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免疫荧光共定位在线播放_荧光共定位的意义(2024年11月免费观看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-11-26

免疫荧光共定位

整体课题实验包括动物实验、CCK8检测、划痕测试、流式细胞分选、耐药株构建、线粒体膜电位测定、Transwell实验和平板计数等。通过动物饮食建模，诱导模型生成，并进行转录组分析、细胞测序、小管形成及克隆形成实验。采用WB、ELISA、蛋白质双向电泳、荧光定量PCR、质粒构建、免疫荧光共定位和免疫共沉淀技术。此外，还运用HE染色、Masson染色、PAS染色、共聚焦显微镜、透射电镜、Tunel荧光和ros荧光等多种方法。实验室日常、科研之路、读博的日子、研究生生活、医学生日常、生物实验室探索、医学之路、科研日常、医学研究生实验。「双胞胎生一个代一个」「张three」探索科学的奥秘的微博视频

分子互作基础课题组前期研究发现，催化多不饱和脂肪酸(PUFAs)氧合的12-脂氧合酶(ALOX12)是高水平ROS诱导的铁死亡应答的关键因子。在本研究中，PHLDA2是否通过ALOX12的ROS调控系统诱导铁死亡。第一步，确定ROS铁死亡系统的相互作用分子通过SFB标签抗体，进行IP-MS和IP-WB发现PHLDA2与ALOX12互作（图1a、b）。进一步通过内源抗体Co-IP双向验证PHLDA2与ALOX12存在相互作用（图1c-d）。而免疫荧光共定位实验发现PHLDA2和ALOX12能够同时共定位于细胞质（图1e），进一步佐证了PHLDA2-ALOX12复合体的存在。第二步，确定PHLDA2和ALOX12互作特异性 PHLDA2属于PH样结构域家族A，包括PHLDA1、PHLDA2和PHLDA3（图1f）。Co-IP实验分析发现，PHLDA1、PHLDA2和PHLDA3中，只有PHLDA2与ALOX12相互作用（图1h-i）。第三步，确定互作的结构域（严谨）为了确定PHLDA2与ALOX12互作的结构域，对PHLDA2分别构建PHLDA2全长、PHLDA2-PH、PHLDA2-H进行GST pulldown和Co-IP实验，发现ALOX12结合含有N端PH结构域(aa7-101)，但不结合含有C端结构域(H，aa102-152)（图2a-c）。另外，对PHLDA2分别构建PHLDA2全长、PHLDA2-BS、PHLDA2-S进行Co-IP实验分析，发现PHLDA2的高度保守的磷脂结合序列(BS，aa7-31)不是与ALOX12相互作用所必需的，但其旁边的一个小区域(S，aa32-101)是ALOX12的主要对接位点（图2a和2d）。以上结果证实：PHLDA2与ALOX12直接相互作用。ALOX12是ROS铁死亡的催化酶，这种互作是调控铁死亡必须的吗？需要进一步探究！全文分享：【《Cell Metab》解读：铆钉新型铁死亡机制！PHLDA2通过招募脂氧合酶介导磷脂过氧化铁死亡抑癌】。如有相关机制研究，欢迎留言探讨。 #科研#⠂ #coip实验#

IL-13诱导的线粒体铁死亡与自噬研究 𐟔젥œ襓˜细胞中，IL-13刺激后，15LO1蛋白在2小时内迅速增加，比LC3的脂化/激活提前了约4小时。五天后，通过免疫荧光（IF）分析发现，15LO1和LC3的染色和共定位主要发生在纤毛细胞中，特别是在其下纤毛区域。 𐟒‰ 分离线粒体部分后，通过特定蛋白质分析确认了纯化。IL-13增加了胞浆部分中的LC3-I和LC3-II。然而，只有LC3的活性形式LC3-II在响应IL-13时选择性地且特异性地在线粒体部分中增加，而非活性LC3-I则仅存在于细胞质部分。 𐟚레CQ预处理限制了自噬通量，进一步增加了线粒体部分中LC3-II的积累，从而支持主动自噬。在IL-13刺激后观察到线粒体标志蛋白NDUFB8和COXII减少。 𐟔„ 活化的LC3-II积累在线粒体部分，表明线粒体自噬形成。LC3-ATP合酶在相同的顶端/下纤毛区域共定位。15LO1 KD降低了胞质组分中的LC3-I和LC3-II，但特别降低了线粒体LC3-II的积累。 𐟔 15LO1 KD还降低了IF下的ATP合酶和LC3共定位。透射电子显微镜（TEM）在IL-13 + HCQ条件下发现了线粒体自噬双层膜。仅在IL-13/15LO1高水平条件下观察到吞噬线粒体碎片的特征性脂质双层。 𐟌€ 这些结果表明，铁死亡对线粒体膜的损伤随后激活了线粒体自噬。

雅酶膨胀胶：显微镜下的超分辨神器如果你手头有一台普通荧光显微镜，用了雅酶的膨胀胶后，它的效果甚至可以媲美共聚焦显微镜。如果你已经有共聚焦显微镜，那么膨胀胶能让你获得超高分辨率的图像，比如SIM（结构光照明）效果。同事们总结了一下，不管你用的是什么显微镜，只要加上膨胀胶，效果都会更好。下面我们来详细介绍一下这款产品。 ZX101：高分辨成像的秘密武器 𐟔슊ZX101正是基于这种技术开发出来的，特别适用于细胞爬片免疫荧光实验。它的优点如下：前沿科技：轻松实现高分辨成像，三维均匀放大样本。空间分辨率提高4倍左右，本色还原：3D均匀膨胀，生物分子的空间分布关系不受影响。快速高效：最快2小时内完成样品的均匀膨胀。物美价廉：用普通试剂的成本获得超高分辨的图像。操作视频：一看就会 𐟎劊膨胀显微试剂盒采用的是新型超分辨成像技术。技术借助可膨胀水凝胶，均匀地放大生物样本，应用于超高分辨成像、新细胞结构的微观结构分析、共定位分析等。普通荧光显微镜也能变超分辨 𐟌Ÿ 使用ZX101可以在普通荧光显微镜下获得高分辨的图像。比如，用普通荧光显微镜拍摄HeLa细胞爬片，进行HSP60（绿色）和tubulin（红色）的免疫荧光染色，抗体同共聚焦荧光显微镜（Nikon CSU-W1）拍摄的图片经过软件ImageJ反卷积处理后，你会发现共聚焦拍摄膨胀后的HeLa细胞效果更好。结语 𐟓 无论你是科研人员还是生物爱好者，雅酶的膨胀胶都能让你的显微镜效果更上一层楼。赶紧试试吧！

NSD3通过与PPP1CB结合抑制STAT3磷酸化为了探索NSD3调控STAT3激活的机制，进行anti-NSD3 IP-MS分析。发现丝氨酸/苏氨酸蛋白磷酸酶PPP1CB可与NSD3相互作用（图1a）。内源性和外源性Co-IP分析显示NSD3、PPP1CB和p-STAT3之间存在相互作用（图1b-c）。过表达NSD3的A549细胞中进行Co-IP实验，结果显示过表达NSD3可促进NSD3、PPP1CB和p-STAT3的结合，但过表达NSD3会降低p-STAT3的蛋白丰度（图1d）。此外，NSD3过表达或敲除不影响PPP1CB的水平（图1e-g）。免疫荧光也证实NSD3、PPP1CB和p-STAT3的共定位（图1h）。进一步验证PPP1CB对STAT3 727丝氨酸位点的调控功能。在NSD3敲除的细胞中过表达PPP1CB，结果显示PPP1CB存在可以抑制NSD3缺失引起的STAT3激活（图1i）。同时，NSD3抑制STAT3在727丝氨酸位点的激活，过表达PPP1CB可进一步抑制STAT3的激活（图1j）。这些数据表明PPP1CB是与NSD3结合催化p-STAT3 (Ser 727)去磷酸化并抑制HK2转录的磷酸酶。全文分享请查阅：【《Adv Sci》老树新花：组蛋白甲基转移酶的非表观功能！NSD3在抑制肺腺癌糖酵解中的作用机理】。如有相关机制研究，欢迎随时留言探讨。 #科研#⠣研究生#⠣实验外包#