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质粒是最新娱乐体验_质粒是细菌的(2024年12月深度解析)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：话题更新日期：2024-11-30

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质粒电泳出现多条带？原因及解决方法详解 𐟘𑥜訿›行琼脂糖凝胶电泳时，发现胶上出现的不是单一条带，这可能是由什么原因引起的呢？让我们一起来探讨一下吧！ 𐟔正常情况下，质粒是双链闭合的DNA。但在质粒提取过程中，由于机械力、酸碱度或试剂等因素，质粒DNA链可能会发生断裂。在电泳过程中，这些断裂的质粒DNA可能会形成开环结构，甚至解开螺旋变成线形。因此，大多数质粒提取物中会含有三种构型的质粒。 𐟌€质粒的三种形态： 1️⃣ 线形DNA：两条链都断裂，呈线性分子； 2️⃣ 开环DNA：一条链断裂，呈松弛的环状分子； 3️⃣ 共价闭合环状DNA：两条链没有断裂，呈超螺旋结构。 𐟏Ž️这三种形态在电泳时的分离速度不同，分离率顺序为：超螺旋DNA > 线性DNA > 开环DNA。 𐟒᤺†解这些信息后，如果你在实验中遇到类似问题，就可以更好地理解和解决问题所在啦！

质粒那些事儿，必看小技巧！拿到质粒后，首先要确保你拿到的是全序列。最保险的做法是自己测序，至少要把核心区域测了。比如说，一个一万五六千bp的质粒，测个七八千bp的核心区域，也就几百块钱。这样能确保质粒没问题，后面再用也不怕浪费时间和推倒重来。有个网友做木本植物的基因编辑，稳定转化后拿到了100多个抗性芽，但检测不到靶基因编辑。我第一反应就是质粒有问题。建议他去测个序，结果发现cas9上有单核苷酸突变，很可能导致cas9功能丧失，核酸切割能力下降，最后检测不到基因编辑事件。还有一个例子是，有个年轻老师在国外做博士后时，实验室集中力量给一个中国博士做课题，想堆大文章。做到后期发现实验结果和假说反着来，总有些地方说不通。最后确定是质粒出了问题，测序发现质粒有突变。结果前面所有跟质粒相关的实验都得推倒重来，项目进度被大大拖延。那个老师当时又要回国，签证都快到期了，真是惨不忍睹。有些质粒的部分区域没有标出来，可以去NCBI上Blast，总会找到蛛丝马迹，甚至有的会很明确地标出来具体是什么东西。我最喜欢的画质粒图谱的软件是SnapGene，这个软件的厉害之处用过的人都知道，真的非常方便。在动手做质粒相关的实验前，一定要学会如何阅读图谱。看关键区域，每一个元件的作用都要轻车熟路才能去做下一步实验。质粒上的酶切位点，尤其是常用的，都要标出来。有的酶切位点是单个切点，有的有两个甚至多个。哪怕是构建载体这种小实验，也要事先把每一步在理论上都演练一遍，弄得清清楚楚，这样成功的概率才会高，才会真的节省时间。构建载体时建议把方案给有经验的人看看，有时候人是当局者迷，旁观者清。没发现问题最好，发现了问题也可以庆幸自己多留了个心眼。

萤火素酶互补实验技术全攻略 𐟔 实验细节解析 𐟓– 表达载体的选择构建成功的重组质粒是实验成功的关键。目标基因与报告基因必须在同一个阅读框，这是首要条件。其次，选择正确的融合位置也很重要。例如，NLuc通常位于目标蛋白的C末端，而CLuc可以位于N末端或C末端。为了更精确地检测NLuc和CLuc，表达载体中加入了3XHA标签，方便用HA抗体检测。 𐟔砨ᨨ𞾨𝽤𝓧š„构建随着克隆技术的进步，推荐使用In-Fusion反应进行载体构建，具体方法可参考试剂盒说明书。 𐟓Š 正负对照的设置每次实验都应设置正负对照以确保实验体系的可靠性。正对照可以选择已经发表的互作蛋白质对。负对照则应选用与待检测蛋白具有相似亚细胞定位但不互作的蛋白质，或者选择没有活性的突变蛋白。 𐟔 蛋白检测的重要性只有当融合蛋白正确表达时，才能判断目标蛋白之间是否存在相互作用。如果待测蛋白没有互作，即使正负对照都正常表达，也需要用WB检测待测目标蛋白质对在瞬时表达体系中的表达及表达丰度。 𐟔젥䧨焦表›‹白质互作的筛选和验证 LCA技术可以定性检测和定量检测蛋白质的互作，为大规模筛选和验证提供有力工具。

医学微生物学：细菌的形态与结构详解 𐟔젥Œ𛥭楾Ÿ物学：细菌的形态与结构思维导图细菌细胞膜的结构和功能 𐟌 细菌细胞膜与真核细胞膜在某些方面相似，但不含固醇类物质。它具有选择性通透作用，能进行物质转运。细胞膜的主要功能包括呼吸作用和生物合成作用。中介体 𐟌 中介体是细菌细胞膜向细胞质内陷形成的囊状或管状结构，多见于G+菌。它扩大了细胞膜的表面积，增加了酶的数量和代谢场所。核糖体 𐟌𐊦 𘧳–体是细菌合成蛋白质的场所，链霉素、庆大霉素等抗菌药物常作用于30s亚基，而氯霉素、红霉素等则作用于50s亚基。质粒 𐟔„ 质粒是细菌染色体外的遗传物质，存在于细胞质中，为环状闭合的双链DNA。它可在胞浆内自我复制，传给下一代，与细菌的遗传变异密切相关。胞质颗粒 𐟌Ÿ 胞质颗粒大多为细菌储藏的营养物质，包括多糖、脂类和多磷酸盐等。某些胞质颗粒嗜碱性强，当亚甲蓝染色时着色，称为异染颗粒。核质 𐟌€ 细菌的遗传物质为一闭合环状的双链DNA分子，反复缠绕、折叠形成的超螺旋结构，称为核质。习惯上亦称为细菌的染色体，是细菌遗传变异的物质基础。通过了解这些结构，可以更好地理解细菌的形态与功能，为医学研究和治疗提供参考。

𐟌𑥟𚥛 工程全解析：从基础到应用𐟔슰Ÿ“š基因工程是一种通过转基因技术，按照人们的愿望赋予生物新遗传特性的方法，创造出更符合人类需要的生物类型和产品。它在DNA分子水平上进行设计和施工，因此也被称为重组DNA技术。 𐟔祟𚥛 工程的来源主要是一原核生物的限制酶。限制酶能够识别双链DNA分子的特定核苷酸序列，并使其特定部位的磷酸二酯键断开，产生黏性末端或平末端。 𐟔饟𚥛 工程中常用的工具酶有Eⷣoli DNA连接酶和T4 DNA连接酶。Eⷣoli DNA连接酶只能将具有互补黏性末端的DNA片段连接起来，而T4 DNA连接酶则可以连接互补的黏性末端和平末端，但连接平末端的效率相对较低。 𐟎綠œ为载体，质粒是一种裸露的、结构简单、独立于真核细胞核或原核细胞拟核DNA之外的环状DNA分子，具有自我复制能力和多个限制酶切割位点。质粒可以在细胞内自我复制，或整合到受体DNA上，随受体DNA同步复制。 𐟔目的基因的筛选方法包括从相关的已知结构和功能清晰的基因中进行筛选，以及利用PCR技术获取目的基因。PCR技术需要一定的缓冲溶液、DNA模板、两种引物、四种脱氧核苷酸和耐高温的DNA聚合酶。 𐟌🥜覤物受粉后的一定时间内，可以通过花粉管通道法将含目的基因的DNA溶液直接注入子房中，或者将DNA溶液滴加在花柱切面上，使目的基因借助花粉管通道进入胚囊。 𐟌𑥆œ杆菌的特点是细胞内含有Ti质粒，当它侵染植物细胞后，能将Ti质粒上的TDNA转移到被侵染的细胞，并且将其整合到该细胞的染色体DNA上。通过农杆菌的转化作用，可以将目的基因插入Ti质粒的T-DNA中，使目的基因进入植物细胞。 𐟒‰在动物细胞中，可以通过显微注射法将目的基因导入受精卵中。在微生物细胞中，可以利用Ca2+处理细胞，使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态，然后将重组表达载体导入其中。 𐟔쩀š过PCR等技术可以检测受体细胞染色体DNA上是否插入了目的基因，以及检测目的基因是否转录出RNA。此外，还可以通过电泳鉴定PCR产物，在凝胶中DNA分子的迁移速率与凝胶的浓度、DNA分子的大小和构象等有关。 𐟌𑥟𚥛 工程在医药卫生领域的应用包括利用乳腺生物反应器生产药物、培育移植器官以及改进酶的性能或开发新的工业用酶等。在农业方面，可以通过改造某些参与调控光合作用的酶来提高植物光合作用的效率，增加粮食产量；同时也可以通过改造微生物蛋白质的结构来设计优良微生物农药，增强防治病虫害的效果。

研0也能搞懂基因过表达！𐟎“ 基因过表达到底是个啥？简单来说，就是把你想研究的基因复制到一个载体上，然后设计出一些特殊的引物，把这个基因从原来的地方扩增出来。接着，通过一些方法，比如酶切或者gateway技术，把这个基因插入到一个表达载体中。最后，把这个表达载体转到目标细胞里，让细胞大量表达这个基因和它编码的蛋白质。这样一来，你就能研究这个基因过量表达后的效果了。基因过表达有两种常见的方法：稳定过表达（稳转）：这个方法是把表达载体整合到细胞的染色体上，让细胞长期表达这个基因。适用于研究基因的长期效应和遗传定性。不过，缺点也很明显，效率低，耗时时间长。瞬时过表达（瞬转）：这个方法是把质粒转入细胞质中，让细胞在短时间内表达这个基因。适用于研究基因的短期效应和功能分析。但它的缺点是持续时间短，无法进行遗传分析，还会受到剂量效应的影响。表达载体的几个重要部分：启动子：比如CMV、U6、SV40、EF1퉯𜌥𛬦Ž祈𖥟𚥛 转录，让目的基因在不同的细胞类型、组织或发育阶段中得以表达。标记基因：比如抗生素抗性基因、荧光蛋白基因，这些基因能让细胞在特定条件下存活或死亡，用于筛选出成功转染的细胞。克隆位点：这是一种可以被特定酶切开的序列，用于插入目的基因。密码子：包括起始密码子和终止密码子，分别标志着蛋白质翻译的开始和结束。其他密码子是翻译编码氨基酸的，它们的顺序决定最终的表达蛋白。转染方法：物理方法：比如电穿孔、微注射、基因枪等，通过打破细胞膜让表达载体进入细胞。化学方法：利用化学物质包裹表达载体，形成复合物，通过与细胞膜结合或内吞作用进入细胞。常用的有钙磷共沉淀、脂质体介导法等。生物方法：利用生物载体携带表达载体，通过与细胞受体结合或感染作用进入细胞。比如病毒介导法、质粒介导法等。如果你还有什么疑问，欢迎在下面评论哦！𐟓쀀

分子克隆实验指南：从零开始到成功大家好！首先，非常感谢你们的关注和喜欢，真的很开心我的笔记能帮到大家。还记得最开始的那篇笔记，记录了我那次离谱的分子克隆实验，4个片段的同源重组竟然花了两个月！后来我慢慢发现，分子克隆其实非常微妙，有点像高中时的数学，学霸们轻而易举考100分，而我这种小学渣每次都在及格边缘反复横踩。所以，我想用这个账号记录我的科研日常，希望能和大家一起学习。之前的几篇笔记中，我分享过引物设计、载体酶切、同源重组等非常具体的实验方法。但最近我发现，很多粉丝朋友们刚开启自己的科研之旅，或者是偏向临床的科研大佬们，对分子克隆实验整体了解比较少。所以今天，我想跟大家分享一下质粒构建的大体流程。明确你的目标 𐟎斥…ˆ，在构建质粒之前，你需要有一个清晰的计划。明确你要使用哪种克隆方法，比如同源重组、TOPO克隆还是T4连接。TOPO/TA克隆不需要同源臂，而同源重组和T4连接是需要同源臂的。选择合适的载体 𐟚€ 根据你的实验目的，选择合适的表达载体。例如，常用的原核表达载体有pET28a，真核表达载体有pcDNA3.1，CRISPR/Cas9表达载体有Lenti-V2等等。载体可以通过酶切或者环形PCR后，跑胶回收所需的载体片段。设计引物并扩增片段 𐟔슦 𙦍€选的构建方法，设计并合成引物。PCR扩增需要插入的目的片段，PCR的产物也需要通过跑胶回收。连接与转化 𐟔„ 将载体和目的片段连接后，转入合适的感受态细胞内。例如，DH5˜“产生突变或者缺失，而Stable3相对更加稳定。但提质粒时需要使用试剂盒中的去蛋白液洗3遍，以充分去除核酸酶，减少后续对质粒酶切等实验的影响。通常连接产物的用量不超过总体积的1/20。然后在冰上静止20分钟，热激1分钟，再冰上静置3分钟，加入无抗的LB培养基，摇床摇40-60分钟，最后涂在合适抗性的LB平板上。培养与鉴定 𐟧ꊌB板子放在37度培养箱内过夜生长，第二天挑取单克隆细胞，置于合适抗性的LB培养基中摇菌，然后提质粒送测序公司测序。如果你想偷懒的话，也可以直接送菌液到公司哦，菌液和质粒的测序价格是一样的。今天就分享到这啦，希望这些内容对大家有用！如果有什么问题或者要补充的，欢迎评论或者私信哦！𐟘Š

分子克隆全攻略：从原理到操作分子克隆是生物学研究中的一项关键技术，主要用于分离、纯化和扩增特定的DNA片段。以下是分子克隆的主要步骤和原理：质粒提取 𐟌 碱裂解法：利用共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0～12.5的条件下，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，而共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互缠绕，仍会紧密地结合在一起。 PCR 𐟔슨š合酶链式反应（Polymerase Chain Reaction）：目的是在体外扩增特定的DNA条带。高温变性（Denaturation）：双链DNA在高温下变性，双链打开变成单链。低温退火（Annealing）：引物与模板DNA互补区结合。适温延伸（Extension）：模板DNA-引物结合物在Taq DNA聚合酶的作用下，以dNTP为原料，靶序列为模板，按碱基互补配对原则和半保留复制原理，引物沿着5'→3'的方向合成新的DNA链。 PCR产物纯化/胶回收 𐟧𜊧滥🃦Ÿ𑦳•：大多数离心柱中吸附DNA的是一层硅胶膜，实际上就是一层玻璃纤维，其表面有大量修饰的硅羟基（Si-OH），硅羟基在溶液中解离后带负电，然后与带正电盐离子、带负电DNA形成电桥，从而吸附住DNA，使得DNA双链变单链，不会被生物大分子溶剂洗脱，但能经水溶性缓冲液水化后，被定量回收，从而实现纯化分离。转化 𐟦 感受态细胞：指细菌在一定的生长阶段，能够吸收外来DNA的状态。转化是指将质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。原理：在0℃下的CaCl2低渗溶液中，细菌细胞膨胀成球形。转化缓冲液中的DNA形成不易被DNA酶所降解的羟基—钙磷酸复合物，此复合物粘附于细菌细胞表面。菌落PCR 𐟏𚊥ŽŸ理：这是一种用单个菌作为模板的鉴定方法，可以快速检测菌落是否为含目的质粒。希望这些信息能帮助你更好地理解分子克隆的原理和操作步骤，祝你在科研道路上顺利前行！

执业兽医考试微生物与免疫学口诀速记 𐟔 微生物与免疫学口诀速记： 1️⃣ 革兰氏菌分阴阳，共壁肽聚糖； 𐟌𑠩饅𐩘𓦀祣厚实，偏爱磷壁球； 𐟌Š 革兰阴性结构多，磷脂外膜和脂多。 2️⃣ 细菌的特殊结构： 𐟛᯸ 荚膜：多糖或多肽组成，抗吞噬、抗损伤； 𐟏ƒ‍♂️ 鞭毛：鞭毛蛋白构成，运动器官，与致病有关； 𐟤 菌毛：菌毛蛋白组成，粘附作用，与致病相关； 𐟔„ 性菌毛：F质粒编码，与遗传变异有关； 𐟌𑠨Š𝨃ž：细菌休眠形式，对外界抵抗力强，可发芽成繁殖体。 𐟓 记忆小技巧：荚膜就像防弹衣，保护细菌不受伤；鞭毛长长像腿脚，细菌运动全靠它；菌毛周身爱粘人，细菌致病靠它粘；芽孢就是木乃伊，等待重生再致病。

寒假科学实验：DNA提取与未来科技探索 𐟎‰ 初中学生们注意啦！想要了解如何撰写科学探究报告吗？寒假期间，上海草心科创教育基地为你提供了一个绝佳的机会！在这里，你可以接触到上海双一流大学的科学探究报告，并且有机会与生命科学专业的研究人员进行交流。 𐟔젦Ž⧴⥟𚥛 在日常生活中的奥秘，以及它们对未来的影响。例如，通过犯罪现场留下的蚊子血液残留，科学家们能够追踪到犯罪凶手，这就是DNA技术的应用之一。 𐟓… 活动主题：大肠杆菌质粒DNA的抽提 𐟑堩€‚合对象：5-9年级的学生 𐟓 地点：上海草心科创教育基地 𐟌Ÿ 寒假期间，快来加入我们，体验科学探究的乐趣，开启你的科技之旅吧！