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免疫印迹法前沿信息_免疫印迹法原理(2024年12月实时热点)

内容来源：卡姆驱动平台所属栏目：教程更新日期：2024-12-03

免疫印迹法

【常见的艾滋病病毒抗体初筛试验和确认试验方法有哪些？】#微访谈# 初筛的检测试验主要有酶联免疫吸附实验(ELISA）、凝胶颗粒聚集试验（PA）、免疫斑点试验、免疫层析试验等，HIV确诊试验主要使用免疫印迹法。

电转液 Western Blot（WB），即蛋白质免疫印迹法，是分子生物学、生物化学和免疫遗传学中的经典实验方法。它基于抗原-抗体的特异性结合，通过SDS-PAGE电泳分离和特异性抗体识别蛋白，最终通过显色技术检测目的蛋白。在进行WB实验的过程中，我积累了一些心得，分享如下：制胶小贴士 𐟧ꊨ‡ꥷ𑥈𖨃𖦗𖯼Œ玻璃片要完全洗干净，用纯水润洗后烘干。灌胶时不要用手拿灌胶的地方，因为手套上可能有灰尘和指纹。按比例配置下层胶，注意一定要放久一点，让下层胶完全凝固（五十分钟，如果室温低，可以加二倍的APS）。压胶时用纯水，加上层胶要速度快，然后立刻插上梳子。电泳液和电转液的使用 𐟌Š 电泳液和电转液要现配现用，旧的电泳液可以放在电泳槽外侧，内侧用新的。转膜液用新的，最多用两次，并且补无水甲醇（如果用回收的）。不同分子量的蛋白，尤其是大分子和小分子，一般要用不同的电转时间。据说分子量多少，转膜多少分钟（如果你的转膜是恒压95V），转过或者没转完，都会影响后续显色出的条带。一抗的选择 𐟒‰ 一抗不要贪图便宜买差的，CST的真的很好用，虽然贵了但是可以出结果。我们之前用affinity的孵不出来，换CST的就OK。个人经验分享 𐟓– 在进行WB实验时，自己要算好需要配几块胶，不要浪费。如果不确定，多配两毫升也是可以的。希望这些小贴士能帮助你更好地进行Western Blot实验！

𐟔젥ˆ†子生物学实验方法大揭秘 𐟔슰Ÿ“Š 测定用乙醇固定的DNA含量 𐟓Š 1️⃣ 培养细胞的DNA含量测定将细胞制成单细胞悬液，置于200ul的PBS缓冲液中。加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存。 2️⃣ 细胞固定的一般步骤取1~2㗱06个细胞于PBS（PH-7.2）缓冲液中。 300g离心5分钟，弃上清，反复两次。重悬细胞于0.5mlPBS缓冲液中。将细胞悬液放置于2~3ml冷70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30分钟。 3️⃣ 注意事项根据实验要求，固定剂也可选用1~3%多聚甲醛。乙醇作为固定剂时，应预冷至0~4℃。固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团。 𐟓‘ Western Blot(免疫印迹法) 𐟓‘ 主要包括以下4个基本步骤：样品制备电泳分离蛋白的膜转移免疫杂交与显色 𐟧ꠦ𚶦𖲥’Œ试剂 𐟧ꊱX磷酸盐缓冲液(PBS) Modified RIPA buffer 1XSDS样品缓冲液转移缓冲液 10XTris缓冲盐(TBS) TBS/T缓冲液封闭缓冲液(TBS/T) 一抗的稀释 𐟔젦 𗥓制备 𐟔슥ŽŸ始样品可为细胞、组织、培养上清、免疫沉淀或亲和纯化的蛋白。培养细胞或药物处理。弃培养基，用1XPBS漂洗细胞2次。加入1XSDS样品缓冲液，刮落细胞，转移到Ep管。超声10~15秒剪切DNA以减低样品粘性。煮沸样品5分钟。离心12000g.5min，取上清。 𐟓Š 电泳分离 𐟓Š 上样15~20ul至SDS-PAGE胶，电泳。 𐟔„ 转膜 𐟔„ 将电泳后的蛋白转移到膜上，进行免疫杂交与显色。 𐟒ᠦ示 𐟒ኤ𘀨ˆ줸Š样20~30ug已足够，如待检蛋白为低丰度蛋白，可加大上样量至100ug，但电泳条带易拖尾。可制备亚细胞组份或采用更敏感的检测方法。 𐟓ˆ 定量检测蛋白表达水平 𐟓ˆ 用RIPA裂解液裂解细胞，收集裂解液至离心管中。在振荡器上混匀4~15min，14000g离心15min（4℃），弃沉淀。用Bradford法或其它蛋白质测定方法测定上清中蛋白浓度。 𐟔젥ꌦ–𙦳•小结 𐟔슩€š过以上步骤，您可以准确测定用乙醇固定的DNA含量，并进行Western Blot实验，深入探索分子生物学的奥秘。

抽血能查出艾滋病吗？医生告诉你 𐟒•艾滋病通常是受到艾滋病毒感染所引起的，一般可以通过多种方法来进行诊断，包括抽血检查。抽血可以查出艾滋病。目前检测艾滋病的常用方法主要是通过血液检测艾滋病抗体、抗原或核酸。可以考虑做酶联免疫吸附试验，这是最常用的初筛试验之一。 𐟍检测血液中的艾滋病抗体，如果结果为阳性，需要进一步做确证试验。同时还可以做艾滋病抗原检测，通常在感染艾滋病病毒后2-3周左右，血液中可检测到艾滋病病毒p24抗原。抗原检测可与抗体检测联合进行，提高检测的准确性和早期诊断率。艾滋病病毒的核酸检测也是比较敏感的检测方法之一，通常在感染之后可以检测出病毒核酸。需要注意的是，一次检测结果不能确诊艾滋病，初筛阳性结果需要经过确证试验（如免疫印迹法等）来明确诊断。同时，应在有资质的医疗机构或疾病预防控制中心进行艾滋病检测，以确保检测结果的准确性和可靠性。艾滋病在感染之后会诱发一系列的临床症状，可以到图片当中进行详细观看，同时艾滋病是具有传染性的，会通过多种方式进行传播。 𐟍€今天这篇文章分享到这里就结束了，希望能够对艾滋病有一个大致的了解，如果还有其他不懂的问题，可以在评论区留言交流。

𐟔 泛素化修饰的检测技术大揭秘 𐟌Ÿ 泛素化是一种重要的蛋白质后翻译修饰，它广泛参与生命体的多种生理过程，如蛋白质降解、细胞周期调控、免疫反应和疾病发生等。因此，了解泛素化修饰的水平对于研究这些过程至关重要。 𐟓Œ 免疫检测法免疫检测法是泛素化修饰的常用检测方法。通过使用特异性抗体，可以准确地检测蛋白质是否泛素化。免疫印迹法（Western Blot）、免疫荧光检测和流式细胞术等都是常用的免疫检测技术。例如，泛素专一性抗体的应用，使得在电泳后的免疫印迹法中，可以清晰地看到泛素化蛋白的条带。 𐟓Œ 质谱检测法质谱技术也被广泛应用于泛素化修饰的检测。通过质谱，我们可以在单一蛋白质水平上定量泛素化程度，并鉴定特定的泛素化位点。例如，液相色谱串联质谱（LC-MS/MS）可以用于鉴定泛素化修饰的精确位置，以及定量泛素化水平。 𐟓Œ 活性检测泛素化是由三种酶联酶系统（E1、E2和E3）催化的。通过检测这些酶的活性，我们可以间接地了解蛋白质的泛素化水平。例如，通过实时荧光检测技术，我们可以监测酶催化反应的过程，从而了解泛素化水平。 𐟓Œ 细胞荧光报告系统利用细胞荧光报告系统，我们可以在活细胞中直观地观察和测量蛋白质的泛素化水平。这种方法使用含有荧光蛋白的报告基因，当蛋白质发生泛素化修饰时，该荧光蛋白会发出信号，从而可以检测到蛋白质的泛素化水平。具体选择哪种方法，需要根据具体的研究需求和实验条件来决定。

【常见的艾滋病病毒抗体初筛试验和确认试验方法有哪些？】「微访谈」[ 刘春馨 ] 初筛的检测试验主要有酶联免疫吸附实验(ELISA）、凝胶颗粒聚集试验（PA）、免疫斑点试验、免疫层析试验等，HIV确诊试验主要使用免疫印迹法。

【中山大学/南华大学合作发文：乳腺癌的潜在治疗靶点】本研究中，研究人员利用实时PCR、蛋白质免疫印迹实验和免疫组织化学对BC患者样本中的TBL2表达进行了分析，还采用Kaplan-Meier生存分析评估其预后意义。研究人员采用蛋白质组学分析、免疫沉淀试验和蛋白质免疫印迹法研究TBL2对AKT磷酸化激活的影响。网页链接

WB实验详细步骤：从零开始到结果解析蛋白免疫印迹（Western blotting 或 Immunoblotting）是一种常用的蛋白质检测技术，广泛应用于分子生物学和生物化学实验中。以下是详细的实验步骤，帮助你从零开始完成WB实验。 𐟧ꠥꌥŽŸ理蛋白免疫印迹技术主要由三部分组成：凝胶电泳、样品印迹和免疫学检测。 1️⃣ 凝胶电泳：首先进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳，使待测样品中的蛋白质按分子量大小在凝胶中分成条带。 2️⃣ 样品印迹：将凝胶中的蛋白质转移到固相支持物上，常用的材料有硝酸纤维素膜（NC膜）和PVDF膜。转移方法多为电泳转移，分为半干法和湿法，现在多采用湿法。 3️⃣ 免疫学检测：用特异性的抗体检测已经印迹在膜上的相应抗原。免疫检测方法可以是直接的和间接的，现在多用间接免疫酶标法。具体步骤如下：用特异性的第一抗体杂交结合。再用酶标的第二抗体（如碱性磷酸酶(AP)或辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗第一抗体的抗体）杂交结合。加酶的底物显色，或者通过膜上的颜色或X光底片上曝光的条带来显示抗原的存在。 𐟓 实验步骤准备样品：将待测蛋白质样品进行处理，使其适合进行SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳。进行凝胶电泳：将处理好的样品加入到凝胶中，进行电泳分离。样品印迹：将分离好的蛋白质条带转移到硝酸纤维素膜或PVDF膜上。免疫学检测：用特异性的第一抗体和酶标的第二抗体进行杂交，最后加酶的底物显色。结果解析：观察膜上的颜色或X光底片上的曝光条带，分析实验结果。通过以上步骤，你就可以完成一次WB实验，并得到相应的蛋白质表达水平检测结果。

蛋白质印迹法：从实验原理到应用场景 1. 𐟔젥ꌥŽŸ理 Western免疫印迹是一种将蛋白质转移到膜上，并通过抗体进行检测的方法。已知表达蛋白的检测可以使用相应的抗体作为一抗，而新基因表达产物的检测则可以通过融合部分的抗体来实现。与Southern或Northern杂交方法类似，Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝胶电泳，被检测物是蛋白质，探针是抗体，显色用标记的二抗。经过PAGE分离的蛋白质样品，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）上，固相载体以非共价键形式吸附蛋白质，且能保持电泳分离的多肽类型及其生物学活性不变。以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与酶或同位素标记的第二抗体起反应，经过底物显色或放射自显影以检测电泳分离的特异性目的基因表达的蛋白成分。该技术也广泛应用于检测蛋白水平的表达。 𐟓 实验流程（待补充） 𐟓Š 实验周期及交付结果形式 12个工作日内完成黑白显色图（带Marker）、内参、灰度值分析、柱状图、实验报告 𐟓ˆ 应用场景从蛋白质混合物中检出目标蛋白质定量或定性确定细胞或组织中蛋白质的表达情况用于蛋白质-蛋白质、蛋白质-DNA、蛋白质-RNA相互作用后续分析

𐟧엂、ELISA、IHC全解析𐟔 𐟒‰免疫印迹（WB）、免疫组化（IHC）和酶联免疫吸附试验（ELISA），这三大免疫学实验技术，你了解多少？今天就来一探究竟！ 𐟔엂（免疫蛋白印迹法Western Blot），是检测蛋白质特性、表达与分布的利器。通过SDS-PAGE分离蛋白质，再利用电转仪转移到固相载体上，通过抗原-抗体-标记物显色来检测样品，定性和半定量都靠它啦！ 𐟧쉈C（免疫组化Immunohistochemistry），融合了免疫学原理和组织学技术，让抗原在组织或细胞内无处遁形。通过化学反应使标记抗体的显色剂显色，定位、定性及定量都轻松搞定！ 𐟒ᅌISA（酶联免疫吸附试验Enzyme linked immunosorbent assay），则是用到了免疫学原理和化学反应显色。与IHC不同，它主要检测血清、血浆等样品，操作简便，定量准确，是分泌性蛋白检测的首选哦！ 𐟔这三大实验技术各有千秋，WB与IHC技术相比，定量可能更加准确；而ELISA与免疫组化技术相比，定量最准确。选择哪种技术，就看你的实验需求啦！

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