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转染试剂最新视觉报道_lipo3000转染说明书pdf(2024年11月全程跟踪)

内容来源:卡姆驱动平台所属栏目:热点更新日期:2024-11-29

转染试剂

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虽然我没做过对比,但是生工的siRNA+多纳的转染试剂太牛逼了[送花花]

【多宁生物与Branca Bun㺳达成战略合作,推进新型转染试剂市场应用】上海2024年11月6日 /美通社/ -- 日前,上海多宁生物科技股份有限公司(简称"多宁生物")宣布与Branca Bun㺳 Ltd.(简称"Branca Bun㺳")签署战略合作协议...网页链接

上一期内容介绍了如何构建质粒,然而成功构建质粒只是踏出了基因表达调控的第一步,要成功调控基因表达,还需要将质粒高效的递送到细胞内。本期小编将向大家介绍如何将质粒转染进宿主细胞。 广义上讲,转染是利用病毒感染以外的方式人工将核酸(DNA或RNA)导入细胞的过程。经过转染后,导入的核酸游离在细胞核中,可转录表达而不进行复制,也有极小部分会整合到受体细胞的基因组中,随宿主基因组一同复制。 作为最常见的转染载体,质粒DNA含有重组基因和调控元件,可以转染到细胞中,用于基因表达调控,研究基因的功能、基因产物的突变分析和生化表征以及基因表达对细胞健康和生命周期的影响。对哺乳动物细胞转染来说,除了合适的载体,转染方法和转染试剂对转染的成功率也起到决定性作用。 #汉恒生物##科研##质粒转染##质粒构建#

Lipo2K转染秘籍𐟔劣## 转染前的准备工作 𐟧ꊧ𛆨ƒž铺板密度:这个可是关键!根据Lipofectamine 2000(Lipo2K)的说明书,不同孔板的铺板密度有不同的建议。我用的是12孔板,铺板密度是2㗱05cells/孔。大概培养20小时后,细胞密度可以达到60-70%。转染前一定要检查细胞的生长状态,浓度最好在60-70%之间。太稀的话,转染后细胞会死亡(虽然我有一篇笔记里转化效率高,但因为细胞密度低,结果部分细胞死了);太浓的话,转染试剂无法有效输送到每个细胞中。 铺板的均匀度:这个对我来说是个难题。底部细胞密集而四周稀疏会影响转染效果。我最近发现一个有效的方法,就是把稀释好的细胞悬液充分混匀,加入孔板后不要晃动,静置5-10分钟。这样铺出来的板子特别均匀!不过我只在24孔板和12孔板这样试过,96孔板可能还是需要敲打一下。 培养时间:铺完板子后大约16-24小时就可以做转染了,注意观察细胞状态。 培养基是否含抗生素:说明书建议使用不含抗生素的培养基铺板,但对于293T细胞来说,含抗生素的培养基也可以使用。 质粒DNA转染 𐟌€ 准备质粒:这个过程一定要保证卫生! 质粒的量:根据说明书给出的建议质粒用量和Lipo2K用量,实际用量可以根据需求调整。 制备复合物(以12孔为例): 使用50 不含血清的Opti-MEM I培养基(或其他不含血清的培养基)稀释1ug DNA。轻轻混匀。 使用前轻轻混匀Lipo2K,然后取4在50  Opti-MEM I培养基中稀释。 混合(1)和(2)(总体积=100)。轻轻混匀并在室温下孵育15-20分钟(溶液可能变得浑浊)。注意:Lipo2K加入后会开始产生纳米球,应尽快将稀释好的Lipo2K加入混匀的质粒中。 将100 复合物轻轻添加至含有待转染细胞的孔中。通过轻柔的摇动平板轻轻混匀。 培养基可在4-6小时后更换(换液有助于减少Lipo2K转染导致的细胞毒性,对于293T细胞,不换也可以)。 将培养板放回细胞培养箱即可。18-48小时可见GFP表达。 希望这些步骤能帮到你,祝你实验顺利!𐟚€

外泌体作为天然的纳米级细胞外囊泡,因出色的生物相容性、稳定性、长效的体内循环时间以及精准的组织靶向能力,逐渐成为优化RNA递释的研究热点。然而,天然外泌体进入细胞主要依赖内吞作用,导致RNA分子易在溶酶体中被迅速降解,限制了其递释效率。中国科学院科学家团队采用外泌体工程化可控修饰策略,定量化调控了不同种类外泌体中胆固醇的含量如牛奶外泌体、生姜外泌体、肿瘤细胞来源的外泌体等,并利用透射电子显微镜等技术对其进行了全面表征。研究表明,外泌体膜中胆固醇含量的增加增强了其与靶细胞膜的相互作用,促使外泌体通过膜融合而非内吞途径进入细胞,降低了溶酶体降解的限制。同时,分子模拟研究显示,富含胆固醇的外泌体具有更强的膜变形能力,能够扩大其与细胞膜的接触面积,从而通过膜融合机制将小干扰RNA(siRNA)直接高效递送至细胞质内。体外实验中,富含30%胆固醇的牛奶外泌体(30% Chol/MEs)递送了PLK1 siRNA,下调了PLK1 mRNA和蛋白表达水平,诱导了肿瘤细胞凋亡,且其效果优于传统的转染试剂Lipo 2000和RNAiMAX。进一步,体内实验证实,30% Chol/MEs/siPLK1通过口服或静脉注射方式,在小鼠结直肠肿瘤模型中均能够有效抑制肿瘤生长,展现了其作为基因治疗载体的潜力[强]『前沿科技 | 中科院科学家等合作研究揭示胆固醇在外泌体递释RNA药物中的作用』前沿科技 | 中科院科学家等合作研究揭示胆固...

电转染实验细胞准备全攻略 1. 𐟌𑠧”𕧩🥭”前的细胞准备 使用entranster-E电转染试剂时,建议在电穿孔前1-3天进行细胞传代,以确保细胞在实验时处于指数生长期,达到最佳的细胞融合度。对于生长缓慢或原代细胞,可能不需要此步骤。 𐟔젧ᮥœ€佳细胞密度 不同细胞类型的最佳细胞密度有所不同。在含有电转试剂的终体系中,电穿孔时的细胞密度一般在1-10㗱0^6细胞/ml范围内。对于悬浮细胞,建议细胞密度接近10㗱0^6细胞/ml;对于贴壁细胞,推荐的细胞密度为1-5㗱0^6细胞/ml。 ⏱️ 孵育时间 确定每种细胞类型和实验的最佳电转染后的孵育时间。一般而言,最佳孵育时间为4-48小时。 通过这些步骤,可以确保电转染实验的成功进行,并获得最佳的实验结果。

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