦，祝大家成功上岸！

𐟧‚盐析实验指南盐析，这一经典蛋白纯化技术，是科研实验中的得力助手。𐟒꠩€š过巧妙利用蛋白质在不同盐浓度下的溶解度差异，我们可以实现蛋白质的分离与纯化。𐟔 在低盐浓度时，加入适量的中性盐会提升蛋白质的溶解度，这一过程被称为盐溶。𐟌᯸ 但随着盐浓度的逐渐增加，盐离子会中和蛋白表面的电荷，导致蛋白质失去水化膜并聚集沉淀，这就是盐析的关键步骤。𐟒犊硫酸铵、硫酸钠、氯化钠等都是常用的中性盐，其中硫酸铵因其高效性而被广泛选择。𐟧ꠥœ襮ž验中，通常在低温条件下搅拌加入硫酸铵固体或饱和溶液，目标蛋白质就会在适宜的盐浓度下沉淀析出。𐟌᯸ 除了盐析，还有亲和层析、离子交换层析和凝胶过滤层析等多种蛋白纯化技术，它们各有千秋，共同构成了生物化学分离纯化的丰富手段。𐟧� 现在，就让我们一起探索盐析的奥秘，开启科研之旅的新篇章吧！𐟌Ÿ

荧光色素标记抗体的详细步骤准备凝胶滤柱：为了完成结合反应后分离标记抗体和游离的荧光色素，需要准备一个凝胶滤柱。选择排除极限为20000～50000的凝胶介质和细粒级凝胶（直径约50）。滤柱的大小可以根据偶联反应的总体积㗲0来确定。按照厂家说明准备滤柱，用20倍柱床体积的PBS灌注滤柱，直至缓冲液水平刚好降至低于柱床顶部。然后关闭滤纸底部的阀门或用塑膜黏土（或parafilm）封闭底端，使滤柱不再流动。抗体溶液的制备：用0.1mol/L的硼酸钠或碳酸钠配制浓度至少为2mg/ml的抗体溶液（pH9.0）。避免引入含一级胺的外来分子。溶解FITC或TRITC：用无水DMSO（优级纯）溶解FITC或TRITC至1mg/ml。每次标记反应时新鲜配制。染液与蛋白溶液的混合：每1ml蛋白溶液加50染液。染液须以每次5缓慢加入，加入时应轻轻地连续搅拌混匀。避光反应：将混合物置4℃避光反应1小时。加入氯化铵：加氯化铵至50mmol/L，室温孵育2小时。然后加入0.1%二甲苯氰和5%甘油。分离结合物与未结合的染料：通过凝胶过滤分离结合物与未结合的染料。小心地将偶联反应产物加在滤柱顶部，打开阀门使抗体溶液流过滤柱直至刚好进入柱床。再小心地将PBS加在滤柱顶部并与缓冲液供应装置连接。结合染料的抗体首先洗脱，通常可在室光下见到。贮存洗脱液：将洗脱液的结合物4℃贮存于避光容器，必要时加入0.02%叠氮钠。测量荧光素和蛋白的比率：进行荧光素偶联反应时，应通过测量495nm和280nm波长的吸光值计算荧光素和蛋白的比率。罗丹明的测量波长在550nm和280nm。荧光素的吸光值比例（496nm/280nm）应在0.3～1.0之间，罗丹明的吸光值比率（550nm/280nm）在0.3～0.7之间。低于上述比率将导致低信号，高比率则出现高背景。若比率太低，应使用低浓度抗体与高浓度染料重复结合；若比率太高，则可适当调整后重新标记，或通过DEAE离子交换层析柱进一步纯化抗体。用10mmol/L磷酸钾（pH8.0）平衡并灌注滤柱，通过增加盐浓度进行梯度洗脱。测量每一组分的吸光值比率（495/280或550/280），选取适当组分合并。

华南农大生物化学和细胞生物学备考攻略 ### 生物化学338 𐟌𑊊今年的生物化学真题重复率比去年低，但整体难度并不高。虽然压分，但只要准备充分，还是可以轻松应对的。我个人的备考经验是从3月份开始，反复看了王镜岩的两大本教材（如果时间紧张，可以考虑黄卓烈老师的教材）。今年的考试题目主要是填空题和判断题，这些题目相对简单，可以说是送分题。名词解释和问答题虽然有些变化，但总体来说还是基础题目，只要准备充分，问题不大。问答题基本上都是练习题上会出现的题目，比如密码子的简并性、尿素循环、阳离子交换层析柱的洗脱顺序等。总的来说，生物化学虽然压分，但题型变化不大，知识点基本固定。历年真题还是很有参考价值的，建议去找学长学姐要历年真题，这样能更好地把握考试方向。细胞生物学872 𐟌 细胞生物学的真题重复率比生物化学稍低一些，但整体难度也不高。我推荐的参考教材是翟中和的《细胞生物学》第五版或第四版（第四版中细胞分化那一章节的胚胎发育过程有点多余，但第五版有些细节如模式生物又没有第四版做得好）。我从3、4月份开始备考，反复看了几遍教材。名词解释基本上是往年真题，除了有一两个题目是之前没考过的，其余名词解释基本上是往年的真题。填空题今年都比较基础，但还是有两三道难题，不过这些难题只占了2-3分，其余都是基础题。如果准备充分的话，填空题基本上是没有问题的。问答题很多概念也是之前真题考过的，比如溶酶体的结构和功能、蛋白质分选基本途径、物质运输等。所以真题具有参考价值，但不能死记硬背，一定要做到举一反三，掌握其内在的知识点并且发散其会进一步涉及的知识点。最后是3道分析题一共45分，这三道分析题是细胞生物学中唯一有意思的题目了。第一道是细胞生物学配套练习册上的原题，所以多刷题还是有好处的。第二道考到了霍乱毒素，但实质是会涉及到内吞作用、蛋白质分选以及一些细胞生物学技术的运用。第三题主要考你对差速离心法的掌握。所以个人感觉如果是在考场上，分析题第二题和第三题还是有难度的。总体来说，细胞生物学难度不大，可以多看几遍教材，注重细节。如果同学们需要华农真题以及其他资料的话，可以随时找我哈！

医学检验必看：生检实验方法全解析大家好！今天我们来聊聊医学检验中的一些常见实验方法，特别是那些让你头疼的生检物质。别担心，我已经帮你整理好了，这样你就能轻松分辨出哪些是Trinder方法，哪些是普通方法啦～快来看看吧！葡萄糖 (Glu) 葡萄糖的测定方法有很多，但最常用的两种是己糖激酶法和葡萄糖氧化酶法（POD-GOD法）。这两种方法都很经典，大家一定要掌握哦！甘油三酯 (TG) 甘油三酯的测定方法主要有GPO-POD法（磷酸甘油氧化酶法）。如果你想做更精确的测量，可以用同位素稀释质谱法。胆固醇 (TC) 胆固醇的测定方法有胆固醇氧化酶法（COD-PAP法）。同样，如果你想更精确地测量，可以试试同位素稀释质谱法。 Trinder反应 Trinder反应主要用于血脂肪酶的测定，方法有比浊法和酶偶联法（546nm）。这两种方法都很灵敏，适合临床检测。尿酸尿酸的测定方法有尿酸酶-过氧化物酶法（520nm）。这个方法非常经典，大家一定要记住哦！肌酐 (Cr) 肌酐的测定方法有肌氨酸氧化酶法和碱性苦味酸速率法（510nm）。后者需要一些特殊的仪器和试剂，但结果非常准确。胆红素胆红素的测定方法有胆红素氧化酶法（BOD-POD法）和重氮盐改良JG法。这些方法都很灵敏，适合临床检测。总蛋白 (TP) 总蛋白的测定方法有双缩脲法和凯氏定氮法。双缩脲法最常用，结果也很可靠。清蛋白 (Ab) 清蛋白的测定方法有染料结合法，常用的染料有溴甲酚绿和溴甲酚紫。这些方法都很灵敏，适合临床检测。糖化血红蛋白 (HbA1c) 糖化血红蛋白的测定方法有离子交换层析微柱法和高效液相色谱法。这两种方法都很精确，适合糖尿病患者监测血糖控制情况。脂蛋白 (LP) 脂蛋白的测定方法有琼脂糖凝胶电泳法和超速离心法。前者需要一些特殊的仪器和试剂，但结果非常准确。后者则适用于实验室研究。血清脂蛋白 (Apo) 血清脂蛋白的测定方法有免疫透射比浊法和免疫散射比浊法。这两种方法都很灵敏，适合临床检测。尿素尿素的测定方法有二乙酸-显色法和豚酶波氏比色法（560nm）。这些方法都很经典，大家一定要记住哦！肌酸激酶 (CK) 肌酸激酶的测定方法有免疫抑制法和速率法。这些方法都很灵敏，适合临床检测。乳酸脱氢酶 (LDH) 乳酸脱氢酶的测定方法有免疫抑制法和速率法。这些方法都很经典，大家一定要记住哦！血淀粉酶血淀粉酶的测定方法有以天然淀粉为底物的测试方法和限定性底物法（450nm）。这些方法都很灵敏，适合临床检测。胆汁酸 (TBA) 胆汁酸的测定方法有酶循环法。这种方法需要一些特殊的仪器和试剂，但结果非常准确。血氨血氨的测定方法有谷氨酸脱氢酶直接测定法（GLDIO）。这种方法需要一些特殊的仪器和试剂，但结果非常准确。离子钙离子钙的测定方法有离子选择电极法和同位素稀释质谱法。前者需要一些特殊的仪器和试剂，但结果非常准确。后者则适用于实验室研究。血钙血钙的测定方法有分光光度法和离子选择电极法（ISE）。这两种方法都很经典，大家一定要记住哦！钠、钾钠和钾的测定方法有火焰光度法和比色法。这两种方法都很经典，大家一定要记住哦！血磷血磷的测定方法有还原钼蓝法和连续检测法（340nm）。这两种方法都很灵敏，适合临床检测。 ALTIASTIALPIGGT ALT、AST、ALP、GGT等酶的测定方法有连续检测法（340nm）。这些方法都很经典，大家一定要记住哦！希望这些总结能帮到你们！如果有任何问题或需要更多信息，欢迎随时留言哦！𐟘Š

蛋白质纯化全攻略：从细胞到实验室蛋白质纯化，听起来有点高大上，其实就是一种从混合物中分离和纯化蛋白质的实验技术。这个过程其实还挺复杂的，但每一步都很关键。下面我就来详细讲讲。细胞裂解：释放蛋白质的第一步 𐟒助斥…ˆ，你得把细胞搞碎，这样才能把里面的蛋白质释放出来。常用的方法有机械破碎、超声波破碎，还有用化学方法。比如说，用一些强酸强碱啥的。细胞裂解缓冲液：温和点的方法 𐟌🊤𘺤𚆤𘍨𛆨ƒž死得太惨，我们通常会加点缓冲液，比如PBS（磷酸盐缓冲液）或者Tris-HCl缓冲液。用量一般是细胞湿重的2-10倍，浓度在10-50 mM之间。蛋白酶抑制剂：保护蛋白质 𐟛᯸ 接下来，为了防止蛋白质被酶降解，我们会加入一些蛋白酶抑制剂，比如PMSF（苯甲砜）和EDTA（乙二胺四乙酸）。用量一般是细胞湿重的1-2倍，浓度在1-2 mM。澄清：去杂质 𐟚🊧„𖥐Ž，通过离心或者过滤的方法，把细胞碎片、核酸和其他杂质去掉。常用的澄清剂有聚乙二醇（PEG）和聚丙烯酰胺（PAA），用量和浓度根据具体实验需求来定。脱氧胆酸：去脂质 𐟍𖊨🙤𘀦�˜露𚤺†去掉脂质和脂蛋白，用量一般是细胞裂解液体积的0.1-0.5%，浓度在1-5 mM。分离：找到目标蛋白质 𐟎Ž夸‹来就是分离了，用柱层析、电泳、凝胶过滤等技术，把目标蛋白质和其他蛋白质分开。层析缓冲液：控制分离过程 𐟒犥𑂦ž缓冲液在这里起到关键作用，常用的有PBS和Tris-HCl缓冲液，用量和浓度根据具体实验需求来定。盐浓度梯度：更精细的分离 𐟌Š 有时候还需要用到离子交换层析或亲和层析，这时候就要用到盐浓度梯度了。常用的盐有NaCl和KCl，用量和浓度根据具体实验需求来定。纯化：更纯净的蛋白质 𐟒Ž 通过进一步的层析、电泳或其他技术，去除残留的杂质，让蛋白质样品更纯净。膜层析缓冲液：最后的冲刺 𐟏 在膜层析这一步，常用的缓冲液有PBS和Tris-HCl缓冲液，用量和浓度根据具体实验需求来定。亲和剂：最后的抓手 𐟤 亲和层析是最后一步，常用的亲和剂有Ni-NTA（氮古铜螯合树脂）和Glutathione（谷胱甘肽），用量和浓度根据具体实验需求来定。浓缩：提高浓度 𐟔劦ŠŠ纯化的蛋白质样品浓缩到所需的浓度，常用的浓缩缓冲液有PBS和Tris-HCl缓冲液，用量和浓度根据具体实验需求来定。浓缩剂有聚乙二醇（PEG）和聚丙烯酰胺（PAA），用量和浓度根据具体实验需求来定。储存：保持稳定 ❄️ 最后一步就是把蛋白质样品冻存或冷藏，以保持其稳定性。这样你就可以随时取出来用了。整个过程虽然复杂，但每一步都很关键。希望这篇攻略能帮到你！

离子交换法：蛋白分离秘籍离子交换层析法是一种强大的工具，用于分离带有不同电荷的蛋白质。𐟔砩€š过控制带电分子与带有相反电荷的离子交换填料之间的相互作用，我们可以实现特定分子的结合与洗脱，从而达到分离的目的。𐟌€ 在等电点环境中，蛋白质的表面净电荷为零，因此不会与带电的填料发生相互作用。然而，当环境pH值高于其等电点时，蛋白质会与带有正电荷的填料，即阴离子交换剂相结合。𐟔„ 相反，当环境pH值低于其等电点时，蛋白质会与带有负电荷的填料，即阳离子交换剂相结合。𐟔„ 这种利用离子交换柱层析法分离蛋白质的方法，就像是一场魔法般的分离游戏。𐟎𒠩€š过精确控制pH值和选择合适的离子交换剂，我们能够巧妙地将不同蛋白质从混合物中分离出来。𐟌Ÿ

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