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细胞培养箱前沿信息_co2培养箱说明书(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-02

细胞培养箱

冻存细胞处理与复苏全攻略，轻松上手！ 𐟓栦”𖥈𐥆𛥭˜细胞后，首先检查包装箱内的干冰是否充足，冻存管是否融化。如果发现冻存管已经融化，请拍照留存，并在24小时内联系客服。如果一切正常，请及时将冻存管放入超低温冰箱内保存。如果长时间不使用，必须先在超低温冰箱内过夜，然后转移到液氮中保存。 𐟔„ 冻存细胞复苏步骤：准备好100mm培养皿，并进行标记。加入预热好的12ml完全培养基。将冻存管放入37℃水浴锅中，轻轻摇晃，待细胞悬液完全溶解后，转移至安全柜中进行操作。用无菌吸管吸取溶解液至培养皿中，顺时针摇匀。在显微镜下观察细胞状态并记录。将培养皿放入二氧化碳细胞培养箱中培养，18小时后更换完全培养基。

细胞克隆实验全攻略：从准备到结果解读细胞的消化 𐟧슥–对数生长期的细胞，分别加入0.5mL 0.25%的胰蛋白酶，放入细胞培养箱中消化2分钟。从培养箱中取出细胞，加入1mL完全培养基，吹打成单个细胞。常温下1000rpm离心5分钟收集细胞。离心后去除上清液，加入1mL完全培养基，吹打成单个细胞悬浮液备用。活细胞计数 𐟔⊥–10细胞悬浮液，加入90台盼蓝溶液，涡旋振荡混匀。用酒精清洁血细胞计数器的小室和盖玻片，然后用脱脂棉擦干。用微量移液器吸取10稀释的样本充满两个小室。计数4个大方格中的细胞总数，活细胞透明有折光（未染色），死细胞则染成蓝色。细胞密度计算方法：每个方格中活细胞总数平均值 x 稀释倍数 x104=活细胞数/mL。细胞接种与培养 𐟌𑊥𐆧𛆨ƒž悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每孔500个细胞梯度密度接种于含2mL 37℃预温培养液六孔板中，并轻轻转动，使细胞分散均匀。置37℃ 5%CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2~3周。每隔3~4天换一次新鲜培养基。细胞克隆固定与染色 𐟎芧𛏥𘸨炥𜌥𝓥Ÿ𙥅𛥭”中出现肉眼可见的克隆时，终止培养。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次。加5mL 4%多聚甲醛固定细胞15分钟。除去固定液，加适量0.4%结晶紫染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。细胞克隆计数与拍照 𐟓𘊥𐆥𙳧š🥀’置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数。最后计算克隆形成率。克隆形成率 =（克隆数/接种细胞数）㗱00%。实验关键 𐟔动ꌦˆ功的关键是细胞悬液的制备和接种密度。细胞一定要分散得好，不能有细胞团，接种密度不能过大。细胞在进行克隆形成实验时要求有95%以上的分散度，否则结果的准确度会受到很大影响。一般初代培养细胞克隆形成率弱，传代细胞系强；二倍体细胞克隆形成率弱，转化细胞系强；正常细胞克隆形成率弱，肿瘤细胞强。

实验室改造初见成效，新实验即将启动经过两次修改，实验室的生物安全协议终于在上周获得批准。我立刻开始采购各种试剂和耗材，实验室的启动资金也因此迅速减少。本周，我享受了多次拆快递的乐趣，与国内的双十一购物节完美同步！周五下班前，我对实验室进行了彻底清洁和整理，终于让它看起来像一个正规的实验室。虽然有些收尾工程还没完成，比如大型设备的安全用电规划和细胞培养箱的二氧化碳装置等，需要等待后勤部门的安排。一些设备的箱子也暂时存放在角落，以备退换。不过，下周我可以开始进行一些简单的分子生物学实验了，这让人非常激动！此外，实验室的第三位成员将在本月底正式入职，这也是一个令人高兴的消息。与供货商周旋确实费脑筋，虽然每天下班后感到筋疲力尽，但工作的乐趣仍然让人充满期待。#实验室日常

贴壁细胞传代实验全攻略细胞复苏步骤：首先，使用前用紫外线照射超净工作台30分钟，并用75%酒精擦拭台面，保持干净整洁。使用时一定要打开通风。将冻存细胞从-80度冰箱或液氮罐中取出，立即放入37℃恒温水浴中解冻，不停晃动以加速化冻。将化冻的细胞液转移至装有3mlDMEM完全培养基的5ml离心管中，吸打均匀。注意液体不要留在瓶口或瓶盖上，避免污染。复苏细胞时，离心机提前降温至4℃，以1000rpm的转速离心5分钟并弃上清（离心的速度和时间根据细胞系不同有所差异）。用3mlDMEM完全培养基重悬细胞，并转移至6cm细胞培养皿中，放入细胞培养箱。在显微镜下观察复苏细胞的状态，并及时（每48小时）更换DMEM完全培养基。当细胞密度占显微镜视野80%-90%时，进行细胞传代。贴壁细胞传代步骤：弃置原培养皿中的培养基，从培养皿边缘加入2ml预热的PBS平衡盐溶液润洗细胞（注意不要直接冲到细胞表面），并弃置。沿培养基侧壁加入1ml预热的0.25%（w/v）Trypsin-EDTA，使胰蛋白酶完全覆盖细胞表面。于细胞培养箱中孵育2分钟（孵育时间根据细胞系不同有所差异，如不确定细胞消化时间，每隔1分钟取出在显微镜下观察，约有50-70%细胞飘起，即可继续操作）。向培养皿中加入1ml完全培养基中和Trypsin的作用，并轻轻吸打细胞表层数次。将细胞悬液转移到5ml离心管中，在室温下以1000rpm的转速离心3分钟。小心弃去离心管中的上清液，使用1ml完全培养基轻轻重悬细胞沉淀，使其完全被吹打为单个细胞状态，尽量减少泡沫的产生。进行细胞计数后以1:3（1:3～1:6均可）的比例进行细胞传代。取三只新6cm细胞培养皿，每只培养皿中加入3ml完全培养基，将细胞悬液平均分配至三只培养皿中，盖上盖子后，按照画“十字”的操作，将细胞摇匀。将细胞培养皿放入细胞培养箱中，继续培养，每天观察细胞状态并及时更换培养液。

𐟎‰新细胞到手啦！𐟎‰ 𐟓栥Œ…裹终于到啦！打开一看，新买的细胞静静躺在T25培养瓶中。 𐟔 首先，得仔细检查包装是否完整，培养瓶有无破损或漏液哦。 𐟍𖠦Ž姝€，用75%的酒精轻轻擦拭培养瓶外部，然后放入37摄氏度、5%二氧化碳的细胞培养箱中，让细胞们安静地“睡”3-4小时。 𐟔젤𙋥Ž，取出培养瓶，用显微镜仔细观察细胞的生长情况。别忘了在不同倍数（40x, 100x, 200x）下拍照保存，为售后留个底哦。 𐟌𑠥悦žœ细胞密度达到80%以上，就要考虑传代培养啦。否则，就移除培养基，预留6毫升左右继续培养，等密度合适再传代。新细胞到手，一切都得小心翼翼地呵护它们哦！𐟒•

细胞克隆形成实验：详细步骤与成图方法细胞克隆形成实验是一种常用的细胞生物学研究方法，通过这种方法可以研究细胞的增殖和分化。以下是详细的实验步骤和注意事项：细胞准备 𐟧ꊩ斥…ˆ，选择处于对数生长期的细胞，这个时候细胞增殖活跃，非常适合进行克隆形成实验。使用0.25%的胰蛋白酶消化细胞，将细胞完全悬浮于完全培养基中，并进行准确计数。细胞接种 𐟌𑊥𐆧𛆨ƒž悬液进行梯度倍数稀释，根据实验需要控制每孔的细胞数量，通常在400-1000个细胞/孔之间。将稀释后的细胞悬液接种于6孔板或其他培养板中，每个实验组设3个复孔以提高实验的准确性。注意稀释细胞可采取梯度稀释法，铺板后在显微镜下观察细胞数量和状态，如是否是单克隆，数量是否适宜。数量过多导致克隆会连成一片，数量过少可能会导致克隆无法正常生长。培养 𐟌🊥𐆦Ž姧好的细胞培养板置于37℃、5% CO2的细胞培养箱中继续培养。培养时间根据细胞类型和生长速度而定，通常需要10-14天或直到大多数单个克隆中的细胞数超过50个细胞，克隆的大小通常在0.3到1.0毫米之间。固定与染色 𐟎芥𝓥…‹隆形成后，使用4%多聚甲醛或甲醇固定细胞，固定时间根据实验条件而定，通常为15-30分钟。弃去固定液，用PBS洗涤细胞。使用结晶紫（0.1%-0.5%浓度）或其他染色剂对细胞进行染色，染色时间控制在5min-20min内。染色后用PBS清洗多余的结晶紫染料，将细胞克隆晾干。观察与计数 𐟔 使用倒置显微镜观察细胞克隆的形成情况，并进行拍照记录。对克隆进行计数，计算克隆形成率：克隆形成率=(克隆数/接种细胞数)㗱00%。通过以上步骤，你可以得到细胞的克隆形成情况，进一步研究细胞的增殖和分化机制。

细胞染色全攻略：从零开始到实验结果细胞染色其实并不复杂，只要按照步骤来，你也能轻松搞定。今天我就来分享一下我们在实验室常用的细胞染色方法和操作步骤，希望对大家有帮助。准备工作 𐟧ꊩ斥…ˆ，你需要消化并收集细胞，然后以2-10㗱0Ⳡcell/coverslip的密度接种到24孔板中。滴加50-100⵬的细胞悬液，2小时后补加500⵬的10%FBS+DMEM。培养细胞 𐟌𑊥𐆲4孔板放入37℃的细胞培养箱中培养48小时，然后用显微镜观察。选择细胞状态和数量都合适的玻片进行染色。固定细胞 𐟔犥Ž𛦎‰旧的培养液，用冰冷的PBS洗两次。然后加入0.5ml的3.7-4%甲醛（在PBS中），室温固定10分钟。穿膜处理 𐟌Š 再用PBS洗两次，加入0.5ml的穿膜液（0.1% triton X-100 + 0.1M Gycine），冰上放置30分钟。封闭非特异性结合 𐟛᯸ 再次用PBS洗两次，加入0.3ml的5mg/ml BSA，室温封闭1小时。一抗孵育 𐟐𐊧”萂S洗两次，取一张封口膜，标记好，加入25⵬的一抗（用5mg/ml BSA稀释1：50-100）。将盖玻片细胞面朝下反扣在一抗液滴上，放在湿盒中室温孵育1-3小时。然后小心夹起盖玻片，细胞面朝上放入原来的24孔板中，再用PBS洗两次。二抗孵育 𐟐‘ 取另一张封口膜，标记好，加入25⵬的二抗（羊抗兔罗丹明，用5mg/ml BSA稀释1：50-100）。将盖玻片细胞面朝下反扣在二抗液滴上，放在湿盒中室温黑暗中孵育1-3小时。 DAPI染色 𐟒™ 用PBS洗两次，将玻片与10⵬的DAPI（1ⵧ/ml in PBS，贮存液：1mg/ml in dd H2O）室温孵育1-5分钟。封片与观察 𐟔슧”萂S洗三次，擦干玻片背面的水分，封片于载玻片上，标记好（时间、细胞名称、实验内容、号码）。待封片胶干后，可以在荧光显微镜下观察。观察时注意记录每张玻片的内容，以免混淆。观察完后将玻片放-20℃保存。简化操作 ⚡ 如果你只观察转染了EYFP的荧光蛋白，不需要给内源蛋白染色，可以直接用DAPI染核后封片。为了保证实验的重复性，每次最好做平行2组以上。对照组设置 𐟧ꊤ𛥂SA (5mg/ml)代替一抗，二抗照加为染色的对照组，做法同上。希望这些步骤能帮到你，让你的细胞染色实验更加顺利！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

MTT细胞增殖实验全流程详解 𐟓š 方法步骤：标记96孔板：取5块96孔板，分别标记d1~d5。将每块板划分为四个区域，分别标记四种病毒名称。每个区域分为三组细胞：CON、NC、KD，每组细胞有5个副孔。准备好血球计数板。细胞准备：将对数期细胞消化后，以4.5 1500 rpm离心3分钟，去掉上清液，用培养基重悬制成细胞悬液。细胞计数：吸取10细胞悬液，沿盖玻片一边缓慢加入，进行细胞计数。铺板：根据细胞生长速度决定铺板密度（多数为2000cell/well），铺板时注意混匀细胞。调整细胞密度：统一铺好后，待细胞完全沉淀下来，在显微镜下观察各实验组的细胞密度。如果密度不均匀，则固定一组，微调其他组细胞的量（如：发现CON组细胞较多，则可再次铺入时，90~60%的量铺板）。再次铺入96孔板中。加入PBS：在孔板周围一圈加入适量PBS，防止培养板中细胞液被烘干。放入细胞培养箱中培养。 MTT实验：细胞贴壁后，取出标记d1的96孔板，每孔加入20 5mg/ml的MTT，轻轻震荡混匀。终止反应：反应4小时后，每孔加入100酸化异丙醇终止反应，震荡混匀。检测OD值：放入培养箱孵育反应至少4小时，用酶标仪595nm检测OD值。 𐟔젥ꌥŽŸ理： MTT实验是一种常用的细胞增殖和细胞毒性的检测方法。通过测定活细胞数量来评估细胞的生长情况。 𐟓Œ 注意事项：所有操作均在无菌条件下进行，确保实验结果的准确性。实验过程中注意细胞密度的均匀性，避免影响实验结果。 𐟓‹ 实验材料： 96孔板血球计数板离心机培养基 MTT溶液酸化异丙醇酶标仪 𐟔젩€š过以上步骤，您可以进行MTT细胞增殖实验，了解不同条件下细胞的生长情况。

细胞培养全攻略：从零开始到专家嘿，大家好！今天我们来聊聊细胞培养的基础知识，特别适合刚入门的小伙伴们。准备好你们的笔记本，我们开始吧！实验室介绍 𐟏š️ 首先，咱们得先了解一下实验室的基本构造。细胞培养实验室通常有三个房间：缓冲间、无菌操作室和准备室。每个房间都有特定的功能，比如缓冲间是防止空气对流，无菌操作室则是进行实验的地方。进入实验室前，记得换上专用的拖鞋和实验服，戴好口罩和帽子。主要设备 𐟔슧𛆨ƒž培养需要用到一些关键设备，比如培养箱、超净工作台、倒置显微镜等。培养箱是用来模拟体内环境，让细胞生长和繁殖的地方。超净工作台则是进行无菌操作的地方，确保实验环境干净无污染。倒置显微镜则是用来观察细胞的生长情况。细胞培养基础 𐟌𑊧𛆨ƒž培养分为原代培养和传代培养。原代培养是从机体中取出组织后进行的首次培养，而传代培养则是将原代细胞增殖到一定密度后，经过处理再转移到新的培养瓶中继续培养。传代的次数就是细胞的代数。无菌操作 𐟧𜊦— 菌操作是细胞培养的关键，所有与实验无关的物品一律不能带入实验室。进入实验室后，要穿戴好工作服、口罩和鞋套。吸管使用前、培养瓶开启之前以及合盖前都要在酒精灯附近操作，确保无菌环境。细胞传代操作 𐟧스𜠤𛣦“作需要用到胰蛋白酶和EDTA溶液来消化细胞。消化时间要把握好，一旦胞质回缩、连接变松散或有成片浮起的迹象就要立即终止消化。消化后的细胞要用无菌吸管吹打分散，然后分装到新的培养瓶中继续培养。注意事项 ⚠️ 严格无菌操作：所有操作都要在超净工作台内完成，确保无菌环境。适度消化：消化时间要把握好，避免过度消化导致细胞死亡。观察细胞形态：在消化过程中要注意观察细胞的形态变化，及时终止消化。好了，今天的细胞培养基础就聊到这里。希望对大家有所帮助！如果有任何问题，欢迎留言讨论哦！

𐟔젧𛆨ƒž增殖力揭秘：平板克隆实验全解析 𐟌𑠧𛆨ƒž克隆形成实验是生物学研究中的经典方法，它能够直观地反映细胞群体的依赖性和增殖能力。通过这个实验，我们可以了解到细胞在体外环境下的增殖情况，以及各种理化因素对细胞克隆形成能力的影响。 𐟔 实验目的 1️⃣ 评估细胞在处理后的增殖能力，通过克隆形成来观察细胞在培养板上的生长情况。 2️⃣ 探索不同杀伤因素（如药物、基因等）对肿瘤细胞增殖能力或群体依赖性的影响。 3️⃣ 预测细胞在体内的成瘤性，体外克隆能力越强，体内成瘤性越强，为体内实验提供参考。 𐟧ꠥꌨ所需材料：基础培养基（根据细胞类型选择）胎牛血清胰蛋白酶 PBS 青霉素-链霉素溶液（100X）多聚甲醛固定液结晶紫染液 Giemsa染液基本步骤： 1️⃣ 取对数生长期的细胞，用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中。 2️⃣ 将细胞悬液进行梯度倍数稀释，分别以每皿50、100、200个细胞的密度接种到含10mL预温培养液的皿中，轻轻转动使细胞均匀分布。 3️⃣ 将培养皿放入37℃、5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周，经常观察，当出现肉眼可见的克隆时终止培养。 4️⃣ 弃去上清液，用PBS小心浸洗2次，加入4%多聚甲醛固定细胞15分钟。然后去固定液，加入Giemsa染色液染色10～30分钟，用流水缓慢洗去染色液，空气干燥。 5️⃣ 将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼或显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数，最后计算克隆形成率。 𐟓Š 数据分析克隆形成率 = (克隆数 / 接种细胞数) 㗠100% 通过这个实验，我们可以深入了解细胞的增殖特性，为后续的实验研究提供有力的数据支持。

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