吖啶橙染色前沿信息_吖啶橙染色原理(2024年11月实时热点)
如何测量微生物的生物膜和运动性?슦⧴⥾物的生物膜和运动性是生物学研究的重要部分。虽然传统方法在文献中屡见不鲜,但科研人员总是寻求更精确、更高效的方法。 生物膜的测量: 将目标菌株在液体培养基中震荡培养。 将细菌悬液定量转移至96孔板,继续培养。 使用结晶紫染色剂进行染色。 利用多模式读板仪测量微生物膜的强度。 젧物膜发育情况的评估: 将细菌培养液接种于无菌载玻片上。 先后用结晶紫和吖啶橙染色剂染色。 在显微镜下检测生物膜的附着或生成程度。 ♂️ 运动性的测量: 将细菌培养液分别接种于不同琼脂含量的培养基上。 培养24至48小时。 分别在24和48小时时测量细菌群集运动的直径。 这些方法提供了对微生物生物膜和运动性全面而精确的了解,但科研人员总是不断探索新的、更有效的方法。𑀀
细胞凋亡检测的六大关键指标 细胞凋亡,也被称为程序性细胞死亡或细胞自杀,是一个在基因控制下主动结束生命的过程。它与细胞坏死不同,因为凋亡不会将细胞内容物释放到周围环境中。细胞凋亡在生物界普遍存在,无论是正常生理状态还是病理状态,它在胚胎发育、组织稳定、机体防御和免疫反应中都发挥着重要作用。 细胞凋亡的特征 细胞凋亡过程中会出现多种标志性生理现象。随着凋亡程度的加深,这些现象也会有所不同。 早凋时期: 细胞膜结构改变,磷脂酰丝氨酸(PS)外翻。 Bcl-2等凋亡相关蛋白激活。 胞内Caspase酶激活。 线粒体膜电势崩溃。 凋亡中期: 亚G1期细胞群增加。 晚凋时期: 细胞核皱缩。 DNA片段化。 细胞膜出芽,形成凋亡小体。 细胞凋亡的常见检测方式 슦观察: 通过光学显微镜或荧光显微镜观察细胞的形态学变化,如HE染色、吖啶橙染色、台盼蓝染色等,检测细胞凋亡。 Annexin V检测: 利用Annexin V与外翻的PS结合,通过检测荧光基团的信号判定凋亡发生情况。 检测激活的蛋白: 在细胞膜失去对称性后,某些凋亡相关蛋白被激活,如Bcl-2、BAX、FASL/TNFSF6、TNF-퉯过ELISA等方法测定这些蛋白的激活状态。 Caspase酶活性检测: 检测Caspase的活力来判定细胞凋亡情况。 JC-1检测: 正常细胞线粒体膜电位较高,JC-1可聚集发出红色荧光;当细胞发生凋亡时,线粒体膜电位降低,JC-1无法聚集,便以绿色单体存在。通过检测线粒体膜电位变化来判断凋亡发生情况。 TUNEL检测: 在细胞凋亡晚期,DNA片段化,断裂的DNA暴露出的3’-OH可以被末端脱氧核苷酸转移酶(TdT)催化,与荧光素标记的dUTP结合。通过TUNEL试剂盒检测DNA是否发生片段化,判定细胞凋亡。 通过这些方法,我们可以更深入地了解细胞凋亡的过程和机制,为疾病研究和治疗提供有力支持。
台盼蓝vs AO/PI,谁更胜一筹? 细胞计数和状态判断是生物学研究中的重要环节,其中台盼蓝染色法和AO/PI染色法是两种常用的方法。以下是这两种方法的详细介绍: 台盼蓝染色法 台盼蓝:蓝灰色粉末,溶于水,微溶于乙醇,不溶于其他有机溶剂。它是一种细胞活性染料,常用于检测细胞膜的完整性,从而判断细胞是否存活。 实验原理:活细胞胞膜结构完整,能够排斥台盼蓝,使其无法进入胞内;而丧失活性或细胞膜不完整的细胞,胞膜通透性增加,可被台盼蓝染成蓝色。因此,细胞膜完整性丧失通常意味着细胞已经死亡。借助台盼蓝染色,可以快速区分活细胞和死细胞。 染色浓度:一般成品试剂为0.4%的储存液,使用时需稀释10倍。 优点:价格低廉。 缺点:在PBMC分离过程中,红细胞可能残留,其大小与PBMC接近,台盼蓝法无法分辨红细胞与活的PBMC,可能导致浓度与活率差异;CHO细胞在培养过程中会产生细胞碎片和杂质,台盼蓝法无法准确区分。 AO/PI染色法 AO/PI:指吖啶橙(AO)和碘化丙啶(PI)的组合。 吖啶橙(AO):可以发出绿色荧光的DNA结合染料。 碘化丙啶(PI):可以发出红色荧光的DNA结合染料。 染色原理:AO可以通过完整的细胞膜,嵌入所有细胞的细胞核,呈现绿色荧光;PI只能通过不完整的细胞膜,即死细胞的细胞膜,嵌入所有死细胞的细胞核,呈现红色荧光。当两种染料均存在于细胞核内时,在合适的AO、PI配比下,两种染料发生能量共振转移,死细胞在绿色通道下激发出红色荧光。 染色浓度:一般都是买的成品试剂。 优点:弥补了台盼蓝染色法的不足;由于AO和PI为DNA结合染料,可有效排除杂质以及红细胞的干扰,确保对样品进行准确计数。 缺点:成品试剂的成本较台盼蓝高。 通过以上介绍,可以看出台盼蓝染色法和AO/PI染色法各有优缺点,选择时需根据具体实验需求和条件来决定。
细胞凋亡咋测?看这篇! 一、实验简介 啶橙(AO)和溴化乙锭(EB)是两种常用的荧光染色剂,它们在细胞凋亡检测中有着广泛的应用。吖啶橙能够透过完整的细胞膜,嵌入细胞核DNA,发出明亮的绿色荧光;而溴化乙锭则能透过受损的细胞膜,嵌入核DNA,发出橘红色荧光。通过这两种染料的组合使用,可以有效地区分活细胞、早期凋亡细胞、非凋亡的死亡细胞和晚期凋亡细胞。 二、实验材料及试剂 ꊥ啶橙 溴化乙锭 PBS缓冲液 三、实验步骤 细胞爬片:在6孔培养板中预先置入玻璃盖玻片,接种细胞悬液。干预后,用95%乙醇固定15分钟,然后进行荧光染色。将100mg/L的吖啶橙和100mg/L的溴化乙锭各5(临用前混合)加入PBS中,轻轻吹打,30秒后用激光共聚焦显微镜观察照相。 制作细胞悬液:取100 PBS稀释的细胞悬液,加入2的染色液(AO/EB各含100/ml),30秒后观察摄像。 四、实验所需试剂清单 序号 产品名 货号 CAS 备注 1 PBS缓冲液 HC2031 2 吖啶橙 SS2148 10127-02-3 3 溴化乙锭 SS0623 1239-45-8 通过这些步骤,你可以轻松地检测细胞凋亡,了解不同细胞的状态。希望这篇指南能帮助你顺利完成实验!
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