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1640培养基在线播放_1640培养基怎么配(2024年11月免费观看)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：导读更新日期：2024-11-29

1640培养基

细胞迁移与侵袭实验全攻略细胞迁移与侵袭实验是一种研究细胞行为的强大工具。通过将Transwel小室放入培养板中，可以模拟细胞在不同环境下的迁移和侵袭行为。以下是详细的实验步骤和注意事项： 𐟧ꠦ料准备显微镜：可拍照显微镜 Transwel小室：孔径8um，未包被胶的（Coste和Corning公司的也常用） 24孔板：与购买的Transwel小室相配套培养基：DMEM（含1%胎牛血清）和1640培养基完全培养基：DMEM和1640完全培养基（可加至20%血清）无菌PBS、棉签、胰酶、甲醇、结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS结晶紫） 𐟔砥ꌦ�ꤊ基质胶铺板使用BD公司的Matrigel，按1:8的比例稀释，包被Transwel小室底部膜的上室面，置于37℃30分钟使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液让细胞撤血清饥饿12-24小时，进一步去除血清的影响（这一步不是必须的）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用PBS洗1-2遍，用含BSA的无血清培养基重悬，调整细胞密度至5x105/ml。接种细胞取100细胞悬液加入Transwel小室。 24孔板下室一般加入600含20%血清的培养基。特别注意下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了。在种板时要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。培养细胞常规培养12-48小时（主要依细胞侵袭能力而定），24小时较常见。时间点的选择除了要考虑到细胞的侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。结果统计直接计数法：贴壁细胞计数，所谓的“贴”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去。通过给细胞染色可在镜下计数细胞。取出Transwel小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，用甲醇固定30分钟，将小室适当风干。0.1%结晶紫染色20分钟，用棉签轻轻去掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。400倍显微镜下随机五人视野观察细胞，记数。通过以上步骤，你可以观察到细胞的迁移和侵袭行为，并对其进行定量分析。

𐟔쥎Ÿ代细胞质粒转染实录𐟒‰ 𐟔探索原代大鼠主动脉平滑肌细胞的质粒转染之旅开始啦！𐟎‰ 在这场实验中，我们使用了Lipofect5000转染试剂，将GFP质粒注入第3代原代细胞中。𐟒– 让我们一起来看看转染后的真实反馈图吧！ 𐟓ˆ转染条件如下： - 试剂：Lipofect5000 - 质粒：GFP - 细胞代数：第3代 - 转染密度：85% - 培养基：1640培养基+10%胎牛血清（无抗生素） 𐟒᧻过24小时的荧光观察，我们发现转染阳性率高达80%以上！这真是令人兴奋的结果！𐟎‰ 想要了解更多关于质粒转染的实验细节？快来咨询我们吧！𐟓ž 𐟔쥎Ÿ代细胞质粒转染，我们用事实和数据说话！𐟒ꀀ

吉布科1640：细胞优选作为一名科研人员𐟔쯼Œ细胞培养是日常实验的必需品。最近，实验室尝试了Gibco的RPMI 1640培养基（货号11875093），效果令人满意！这款培养基专为哺乳动物细胞设计，适用于多种细胞系，尤其在免疫学和肿瘤研究中备受青睐。首先，它的营养成分非常均衡，包含细胞生长所需的氨基酸、维生素、无机盐和葡萄糖。无论是原代培养还是长期培养，细胞状态都非常稳定，生长良好𐟌𑣀‚此外，根据实验需求，还可以添加L-谷氨酰胺或其他补充剂，灵活性很高。值得一提的是，Gibco这个品牌的质量一直非常可靠，批次之间的稳定性非常好，每次培养的细胞状态都很一致。对于需要高重复性的实验，这一点非常重要！强烈推荐给需要高质量细胞培养基的科研伙伴们！

细胞培养的那些坑，你踩过几个？养细胞这事儿，真不是一般人能搞定的。有人说，细胞培养就像是在玩俄罗斯方块，稍有不慎，你的“细胞方块”就会堆错位置，然后整个系统就崩溃了。今天咱们就来聊聊那些让人心累的细胞培养细节。细胞复苏与保存：步步惊心 𐟧Š➡️𐟔劊刚复苏的细胞特别脆弱，需要你小心翼翼地呵护。为了不让它们莫名其妙地挂掉，你得先搞清楚每种细胞的习性。细胞复苏和保存这两个步骤看似简单，但实际操作起来却是一步一个坑。选择合适的培养液：四大金刚 𐟒‰ 不同的细胞需要不同的培养液。培养基里的“四大金刚”——MEM、DMEM、1640、F-12，基本上能覆盖90%以上的细胞培养需求。MEM是老大，能力全面，应用最广泛。DMEM则是老二，浓度高，分为高糖型和低糖型。1640中规中矩，营养成分简单，适合养淋巴细胞。而F-12则常用于支持某些特定细胞的生长。细胞生长空间：密度是关键 𐟌𑊊细胞生长的空间密度是细胞培养的关键。你不能让细胞瓶里的细胞拥挤得无法呼吸，也不能让它们太孤单。细胞接种前，需要通过细胞计数来调整浓度。这个步骤很关键，做不好就会让细胞“孤独死”。贴壁细胞形态不好怎么办？ 𐟤” 当培养的贴壁细胞形态不好时，可以在传代时先倒掉旧的培养基，加入新的培养基洗涤一次，然后用滴管吸走。接着再加入新的培养基，沿着瓶底轻轻吹打一遍，再吸走。这时再进行正式的消化和吹打。把吹打下的细胞悬液加入到含有新培养基的培养瓶内，置于培养箱里培养，按时间点观察细胞贴壁情况。找到完美的形态为止。培养基量：摸索中前行 𐟧ꊊ至于在培养瓶中加入多少培养基量，这需要你自己摸索。对于生长快的细胞，加少一点培养基会让细胞形态更好，但要注意换液时间的把握。总结细胞培养真的是一门手艺活儿，需要你不断摸索和尝试。每一个细节都可能影响到实验结果。希望这些小技巧能帮到你，让你的细胞培养之路更加顺畅！

华晨阳RPMI-1640细胞培养基在药物研发中发挥了什么作用？

合成培养基常见问题解答 𐟌𑊥ˆ成培养基在细胞培养中扮演着至关重要的角色，但使用过程中可能会遇到一些常见问题。以下是关于合成培养基的一些关键理化性质和选择合适培养基的指导。 𐟌᯸ 理化性质 pH：大多数合成培养基的pH值在7.2～7.4之间。随着细胞数量的增加和代谢活动的加强，二氧化碳不断释放，培养液会变酸，pH值会发生变化。通常使用酚红作为pH指示剂。缓冲能力：细胞培养基通常采用NaHCO3-CO2缓冲系统，因此细胞代谢产生的CO2是造成培养液pH波动的主要物质。渗透压：大多数哺乳动物细胞的适宜渗透压在260～320 mOsm/kg的范围内。温度：过高温度可能导致营养成分的降解或破坏，影响培养基的pH、离子强度和电解常数pKa。 𐟔 如何选择合适的培养基？ MEM培养基：适用于各种已建成细胞系和不同地方的哺乳动物细胞类型的培养，是最基本且适用范围最广的细胞培养基。 RPMI-1640培养基：广泛应用于哺乳动物、特殊造血细胞、正常或恶性增生的白细胞以及杂交瘤细胞的培养。 DMEM培养基：适用于许多哺乳动物细胞培养。低糖型适用于依赖性贴壁细胞，特别适合生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞；高糖型适合高密度悬浮细胞培养。 DMEM/F-12培养基：将DMEM与F12按照1：1混合，营养成分丰富，适用于多种哺乳动物细胞的生长，包括MDCK、神经胶质细胞、成纤维细胞、人内皮细胞和大鼠成纤维细胞。 McCoy's 5A培养基：含有还原型谷胱甘肽、细菌蛋白胨以及高浓度的葡萄糖，广泛用于多种类型的原代细胞的培养，如骨髓、皮肤、牙龈、肾、脾、肺、大鼠胚胎、网膜等。 Ham's F-12K培养基：在Ham's F-12的基础上提高了氨基酸和丙酮酸的浓度，降低了葡萄糖的用量，并修改了盐的成分和含量。最初设计用于培养原代人肝细胞以及分化的大鼠和鸡的细胞。 IMDM培养基：用于培养红细胞前体细胞和巨噬细胞。在DMEM的基础上添加了硒、HEPES、丙酮酸钠以及额外的氨基酸和维生素，营养非常丰富，适合快速增殖和高密度细胞培养。 Medium199培养基：含有独特的成分，包括腺嘌呤、腺苷、次黄嘌呤、胸腺嘧啶以及其他的维生素。最初用于鸡胚成纤维细胞的培养，现已广泛应用于各种动物细胞的培养，包括一些非哺乳类动物细胞。了解这些信息可以帮助你更好地选择和使用合成培养基，确保细胞培养的成功。

B16-F10细胞培养全攻略 𐟔젧𛆨ƒž基本信息英文名称：B16-F10 中文名称：小鼠皮肤黑色素瘤细胞种属：鼠源组织来源：皮肤品系：C57BL/6J 疾病：黑色素瘤 𐟌𑠧”Ÿ长特性与细胞形态生长特性：贴壁生长细胞形态：梭形细胞样；上皮细胞样 𐟔„ 传代与换液传代比例：1:2 ~ 1:4 换液频率：2~3次/周倍增时间：48-72h 𐟧ꠥŸ𙥅𛤽“系与条件培养体系：DMEM（高糖）+10%FBS+1%P/S 培养条件：5%CO2；37 ℃ ❄️ 冻存条件冻存液：Biochannel细胞冻存液程序降温：液氮长期保存 𐟌Ÿ 细胞培养特点 DMEM（含1.5g/L NaHCO3）培养基中生长良好，大部分品牌的DMEM含有较高浓度的NaHCO3（3.7g/L），若使用DMEM（3.7g/L NaHCO3）培养基培养细胞时需要提高CO2浓度（7%-10%）。推荐的基础培养基是DMEM（高糖）培养基。 DMEM培养的B16-F10细胞会分泌较多黑色素，而1640培养基则较少。可根据实验需求尝试更换培养体系，更换时建议留种。更换为DMEM培养液时，请确保血清和培养液质量，否则可能导致细胞不长、生长缓慢以及黑色素大量分泌。 𐟤” 常见问题解答收货时细胞出现伪足或碎片较多怎么办？受到运输影响，悬浮细胞会短暂性出现形态改变，如伪足等。通过传代培养，1周左右可以恢复正常。一些细胞在运输途中死亡而产生碎片，通过传代离心可以去除。培养过程中细胞发生贴壁怎么办？少量细胞贴壁属于正常情况，将细胞悬液转移至新瓶中即可。当贴壁细胞的比例高于20%，说明细胞生长环境有异常，需排查培养箱设置、培养基成分，以及培养器皿是否异常。培养过程中细胞发生聚团怎么办？少量细胞聚团，呈葡萄串状，属于正常现象，特别是细胞密度较低时。更换血清品牌或增大血清比例（不超过20%）有助于解决聚团问题。不建议将聚团的细胞吹散，等待密度高时，会自己分散开。培养基里一定要加巯基乙醇吗？ 巯基乙醇是一种常用的培养补充剂，有抗氧化的作用，可减少氧化应激对THP-1细胞的影响。当细胞密度过大但需要维持时，可适当增加巯基乙醇的比例（不超过标准量的1.5倍）。

细胞迁移与侵袭实验全攻略 𐟔젥ꌧ›„ 通过 Transwell 小室实验，研究细胞的迁移与侵袭能力，以及不同因素对细胞该行为的影响。 𐟓– 实验原理细胞迁移与侵袭实验将 Transwell 小室放入培养板中，小室内为上室，培养板内为下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。聚碳酸酯膜具有通透性，下层培养液中的成分可影响上室内的细胞。通过使用不同孔径和处理的聚碳酸酯膜，可进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等研究。 𐟧ꠥꌦ料可拍照显微镜 Transwell 小室（孔径 8） 24 孔板 BD 公司的 Matrigel 无血清 DMEM 含 1% 胎牛血清的 DMEM 和 1640 培养基 DMEM 完全培养基 1640 完全培养基（也可加到 20% 血清）无菌 PBS，棉签，胰酶，4% 多聚甲醛固定液或甲醇结晶紫染液（0.1% (g/ml) PBS 结晶紫） 𐟓 实验步骤基质胶铺板：用 BD 公司的 Matrigel 按 1:8 稀释，包被 Transwell 小室底部膜的上室面，置 37℃ 30min 使 Matrigel 聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。制备细胞悬液：让细胞撤血清饥饿 12 - 24h，去除血清影响（非必须步骤）。消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，用 PBS 洗 1 - 2 遍，用含 BSA 的无血清培养基重悬，调整细胞密度至 5㗱0⁵/ml。接种细胞：取细胞悬液 100 加入 Transwell 小室。在 24 孔板下室加入 600 含 20% 血清的培养基，注意避免产生气泡。常规培养 12 - 48h（依癌细胞侵袭能力而定，24h 较常见）。结果统计：取出 Transwell 小室，弃去孔中培养液，用无钙的 PBS 洗 2 遍，甲醇固定 30 分钟，将小室适当风干。用 0.1% 结晶紫染色 20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用 PBS 洗 3 遍。在 400 倍显微镜下随机五个视野观察细胞，记数。 𐟓Š 实验结果记录显微镜下观察到的细胞迁移与侵袭的数量及分布情况。 𐟒젥ꌨ分析实验结果，探讨细胞迁移与侵袭能力的变化原因，以及实验过程中可能存在的误差和影响因素。

T细胞的提取与培养指南（上） ### T细胞的提取 𐟧슥‡†备工作：将淋巴细胞分离液提前放在常温下复温，使用前记得颠倒混匀，避免影响实验效果。收集血液：取5ml新鲜人血，放入含有肝素抗凝剂的抗凝管中。然后取5ml PBS溶液，放入15ml的EP管中。接着将血液加入PBS中进行稀释。分离淋巴细胞：向EP管中加入5ml淋巴细胞分离液（淋巴细胞分离液：PBS：全血=1：1：1），将稀释后的全血沿管壁缓慢加入分离液中，使血液铺在分离液的上方，不能充分混合，保持中间液面清晰。离心分离：在室温条件下，以800g的转速用水平转子离心30分钟。将加速度与减速度设置成较慢的档位。收集细胞层：离心完毕后，EP管中的液体分为四层，管底部为红细胞，顶部为血浆或组织的匀浆层，中间层是细胞分离液，顶部的血浆层与中间部分分离液层的之间有较薄并且致密的一层白膜，即为淋巴细胞与单核细胞层。将这层致密的白膜缓慢吸到另一个15ml离心管中。洗涤细胞：加入三倍体积的PBS溶液将带有白膜的溶液进行稀释，充分颠倒混匀后，于室温以250g的转速用水平转子离心10分钟，随后弃掉上清，此步骤重复2次进行充分洗涤。 T细胞的提取与培养 𐟌𑊤𝿧”蔧𛆨ƒž分选试剂盒：该分选原理为，试剂盒中的磁珠将PBMC中的非T细胞成分结合，T细胞可以通过磁珠，收集流出液即可得到T细胞，从而将PBMC中的T细胞与非T细胞分离开来。孵育细胞：将细胞与磁珠进行孵育，以下体系针对107个细胞（不超过10ml外周血）进行操作。计数细胞：取出前期分离的PBMC，通过细胞计数确定其中的细胞数量。重悬细胞：向其中加入40的Buffer进行重悬混匀。标记T细胞：加入10 Pan T Cell Biotin Antibody Cocktail，进行吹打混匀后，将其放入4℃冰箱中避光孵育大约5分钟。再次重悬：从冰箱中取出后，加入30 Buffer进行重悬混匀。结合磁珠：随后向其中加入20 Pan T Cell MicroBeads Cocktail进行吹打混匀，将其放置于4℃冰箱中，避光孵育大约10分钟。分选T细胞：将分选柱安装在磁力架上，使用3ml Buffer对分选柱进行润洗。将样品加入分选柱中，收集管底流出的液体。样品流出后，再加入3ml Buffer对柱子进行润洗，将流出液收集起来。以上两部分流出液即为获得的T细胞。培养T细胞：将获得的T细胞用PBS溶液进行垂悬后，2000 rpm，离心四分钟，清洗两次后，加入1640完全培养基吹打混匀，铺于培养皿中进行培养。

大鼠原代巨噬细胞（BMDM）培养全攻略大家好！之前有朋友问我关于大鼠原代巨噬细胞（BMDM）的培养方法，今天终于有时间来分享一下我的经验啦！希望这些小建议能帮到那些和我一样曾经被这些小家伙们折腾得头大的同学们。首先，先说一下我的培养方法吧。我用的是M-CSF法，浓度大概在25-100ng/ml之间，这个区间都可以，浓度越高越好，当然也要看你的钱包厚度啦。血清浓度我用的是10%。选鼠和准备工作 𐟐튊我用的是4-8周的雄性SD大鼠，个人感觉4-5周的比较好用，质量上没啥太大差别，但数量上年龄大的会多一些。具体步骤如下：脱颈、摘腿、取骨：先把大鼠脱颈处死，然后摘掉腿，取出骨髓。剪两头、冲、过滤：把骨髓细胞剪成两段，用L-DMEM冲洗，200目过滤，离心重悬。培养和分离 𐟧ꊊ把骨髓细胞培养12-16小时后，取上清离心重悬，用含M-CSF的1640继续培养。这时剩下的贴壁细胞是间充质干细胞（MSC），如果不需要可以弃掉，需要的话可以用L-DMEM继续养。换液和保养 𐟌€ 第三天半换液（含M-CSF），第五天全换液（含M-CSF），第七天用PBS洗后换不含M-CSF的培养液。据说保养好的话，这些细胞最多可以活3周哦～常见问题解答 𐟤” 一只鼠能获得多少巨噬细胞？一只鼠可以获得一六孔板的量。 protocol严格吗？并不严格，除了最开始贴壁要足够，后续主要看因子浓度和细胞状态。贴得不多别着急换液，都贴了就没必要继续诱导了。有时候细胞急需用，我甚至会第四天全换液、第五天直接收。为什么我的BMDM会长角？这个问题真的困扰了我好久。后来发现长角不是状态不好，而是M2极化了。至少我后续诱导极化时获得的M2形态就是这些“长角M0”。避免这个问题有几种措施：换培养基：如果是H-DMEM，换成1640。贴壁步骤：这个步骤很重要，目的是分离出MSC，有大量研究表明MSC会促进巨噬细胞M2极化。这也是我建议用小鼠不用大鼠的原因，小鼠的MSC远没大鼠好活。先用rMSC喜欢的L-DMEM给人伺候贴舒服了，这时我们要的单核细胞全悬浮着，再取来诱导。检查M-CSF：我用的是国产某岸蛋白，分装冻-80后7个月效果就不好了。 PBS泡：试试PBS泡5-10分钟（适用于角没长很厉害的细胞）。小结 𐟓 接触这些细胞一年多，从啥都不会到用它毕业，对它们真是又爱又恨。总之希望能为科研界尽点微薄之力吧！祝大家顺利！

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