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荧光淬灭最新视觉报道_荧光淬灭实验(2024年12月全程跟踪)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：热点更新日期：2024-12-03

荧光淬灭

荧光PCR探针技术全解析（上） 𐟔 探针的奥秘在PCR扩增的过程中，除了常规的引物，我们还会加入一种特异性的荧光探针。这个探针通常是一条寡核苷酸，两端分别标记了一个荧光报告基团和一个荧光淬灭基团或受体基团。 𐟌ˆ 荧光共振能量转移的原理荧光共振能量转移（FRET）是荧光PCR的核心原理。如果两个荧光基团的发射光谱与吸收光谱有重叠，当它们距离足够近时，供体被激发光激发后，能量会转移给受体，而不是发出荧光。 ➡️ 探针的种类 Taq-Man探针：这是一种线性的探针，标记在同一条寡核苷酸上，序列较短。在PCR扩增过程中，当探针完整地结合在DNA单链上时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收，检测不到荧光信号。随着PCR的进行，TaqDNA聚合酶的5’-3’核酸外切酶活性将探针水解，使得报告基团和淬灭基团分离，从而发出荧光。切割的荧光分子数与PCR产物的数量成正比，因此通过检测荧光强度可以监测PCR产物的扩增量。双杂交探针：这种探针在两条寡核苷酸上分别标记荧光供体基团和荧光受体基团。两条探针都可以与扩增产物杂交，但杂交位置不同但很接近。反应时，两条探针一头一尾杂交于扩增产物上，使得两个基团距离在10nm以内（一般1-5碱基），此时产生荧光共振能量转移现象，激发光下供体基团不发光，受体基团发光，检测受体基团的发光情况即可确认扩增产物的情况。分子信标探针：这种探针通常有一个茎环结构，茎部序列与目标DNA互补，环部序列则包含报告基团和淬灭基团。在未结合目标DNA时，环部被茎部束缚，无法发出荧光。当结合目标DNA后，茎部打开，环部暴露出来，发出荧光。蝎形探针：这种探针设计巧妙，可以同时检测多个位点。它通常包含一个公共茎部和一个环部序列，环部序列可以与多个目标DNA结合。当结合目标DNA后，公共茎部打开，环部暴露出来，发出荧光。 𐟔젦Ž⩒ˆ的选择在选择探针时，需要考虑其特异性、灵敏度和对实验条件的要求。每种探针都有其独特的优势和适用范围，具体选择要根据实验需求来定。 𐟓ˆ 实时监测PCR进程通过监测荧光的强度变化，我们可以实时监测PCR的进程和产物的扩增量。这种方法不仅提高了实验的准确性，还大大缩短了实验时间。 𐟔젤𘴥𚊨–�„应用在临床诊断中，荧光PCR技术因其特异性强、灵敏度高而得到广泛应用。它可以帮助医生更准确地诊断疾病和评估治疗效果。

免疫荧光染色封片技巧全攻略 1. 𐟧ꠦŠ—体选择：选择与目标蛋白特异性高、亲和力强的抗体，一抗浓度需通过预实验确定。过高浓度可能导致自发荧光增强。 𐟧ꠦŠ—体稀释：根据抗体说明书，使用合适的稀释液和比例进行稀释。 𐟧ꠂlocking：使用适当的Blocking液减少非特异性结合，通常采用动物血清，室温下封闭1小时，建议延长至2小时。低温时，可使用37℃孵育箱。 𐟧ꠤ𚌦Š—选择：选择与一抗种属匹配的荧光标记二抗。长时间4℃放置可能导致荧光素沉淀，建议配成工作液后高速离心，取上清使用。 𐟧ꠦ𔗦𖤯𜚦�“作后充分洗涤，去除未结合的抗体和染料。 𐟧ꠥ𐁧‰‡：选择合适的封片剂，避免荧光淬灭。 𐟧ꠥ﹧…種𞧽š设置阳性和阴性对照，确保实验结果可靠性。封片技巧：确保切片上没有多余液体，封片剂不宜过多。用10ul枪头吸取少量封片剂，点在每个样品边缘，缓慢盖片。滴加适量封片剂，避免气泡产生。用10ul枪头滴加约5ul/样品（根据组化笔大小调整），避免打出气泡！如果不小心产生气泡，可用镊子轻轻挤出。使用干净的盖玻片，轻轻按压，使封片剂均匀覆盖切片。避免在盖玻片上留下指纹或污渍。

浙大读博日常：细胞骨架免疫荧光初体验最近在浙大读博，终于鼓起勇气尝试了一下细胞骨架染色，用的是鬼笔环肽来标记微丝。虽然第一次做，但效果还不错，至少能清楚看到微丝的存在，真是让人开心得不得了。为了拍这些照片，我可是花了四个小时在共聚焦显微镜下，真是要看吐了。不过，老板花了五百大洋，值了！ 𐟓 实验步骤如下：固定细胞：用4%多聚甲醛室温下固定20分钟。破膜处理：加入0.1%的Triton X-100，室温下处理5分钟。封闭：用BSA封闭液室温下封闭0.5到1小时。一抗孵育：用OPN抗体，4℃过夜孵育。二抗染色：用AF488标记的二抗，室温下处理1小时。 Actin染色：用Tracker Red 555微丝荧光探针染色。 DAPI染色：用DAPI染料室温下处理10分钟。封片：用抗荧光淬灭封片剂（5ul）和指甲油封片。保存：用锡箔纸包好，4℃保存。有个小疑问，为什么细胞核有的大有的小？那些小小的细胞核是不是也是BMSC？还是说原代培养中混入了其他细胞？或者是还没长开的年幼BMSC？又或者是已经成骨分化的成骨细胞？顺便问一下，有没有好用的DAPI推荐？我这次用的DAPI染了十分钟，拍的时候电压调到180还要降背景才能拍出这种效果，真是累得不行。

英文名称：HCQ-1 Acid，BHQ-1 Acid CAS号：1190431-95-8 分子式：C26H28N6O5 分子量：504.55 规格：5mg，10mg，25mg 纯度：≥95% 外观性状：深紫色粉末供应商：陕西新研博美生物科技稳定性：-20℃以下冰冻、干燥、避光。溶解条性：溶于部分有机溶液。注意事项：避免频繁解冻，现配现用，保持干燥，避光。 HCQ-1 Acid（也称为BHQ-1 Acid，CAS号1190431-95-8）是一种高性能的荧光淬灭剂，属于Black Hole Quenche系列。它以其优异的淬灭效率和光谱特性而闻名，能够与多种荧光团配对使用，通过荧光共振能量转移（FRET）机制有效地降低背景荧光信号，从而提高荧光检测技术的灵敏度和准确性。在生物科学研究中，HCQ-1 Acid常被用于设计探针和标记物，以实现目标分子的高特异性识别和定量分析。

英文名称：AMCA-X SE 中文名称：AMCA-X琥珀酰亚胺酯 CAS号：216309-02-3 分子式：C22H25N3O7 分子量：443.5 激发波长：353nm 发射波长：442nm 规格：5mg，10mg，25mg 纯度：≥95% 外观性状：白色固体稳定性：-20℃以下冰冻、干燥、避光。溶解条性：可溶于DMSO或DMF 注意事项：避免频繁解冻，现配现用，保持干燥，避光。 AMCA-X SE（AMCA-X琥珀酰亚胺酯）是一种氨基活性的蓝色荧光染料，具有高度的荧光量子产率，能够发出明亮的荧光，其激发波长与汞灯的照射谱完美匹配。该染料广泛用于标记含有伯胺或仲胺的蛋白质或其他生物分子，其储存溶液通常使用无水DMF或DMSO制备，偶联反应在pH约为8.5的缓冲液（如0.1-0.2M的碳酸氢钠缓冲液）中进行。AMCA-X SE的储存条件为避光、-20Ⰳ，且运输时通常采用超低温冰袋以保持其稳定性。该染料对光敏感，因此在使用过程中应尽量避免长时间暴露在光线下，以减缓荧光淬灭。总之，AMCA-X SE是一种在生物化学研究中具有重要应用价值的荧光染料。

英文名称：5-FAM-X SE，5-FAM-X NHS 中文名称：5-羧基荧光素-X琥珀酰亚胺酯 CAS号：148356-00-7 分子式：C31H26N2O10 分子量：586.546 外观：黄色固体规格：5mg，10mg，25mg 纯度：≥95% 供应商：陕西新研博美生物科技稳定性：-20℃以下冰冻、干燥、避光。溶解条性：溶于部分有机溶液。注意事项：避免频繁解冻，现配现用，保持干燥，避光。 5-FAM-X SE，全称为5-羧基荧光素-X琥珀酰亚胺酯，广泛应用于生物标记领域。其化学结构在FAM荧光团和琥珀酰亚胺酯之间包含一个氨基己基间隔基（称为“X”），这一设计有助于减少荧光淬灭，提高标记效率。 5-FAM-X SE主要用于标记肽、蛋白质及核酸等生物分子，通过其绿色荧光特性，在生物学实验中进行可视化检测。此外，它还可用于配制各种小荧光分子，满足不同的研究需求。

试剂 | 基础知识概述（部分）: 中文名称：5-羧基荧光素-X琥珀酰亚胺酯，5-羧基荧光素-X活性酯英文名称：5-FAM-X SE，5-FAM-X NHS，5-FAM X NHS ester CAS：148356-00-7 分子式：C31H26N2O10 分子量：586.54 激发波长（nm）：494 发射波长（nm）：517 规格标准：1g、5g、10g 试剂厂家：陕西新研博美生物科技有限公司试剂 | 反应机理（部分）: 化学结构：在FAM荧光团和琥珀酰亚胺酯之间包含一个氨基己基间隔基（称为“X”），这一设计有助于减少荧光淬灭，提高标记效率。生物标记：5-FAM-X SE主要用于标记肽、蛋白质及核酸等生物分子，通过其绿色荧光特性，在生物学实验中进行可视化检测。荧光分子制备：它还可用于配制各种小荧光分子，满足不同的研究需求。试剂 | 细节注意（部分）: 纯度标准95%+ 保存建议：避免反复冻融，避光保存，储液应该立即使用，任何未用的溶液分装小份冷冻于 < -20Ⰳ 注意事项：仅用于科学研究

TQ6WS NHS：实验神器𐟔劰Ÿ”젔Q6WS NHS是一种高效荧光淬灭剂，以其出色的光稳定性、高灵敏度和良好的水溶性而备受青睐。无论在何种实验条件下，它都能保持稳定，帮助我们更准确地检测荧光信号。 𐟌€ 它的化学结构中包含一个琥珀酰亚胺（NHS）基团，这个基团就像一个“钩子”，能够牢固地抓住蛋白质或其他含有氨基的分子，形成稳定的共价键。这样不仅荧光信号被有效淬灭，而且蛋白质或其他分子的生物学活性也不会受到影响。 𐟌ˆ 因此，TQ6WS NHS在荧光免疫分析、荧光探针技术等领域有着广泛的应用。无论是研究细胞内的蛋白质相互作用，还是开发新型的荧光探针，它都能发挥出重要作用。 𐟑 总的来说，TQ6WS NHS能够提高实验的灵敏度和准确性，是实验研究中的得力助手。

BCECF AM探针：测pH须知 BCECF AM是一种广泛用于检测细胞内pH的荧光探针。它的化学名称为2',7'-bis-(2-carboxyethyl)-5-(and-6)-carboxyfluorescein,acetoxymethyl ester，是一种能够穿透细胞膜的荧光染料。BCECF AM本身没有荧光，进入细胞后被酯酶剪切形成BCECF，并滞留在细胞内。BCECF在特定pH值下激发产生绿色荧光，最大激发波长和发射波长分别为503nm和520nm，实际检测时推荐使用488nm的激发波长和535nm的发射波长。 BCECF AM不仅适用于哺乳动物细胞的研究，还用于动物组织、植物细胞、细菌和酵母等的细胞内pH水平检测。在细胞毒性、细胞凋亡、细胞粘附、药物抵抗、细胞趋化等过程中，BCECF AM被广泛应用。用于细胞内pH检测时，常用的BCECF AM浓度为1-10ⵍ。使用BCECF AM时需要注意以下几点： BCECF AM（pH荧光探针，5mM）可能对人体有害，操作时请做好适当防护。 BCECF AM在4℃或冰浴等较低温度下会凝固，使用时可以将其置于20-25℃的水浴中温育片刻，待其完全溶解后再使用。荧光染料容易发生淬灭现象，操作时请尽量避光，以减缓荧光淬灭。为了安全起见，操作时请穿实验服并戴一次性手套。通过以上注意事项，可以有效保证实验的准确性和安全性。

免疫荧光实验指南：2AX灶的检测大家好，今天我想和大家分享一下如何用免疫荧光的方法来检测2AX灶。这个过程其实挺简单的，但每个实验室可能有些小差异，欢迎大家讨论和指正，希望你们的实验都能顺利！细胞准备 𐟧ꊩ斥…ˆ，你需要准备一个2cm的共聚焦小皿，铺上大概30%-40%的细胞。消化的时候一定要看清楚，确保细胞消化成单个细胞，然后终止消化。第二天，你可以选择不同的照射剂量，比如4Gy。固定 𐟕’ 固定这一步很重要。我选择在照射后的0小时、0.5小时、4小时、8小时和24小时进行固定。具体操作是倒掉培养液，用PBS洗三次，然后加入4%的多聚甲醛固定15-30分钟。固定好后，再倒掉多聚甲醛，用PBS洗三次，最后一次泡在PBS里放在四度冰箱。这个步骤可以泡几天，我试过一周也没问题，但还是尽量及时进行下一步。通透和封闭 𐟕𓯸 接下来是通透和封闭。用0.5%的Triton X-100室温通透15分钟，然后用PBS洗三次。封闭的时候用5%的BSA封闭1小时。一抗和二抗 𐟒‰ 封闭后不用洗，直接敷一抗。我用的是CST的抗体，1:250和1:400都试过，效果都不错。四度过夜。第二天回收一抗，用PBS洗三次（我们组一直都是用PBS，大家可以根据自己的实验室情况调整）。然后避光孵育二抗1小时。回收二抗后，再用PBS洗三次。显镜拍照 𐟓𘊦œ€后一步是滴加抗荧光淬灭剂（含DAPI），然后上共聚焦显微镜拍照。如果没有这个含DAPI的抗淬灭剂，可以用DAPI染核5-10分钟，然后用PBS洗三次再上显微镜拍照。结果展示 𐟌Ÿ 最后，你可以看到DAPI（蓝色）、2AX（绿色）和合并后的图片。虽然手机拍的电脑屏幕不太清楚，但排版大概就是这样。希望这些步骤能帮到大家，祝你们的实验顺利！如果有任何问题或建议，欢迎随时讨论！

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