SD序列最新视觉报道_rbs序列定义(2024年12月全程跟踪)
如何阅读质粒图谱:简单五步搞定! ꧬ줸步:首先找到 Ori 的位置,了解质粒的类型(原核、真核或穿梭质粒)。 ꧬ줺步:接着看筛选标记,例如抗性标记,决定使用哪种筛选标记。例如: Ampr:水解 酰胺环,解除氨苄的毒性。 tetr:阻止四环素进入细胞。 camr:生成氯霉素羟乙酰基衍生物,使之失去毒性。 neor(kanr):氨基糖苷磷酸转移酶使G418(长那霉素衍生物)失活。 hygr:使潮霉素䱦 ꧬ줸步:查看多克隆位点(MCS),它具有多个限制酶的单一切点,便于外源基因的插入。如果在这些位点外有外源基因的插入,会导致某种标志基因的失活而便于筛选。决定能不能放目的基因以及如何放置目的基因。 ꧬ쥛步:再看外源 DNA 插入片段大小。质粒一般只能容纳小于10Kb的外源DNA片段。一般来说,外源DNA片段越长,越难插入,越不稳定,转化效率越低。 ꧬ줺步:检查是否含有表达系统元件,即启动子-核糖体结合位点-克隆位点-转录终止信号。这是用来区别克隆载体与表达载体。克隆载体中加入一些与表达调控有关的元件即成为表达载体。选用那种载体,还是要以实验目的为准绳。 启动子:促进DNA转录的DNA顺序,这个DNA区域常在基因或操纵子编码顺序的上游,是DNA分子上可以与RNApol特异性结合并使之开始转录的部位,但启动子本身不被转录。 增强子/沉默子:为真核基因组(包括真核病毒基因组)中的一种具有增强邻近基因转录过程的调控顺序。其作用与增强子所在的位置或方向无关。即在所调控基因上游或下游均可发挥作用。/沉默子-负增强子,负调控序列。 核糖体结合位点/起始密码/SD序列(Rbs/AGU/SDs):mRNA有核糖体的两个结合位点,对于原核而言是AUG(起始密码)和SD序列。 转录终止顺序(终止子)/翻译终止密码子:结构基因的最后一个外显子中有一个 AATAAA 的保守序列,此位点 down-stream 有一段GT或T富丰区,这2部分共同构成poly(A)加尾信号。结构基因的最后一个外显子中有一个AATAAA的保守序列,此位点down-stream有一段GT或T富丰区,这2部分共同构成poly(A)加尾信号。
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